祛濕健脾顆粒薄層鑒別研究※

方春雪 高梓漠 王法宇 楊文廣 高金良* 李慶杰*

（1 長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中醫(yī)藥研究中心，吉林 長春 130021；2 南昌大學瑪麗女王學院臨床醫(yī)學系，江西 南昌 330000；3 北京衛(wèi)生職業(yè)學院中藥與康復(fù)系，北京 100053；4 長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院風濕科，吉林 長春 130021）

類風濕性關(guān)節(jié)炎是一種涉及人體全身多個關(guān)節(jié)的慢性疾病，西醫(yī)治療藥物主要有水楊酸類和免疫抑制劑，容易出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)，且需要密切觀察患者的血液系統(tǒng)變化所引起的不良反應(yīng)。目前，中醫(yī)治療具有明顯改善癥狀、減輕痛苦，不良反應(yīng)小的特點，對治療類風濕性關(guān)節(jié)炎有很好的療效。

“祛濕健脾顆粒”是我院治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的院內(nèi)制劑，本方在臨床上應(yīng)用多年，具有良好的療效且不良反應(yīng)小，患者反饋良好，因此繼續(xù)開發(fā)其制劑，將有廣闊的前景。本文旨在進一步研究其薄層鑒別方法，并且形成一套完整合理的標準，為以后臨床安全用藥提供保障。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 儀器與試劑：瑞士卡瑪?shù)谋由V掃描儀（CAMAG TLC SCANNER3）；昆山市超聲波儀器有限公司生產(chǎn)的超聲波清洗機（功率250 W 和頻率20 KHZ）。

1.2 試藥 試藥由中國藥品生物制品檢定所提供；薄層色譜硅膠G 板為青島海洋化工廠生產(chǎn)，試驗用水選用娃哈哈純凈水，試劑均為分析純。見表1。

表1 試藥名稱及批號

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芪鑒別 取7.5 g 本品的粉末，向粉末中加入37.5 mL甲醇，置于超聲儀中超聲20 min。用濾紙過濾后，將濾液放在水浴鍋上，調(diào)節(jié)合適的水浴溫度，過濾液蒸發(fā)至干，向殘留物質(zhì)中加入20 mL 水使其溶解，用飽和正丁醇與溶解的物質(zhì)一起振搖，每次20 mL，洗3 次，將正丁醇液合并，并用正丁醇飽和氨水洗滌，每次20 mL，洗3 次，取正丁醇層放在水浴鍋上，調(diào)節(jié)合適的水浴溫度，過濾液蒸發(fā)至干，向殘留物中加入1 mL 甲醇，使溶液充分溶解，得到試驗用溶液。另取1 g 黃芪對照藥材，加入10 mL 甲醇，置于超聲波系統(tǒng)中20 min，然后用濾紙過濾，將濾液置于水浴鍋上使其完全蒸發(fā)，向殘留物中加入1 mL 甲醇，使對照藥材的溶液充分溶解。根據(jù)處方比，制備陰性樣品，其中不含黃芪，并根據(jù)供試溶液的制備方法獲得陰性樣品溶液。參照薄色譜法試驗，配三氯甲烷∶甲醇∶水三者比例為13∶7∶2 的混合溶液，將下層溶液用做展開試劑，然后風干，制備10% 硫酸乙醇溶液并均勻噴涂在薄層色譜板上，將烘箱溫度調(diào)節(jié)至105 ℃進行烘烤，觀察至斑點清晰可見然后取出，在紫外燈（365 nm）下觀察結(jié)果［1-2］。對照品及對照藥材薄層色譜與供試品的斑點顏色相同，并且在相同位置，陰性樣品不會引起干擾，分離良好且可重復(fù)。結(jié)果見圖1。

