通竅滌痰方對(duì)急性腦梗死病人細(xì)胞因子、血管內(nèi)皮功能及外周血單核細(xì)胞microRNA-155、microRNA-212表達(dá)的影響

王 玲

近年來隨著人們生活水平的不斷提高，糖尿病、高血壓病增多，導(dǎo)致腦血管病發(fā)病率逐年上升[1]。因此，臨床上尋找及時(shí)有效治療腦血管病的方法對(duì)促進(jìn)腦血管病康復(fù)、降低腦血管病死亡率具有重要意義[2]。目前，西醫(yī)治療急性腦梗死方法主要包括神經(jīng)保護(hù)、改善微循環(huán)、抗凝、抗血小板聚集及溶栓等治療，但其效果并不十分理想[3-4]。中醫(yī)藥對(duì)中風(fēng)病的認(rèn)識(shí)及治療歷史悠久，療效確切，不良反應(yīng)小，且思路多樣化，已在臨床上廣泛應(yīng)用[5-6]。本研究旨在探討通竅滌痰方對(duì)急性腦梗死病人細(xì)胞因子、血管內(nèi)皮功能及外周血單核細(xì)胞microRNA-155和microRNA-212表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年6月—2019年1月我院收治的急性腦梗死病人98例，符合《全國(guó)第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議紀(jì)要》[7]和《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)》[8]中關(guān)于急性腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)，中醫(yī)辨證屬風(fēng)痰瘀阻證，癥狀主要表現(xiàn)為半身不遂、口舌歪斜、不語(yǔ)或言語(yǔ)謇澀、痰多而黏、頭暈?zāi)垦！⑸噘|(zhì)暗淡、舌苔白膩或薄白、脈弦滑。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組與觀察組。對(duì)照組49例，男28例，女21例；年齡47～72(59.83±7.38)歲；發(fā)病至入院時(shí)間3～46(20.32±3.14)h。觀察組49例，男30例，女19例；年齡43～74(60.37±6.58)歲；發(fā)病至入院時(shí)間4～45(21.17±2.56)h。兩組性別、年齡、發(fā)病至入院時(shí)間等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)顱腦磁共振成像(MRI)或者CT證實(shí)為腦梗死，均為急性發(fā)病，且病人于發(fā)病48 h內(nèi)入院接受治療者；首次發(fā)?。徊∪酥橥獠⒑炇鹬橥鈺?。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①有腦外傷、腦腫瘤、風(fēng)濕性心臟病等疾病者；②心、肺、肝、腎功能嚴(yán)重異常者；③精神疾病者；④合并全身嚴(yán)重感染、腫瘤等；⑤過敏體質(zhì)者。

1.4 治療方法 兩組入院后給予常規(guī)處理，包括補(bǔ)液及給予血管擴(kuò)張劑、降壓、利尿及自由基清除劑等。對(duì)照組給予依達(dá)拉奉注射液30 mg加入20 mL生理鹽水中靜脈輸注，每日1次。觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上加用通竅滌痰方治療，組方：天麻10 g，鉤藤10 g，白菊花10 g，川芎5 g，桑枝15 g，郁金6 g，石菖蒲6 g，遠(yuǎn)志5 g，竹茹6 g，陳皮10 g，木香3 g，蓮子心3 g，夜交藤12 g，麥冬10 g。取上述諸藥水煎，每日1劑，分兩次服用，早晚溫服，每次服用150 mL。兩組療程均為14 d。

1.5 療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 基本痊愈：病人美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評(píng)分減少91%～100%，主要癥狀、體征消失；顯著進(jìn)步：病人NIHSS評(píng)分減少46%～90%，主要癥狀、體征明顯改善；進(jìn)步：病人NIHSS評(píng)分減少18%～45%，主要癥狀、體征改善；無效：病人NIHSS評(píng)分減少18%以下，主要癥狀、體征無改善。

