甲酸熏蒸對(duì)大蜂螨致死劑量及對(duì)工蜂的安全性

何潔 何楠 黃少康│文

福建農(nóng)林大學(xué)，福州350002

大蜂螨是西方蜜蜂的主要體外寄生蟲(chóng)。它寄生幼蟲(chóng)、蛹、成蜂，吸食血淋巴，傳播多種蜜蜂病毒，導(dǎo)致免疫力下降，化蛹率低，成蜂殘翅，體質(zhì)虛弱，蜂群繁育力下降，越夏越冬失敗，直到蜂群衰亡[1,2]?？刂品潋：κ俏鞣矫鄯滹曫B(yǎng)過(guò)程最重要的工作內(nèi)容。現(xiàn)有控制大蜂螨的方法常見(jiàn)有化學(xué)、物理方法，以及去蜂群管理法等[3,4]。氟胺氰菊酯（fluvalinate），氟氯苯氰菊酯（flumethrin），以及雙甲脒（amitraz），蠅毒膦（coumaphous），溴螨酯（bromopropylate）等化學(xué)殺螨劑殺螨快速，專一性好，但這些親酯性藥物長(zhǎng)期使用后，在蜂蠟中殘留而污染蜂蜜等蜂產(chǎn)品[5]，而且蜂螨也會(huì)產(chǎn)生抗性。比如，氟胺氰菊酯（螨撲）自1995年引入我國(guó)，經(jīng)20多年的使用，蜂螨對(duì)氟胺氰菊酯的抗藥性顯著提高，殺螨劑量已提高十倍，但效果卻大不如前。另一類天然有機(jī)物也常用于殺螨，如草酸、甲酸、麝香草酚、薄荷醇等，它們的水溶性特點(diǎn)使之不易在蜂蠟中殘留，蜂螨尚未見(jiàn)產(chǎn)生抗性，在許多國(guó)家廣泛使用[6]。

甲酸治螨始于1980年。國(guó)外許多研究者都曾研究過(guò)甲酸在蜂群中或離群狀態(tài)下的殺螨作用[7]。在美國(guó)及歐洲，它被封包于吸附材料內(nèi)，直接用于蜂群內(nèi)的蜂螨防治[8]。由于我國(guó)殺螨劑用藥歷史，以及蜂和螨的地域性差異，對(duì)我國(guó)大蜂螨，甲酸的殺螨效果還缺乏研究，因此，我們以福州意蜂及其寄生的大蜂螨為材料，對(duì)甲酸熏殺劑量和效果進(jìn)行了測(cè)試，以供養(yǎng)蜂實(shí)踐參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 意蜂：意蜂由福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院蜂場(chǎng)提供。

1.1.2 材料與儀器：甲酸（濃度＞88%，分析純），一次性透明塑料飯盒（300ml），指形管，酒精燈，可調(diào)整式定量移液器等。

恒溫恒濕箱（HPX-25085-111，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 甲酸對(duì)大蜂螨的熏殺作用：

（1）大蜂螨的獲取：提取大蜂螨危害嚴(yán)重的意蜂老熟子脾于恒溫恒濕箱（35±1℃，50±10%RH）中羽化，將出房24h時(shí)，隨機(jī)選取帶螨工蜂裝入用作熏蒸容器的一次性透明塑料飯盒中（帶蓋，蓋住嚴(yán)實(shí)不漏水），每盒30只工蜂，其中至少帶有15只大蜂螨。

（2）甲酸熏蒸：在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，設(shè)置6.3μl（0.021μl/ml），12.5μl（0.042μl/ml），19μl（0.063μl/ml），25.2μl（0.084μl/ml）4個(gè)濃度，以25.2μl純水為對(duì)照組，每個(gè)處理設(shè)置4個(gè)重復(fù)。

將相應(yīng)量的甲酸或純水裝入指形管中，將管插入塑料飯盒蓋子上，用酒精燈加熱指形管，使甲酸全部蒸發(fā)，計(jì)時(shí)5min，撤去指形管，再將盒子放入恒溫恒濕箱（35±1℃，50±10%RH）中，1 小時(shí)后統(tǒng)計(jì)大蜂螨死亡率，并觀察記錄初羽化工蜂的死亡情況。

大蜂螨死亡率=死亡螨數(shù)（只）/螨總數(shù)×100%

圖1 甲酸熏蒸大蜂螨的熏殺死亡率

圖2 甲酸熏蒸5min后意蜂成年工蜂的累計(jì)死亡率

1.2.2 甲酸對(duì)意蜂成年工蜂的熏殺作用：從3 群意蜂群中隨機(jī)抓取工蜂，每群取3 盒，每盒30～50 只工蜂，將它們分入試驗(yàn)組和對(duì)照組中，使得每個(gè)處理組的3 個(gè)重復(fù)均來(lái)自不同蜂群。甲酸熏蒸處理5min，然后將工蜂轉(zhuǎn)入透氣的飼養(yǎng)盒，再放入恒溫恒濕箱（30±1℃，50±10%RH）正常飼養(yǎng)，每天清理和統(tǒng)計(jì)死亡工蜂，每2 天更換一次50%蔗糖液，連續(xù)觀察記錄14 天。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用SPSS軟件對(duì)死亡率進(jìn)行平方根反正弦數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后，再進(jìn)行方差分析，比較各處理間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 甲酸熏蒸對(duì)大蜂螨的熏殺作用