2.2 甘草鑒別 取本品粉末22.4 g，加入112 mL 甲醇至粉末中。置于超聲系統(tǒng)中30 min，用濾紙過濾，并將濾液置于水浴上。調(diào)節(jié)適當?shù)乃囟?，蒸發(fā)至干，加入15 mL 水溶解，用乙醚搖勻，每次20 mL，3 次后，把乙醚合并到一起，備用；用乙酸乙酯振搖萃取水溶液，每次加入20 mL，3 次，合并乙酸乙酯溶液。蒸發(fā)至干燥向殘余物質(zhì)中加入1 mL 甲醇，并充分溶解，得到試驗溶液。另外，取1.0 g 甘草對照藥材，參考供試品溶液方法操作獲得對照藥材溶液。依據(jù)處方比制備陰性樣品，樣品中無甘草，參考供試品溶液方法獲得陰性樣品溶液。按照薄色譜法試驗，配三氯甲烷∶甲醇∶水三者比例為13∶7∶2 的混合溶液，完全混溶，將下層溶液分離為薄層展開劑，充分展開后風干，準備10% 硫酸乙醇溶液，在薄層色譜板上均勻噴霧，并在105 ℃的烘箱中烘烤，觀察斑點清晰顯現(xiàn)，取出后在紫外燈（365 nm）下觀察結(jié)果［3-5］。對照品及對照藥材薄層色譜與供試品的斑點顏色相同，并且在相同位置，陰性樣品不會引起干擾，分離良好且可重復(fù)。見圖2。

2.3 白芍鑒別 黃芪的試驗溶液可作為白芍試驗溶液。取1 g 白芍，加入10 mL 甲醇，置于超聲波系統(tǒng)中20 min，用濾紙過濾，將濾液置于水浴上，調(diào)節(jié)水浴溫度，將濾液蒸發(fā)至干。向殘余物中加入1 mL 甲醇，使其充分溶解，作為參比藥材溶液。根據(jù)處方比制備陰性樣品，樣品不含白芍，參照供試品溶液法操作即得白芍陰性樣品溶液。依照薄色譜法試驗，配制三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸4 種物質(zhì)比例為40∶5∶10∶0.2 的混合溶液，完全溶解，用作薄層展開劑，展開并風干后用5% 香草醛硫酸溶液噴涂在薄層色譜板上，置于烘箱中，加熱并在105 ℃下烘烤，觀察薄層色譜板上的斑點清晰出現(xiàn)，取出后在日光下觀察結(jié)果［6-7］。對照品及對照藥材薄層色譜與供試品的斑點顏色相同，并且在相同位置，陰性樣品不會引起干擾，分離良好且可重復(fù)。見圖3。

2.4 青風藤鑒別 取8 g 本品，向其中加入40 mL 甲醇，并在超聲系統(tǒng)中超聲處理20 min，用濾紙過濾，將濾液放在水浴鍋上，調(diào)節(jié)合適的水浴溫度，把過濾液蒸發(fā)至干，溶于20 mL 水中，用堿性試液濃氨水把溶液的pH 值調(diào)到10 左右，然后用二氯甲烷萃取，每次用量為20 mL，3 次后，合并二氯甲烷層。通過用1 mL 甲醇溶解殘留物質(zhì)獲得試驗溶液。取1 g 青風藤對照藥材，用20 mL 甲醇超聲處理20 min，過濾后的濾液置于水浴鍋上，調(diào)節(jié)適當水浴的溫度，將過濾液蒸發(fā)至干，加1 mL 甲醇溶解，得到對照藥材溶液。根據(jù)處方比制備出青風藤的陰性樣品，樣品中不含有青風藤，取青風藤陰性樣品，照供試品溶液制備方法操作得陰性樣品溶液。參照薄層色譜法試驗，依次取5 μL 上述三種溶液，點樣在同一個硅膠G薄層板上，制備三氯甲烷∶甲醇∶水比例為13∶7∶2 的混合溶液，完全混溶，使用下層溶液當展開劑展開，然后風干，把10% 硫酸乙醇溶液均勻噴在薄層色譜板上，置于烘箱中，在105 ℃下烘烤，直至薄層色譜板上的斑點可清晰分辨，取出后在日光下觀察結(jié)果。對照品薄層色譜與供試品的斑點顏色相同，并且在相同位置，陰性樣品不會引起干擾，分離良好且可重復(fù)。見圖4。

圖1 黃芪薄層鑒別

圖2 甘草薄層鑒別

圖3 白芍薄層鑒別

圖4 青風藤薄層鑒別

3 總結(jié)

采用薄層色譜法對祛濕健脾顆粒中黃芪、甘草、白芍、青風藤進行了質(zhì)量控制研究，并對其進行了方法學考察，結(jié)果表明，該方法穩(wěn)定可重復(fù)，各項指標均符合有關(guān)規(guī)定，并無陰性干擾。因此，以上方法在祛濕健脾顆粒的應(yīng)用為該制劑質(zhì)量標準的建立，為該藥的臨床應(yīng)用提供了保障。