1.6 觀察指標(biāo) ①觀察兩組治療前日常生活活動(dòng)能力(Balthel指數(shù))和神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分(NIHSS評(píng)分)變化。②觀察兩組治療前后細(xì)胞因子變化，包括白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)，分別于治療前與治療14 d時(shí)抽取外周靜脈血，分離血清，于-20 ℃下保存待測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定IL-6、TNF-α和IL-8水平。③觀察兩組治療前后血管內(nèi)皮功能變化，包括一氧化氮(NO)和內(nèi)皮型NO合成酶(eNOS)，分別于治療前與治療14 d時(shí)抽取外周靜脈血，分離血漿，于-20 ℃下保存待測(cè)，采用硝酸還原酶法測(cè)定NO水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定eNOS水平。④觀察兩組治療前外周血單核細(xì)胞microRNA-155和microRNA-212表達(dá)，分別于治療前與治療14 d時(shí)抽取外周靜脈血3 mL，提取總RNA，利用mirVana PARIS miRNA抽取試劑盒提取總RNA，以TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)miRNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。以U6作為內(nèi)參，計(jì)算△Ct獲得miRNA的相對(duì)表達(dá)量，Ct miRNA-Ct U6=△Ct。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床療效比較(見表1)

表1 兩組臨床療效比較

注：兩組總有效率比較，χ2=7.900，P<0.05

2.2 兩組治療前后Balthel指數(shù)和NIHSS評(píng)分比較 兩組治療前Balthel指數(shù)和NIHSS評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩組治療后Balthel指數(shù)較治療前升高(P<0.05)，而NIHSS評(píng)分較治療前降低(P<0.05)；觀察組治療后Balthel指數(shù)評(píng)分高于對(duì)照組(P<0.05)，而NIHSS評(píng)分低于對(duì)照組(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組治療前后Balthel指數(shù)和NIHSS評(píng)分比較(±s) 分

與同組治療前比較，1)P<0.05；與對(duì)照組治療后比較，2)P<0.05

2.3 兩組治療前后細(xì)胞因子變化比較 兩組治療前血清IL-6、TNF-α和IL-8水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩組治療后血清IL-6、TNF-α和IL-8水平較治療前降低(P<0.05)；觀察組治療后血清IL-6、TNF-α和IL-8水平低于對(duì)照組(P<0.05)。詳見表3。

表3 兩組治療前后細(xì)胞因子變化比較(±s)

與同組治療前比較，1)P<0.05；與對(duì)照組治療后比較，2)P<0.05

2.4 兩組治療前后血管內(nèi)皮功能變化 兩組治療前血漿NO和eNOS水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩組治療后血漿NO和eNOS水平較治療前升高(P<0.05)；觀察組治療后血漿NO和eNOS水平高于對(duì)照組(P<0.05)。詳見表4。

表4 兩組治療前后血管內(nèi)皮功能變化(±s)

與同組治療前比較，1)P<0.05；與對(duì)照組治療后比較，2)P<0.05

2.5 兩組治療前后外周血單核細(xì)胞microRNA-155和microRNA-212表達(dá)比較 兩組治療前外周血單核細(xì)胞microRNA-155和microRNA-212表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩組治療后外周血單核細(xì)胞microRNA-155和microRNA-212表達(dá)較治療前降低(P<0.05)；觀察組治療后外周血單核細(xì)胞microRNA-155和microRNA-212表達(dá)低于對(duì)照組(P<0.05)。詳見表5。

表5 兩組治療前后外周血單核細(xì)胞microRNA-155和microRNA-212表達(dá)比較(±s)