用不同濃度的甲酸熏蒸蜂體上攜帶的大蜂螨5min后，結(jié)果表明，當(dāng)甲酸劑量達(dá)0.063μl/ml及以上時(shí)，1h后大蜂螨的死亡率均達(dá)100%；當(dāng)濃度為0.042μl/ml時(shí)，平均死亡率達(dá)60%以上；當(dāng)濃度為0.021μl/ml時(shí)，平均死亡率為20%以上（圖1），各組死亡率之間差異顯著（P=0.0003）。隨著甲酸劑量增加，大蜂螨死亡率增加，呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。

2.2 甲酸熏蒸對(duì)意蜂成年工蜂的安全性

在2.1的測(cè)試中，來(lái)自大蜂螨嚴(yán)重感染的初出房工蜂，經(jīng)所用4個(gè)濃度的甲酸熏蒸5min后，初出房工蜂均全部被擊倒，而對(duì)照正常，說(shuō)明甲酸熏蒸對(duì)蜂螨寄生嚴(yán)重的初出房工蜂有較強(qiáng)的致死作用。

對(duì)隨機(jī)取自蜂群中的工蜂熏蒸結(jié)果顯示（圖2），在14d內(nèi)，當(dāng)甲酸濃度低至0.013μl/ml時(shí)，平均累計(jì)死亡率為5.7±8.2%，與對(duì)照（6.2±3.8%）無(wú)顯著差異（P＞0.05）；濃度達(dá)0.05 μ l/m l 時(shí)，平均累計(jì)死亡率為26.8±41.9%，3個(gè)重復(fù)中的2盒，14d時(shí)，工蜂平均死亡率僅為5.3%和0；但第3盒處理1d后，52只有10只死亡，死亡率19.2%；9d時(shí)，又有23只突然死亡，9d的累計(jì)死亡率達(dá)75% ，與前2盒有較大差異。說(shuō)明不同蜂群的工蜂對(duì)甲酸的耐受程度有較大差異。推測(cè)某些工蜂的生理病理特征使之對(duì)甲酸特別敏感，具體原因值得進(jìn)一步研究。

3 討論

甲酸具有很好的抑菌性，亦可用于殺蟲(chóng)，在農(nóng)業(yè)上有廣泛應(yīng)用。甲酸殺螨不像氟胺氰菊酯等殺螨劑有良好的選擇性，除主要用于熏殺無(wú)子時(shí)蜂體上的螨，或無(wú)蜂時(shí)封蓋子脾內(nèi)的螨外，還在蜂群中使用，但使用不當(dāng)會(huì)傷及工蜂、雄蜂、幼蟲(chóng)以及蜂王[9]。為減少危害，就必須選擇能殺螨而不傷蜂的劑量，明確安全的使用劑量，指導(dǎo)養(yǎng)蜂實(shí)踐。

我們的試驗(yàn)表明，0.063μl/ml的甲酸熏蒸5min，可殺死全部大蜂螨。另一組試驗(yàn)也證明，處理2.5min，100%的殺螨效果（未發(fā)表數(shù)據(jù)）。盡管如此，0.05μl/ml的甲酸熏蒸仍可能導(dǎo)致部分工蜂死亡。Marine等（2006）試驗(yàn)顯示，一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)箱體內(nèi)用50%的甲酸85ml，放在蜂群頂部自然熏蒸一天，可熏殺蜂體上90%～95%的大蜂螨，但有百余只幼蟲(chóng)和蛹被拖出，0%～25%的蜂群丟失蜂王。因此，甲酸熏蒸對(duì)蜜蜂仍會(huì)造成少量損傷。甲酸自然熏蒸使用簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是藥劑使用劑量大，純甲酸劑量相當(dāng)于42.5ml/箱，大量藥物剩余，而按本試驗(yàn)結(jié)果用的甲酸汽化熏蒸僅需3.3ml/箱，相差16倍。自然熏蒸在蜂群中藥物濃度不均勻，剩余的強(qiáng)酸廢棄物還可能污染環(huán)境。相比而言，甲酸汽化熏蒸可以顯著減少使用劑量，提高處理效率，但需要使用汽（霧）化器。但甲酸殺螨的同時(shí)，仍會(huì)造成部分意蜂死亡，因此，減少單次使用劑量，縮短處理時(shí)間（如2.5min），增加熏蒸次數(shù)，有望減少對(duì)蜜蜂的損傷。對(duì)于斷子期蜂群治螨應(yīng)該是一種較好的選擇，具體參數(shù)仍需進(jìn)一步測(cè)試。

目前我們只檢測(cè)了甲酸熏蒸對(duì)本地夏季意蜂工蜂的影響，觀測(cè)時(shí)間2周，檢測(cè)數(shù)量有限，其他地區(qū)和季節(jié)的工蜂由于健康背景狀況的差異，耐受損傷的程度可能還會(huì)有差異。此外，由于甲酸對(duì)人皮膚、呼吸道等均有強(qiáng)烈刺激作用，使用時(shí)要注意做好防護(hù)。