與同組治療前比較，1)P<0.05；與對(duì)照組治療后比較，2)P<0.05

3 討 論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腦梗死屬“中風(fēng)”范疇，由于起病急驟、變化迅速、證見多端，與風(fēng)性善行數(shù)變的特征相似，故而以中風(fēng)名之[8-9]。中醫(yī)認(rèn)為腦梗死病機(jī)較為復(fù)雜，主要為血(血瘀)、氣(氣逆)、虛(血虛、氣虛、陰虛)、火(肝火、心火)、風(fēng)(肝風(fēng))、痰(風(fēng)痰、濕痰、痰熱)六端，此六端因素可發(fā)生多種轉(zhuǎn)歸：或由輕漸重，其表現(xiàn)主要為風(fēng)邪橫竄經(jīng)絡(luò)，每挾痰挾瘀[10-12]。風(fēng)痰瘀阻是中風(fēng)病常見的一種類型，由于病人長(zhǎng)期勞逸過度、飲食不節(jié)，臟腑功能失調(diào)，造成痰瘀等病理因素停滯血脈，致氣血通暢阻滯，發(fā)生半身不遂、猝然昏撲等[13]。因此，應(yīng)以平肝熄風(fēng)、活血通絡(luò)、豁痰開竅為治療法則。本研究采用通竅滌痰方治療，方中天麻、鉤藤、白菊花具有平肝熄風(fēng)功效，川芎、桑枝、郁金具有活血通絡(luò)功效，石菖蒲、遠(yuǎn)志、竹茹具有豁痰開竅功效，陳皮、木香、蓮子心具有行氣清心功效，夜交藤、麥冬具有養(yǎng)血安神功效?？v觀全方可奏平肝熄風(fēng)、活血通絡(luò)、豁痰開竅功效。本研究表明，通竅滌痰方治療急性腦梗死療效良好，且可改善病人日常生活活動(dòng)能力及減輕神經(jīng)功能缺損程度。炎癥因子與急性腦梗死發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。IL-6主要來源于腦組織神經(jīng)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞及T、B淋巴細(xì)胞等，是具有炎癥與免疫調(diào)節(jié)的多功能細(xì)胞因子，能夠激活血管內(nèi)皮細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等參與炎癥反應(yīng)過程，且證實(shí)為腦梗死的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[14]。TNF-α是機(jī)體重要的一種炎癥免疫調(diào)節(jié)因子，腦組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元可產(chǎn)生TNF-α，并且通過其激活作用在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面形成一種凝血酶激活復(fù)合物，促使纖維蛋白原沉積于血管壁上，從而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的產(chǎn)生[15]。IL-8主要來源于巨噬細(xì)胞，能夠誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞及T、B淋巴細(xì)胞分泌γ-干擾素，趨化中性粒細(xì)胞聚集于炎癥部位，使組織細(xì)胞直接損傷，促進(jìn)炎癥發(fā)生發(fā)展。有研究報(bào)道顯示，IL-8為腦損傷過程中重要的一種細(xì)胞因子[16]。本研究結(jié)果顯示，觀察組治療后血清IL-6、TNF-α和IL-8水平低于對(duì)照組，說明通竅滌痰方可通過降低IL-6、TNF-α和IL-8水平，減輕炎癥反應(yīng)。

血管內(nèi)皮功能與急性腦梗死發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，急性腦梗死病人存在血管內(nèi)皮功能損傷[17-18]。內(nèi)皮細(xì)胞主要通過釋放一系列血管活性物質(zhì)對(duì)血管代謝和運(yùn)動(dòng)進(jìn)行調(diào)節(jié)，其中NO是最重要的一種血管舒張因子，主要由eNOS催化L-精氨酸轉(zhuǎn)化而來，具有減少氧自由產(chǎn)生、抑制平滑肌細(xì)胞增殖、抑制單核細(xì)胞黏附、抑制血小板聚集和舒張血管等生理效應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，觀察組治療后血漿NO和eNOS水平高于對(duì)照組，說明通竅滌痰方可通過提高血漿NO和eNOS水平而改善血管內(nèi)皮功能。

microRNA是一類非編碼RNA，近年來發(fā)現(xiàn)其在腦卒中的發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色。microRNA-155是一種多功能微小RNA，在哺乳動(dòng)物的多種組織細(xì)胞中均表達(dá)，如成纖維細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等，主要通過靶向各種基因調(diào)控多種生物學(xué)作用，從而在疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有關(guān)鍵作用。近年來，研究發(fā)現(xiàn)microRNA-155在動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、血腦屏障及血管免疫炎癥等方面具有重要作用，而這些與腦卒中的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[19]。microRNA-212在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要調(diào)控作用。相關(guān)研究報(bào)道顯示，microRNA-212表達(dá)升高與缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加明顯相關(guān)，且認(rèn)為外周血microRNA-212及其所調(diào)控的下游信號(hào)通路在腦卒中發(fā)病中扮演重要角色[20]。本研究結(jié)果顯示，觀察組治療后外周血microRNA-155和microRNA-212表達(dá)低于對(duì)照組，說明通竅滌痰方可降低外周血microRNA-155和microRNA-212表達(dá)。

綜上所述，通竅滌痰方對(duì)急性腦梗死病人療效良好，可減輕炎癥反應(yīng)，改善血管內(nèi)皮功能紊亂及降低外周血單核細(xì)胞microRNA-155和microRNA-212表達(dá)。