金銀花連翹提取液聯(lián)合甘氨酸噴砂治療種植體周圍炎的療效評價

黃 玉, 仲 楊, 趙竹蘭, 張慶宇, 夏德庚, 張 莉, 馬 寧

（1. 吉林大學(xué)口腔醫(yī)院牙周科，吉林 長春130021；2. 吉林大學(xué)口腔醫(yī)院急診科，吉林 長春 130021）

種植體周圍炎是一種與牙菌斑相關(guān)的慢性炎癥，指牙種植體周圍組織發(fā)生的病理狀況和臨床病癥，其特征表現(xiàn)是種植體周圍結(jié)締組織出現(xiàn)炎癥反應(yīng)和支持骨的逐漸喪失［1-2］。據(jù)一項長達15 年的種植牙術(shù)后隨訪研究結(jié)果［3-4］顯示：種植體周圍炎的發(fā)生率最高可達53.5%，導(dǎo)致種植牙成活率降低，而對于種植牙周圍組織健康的種植體其成活率可高達91.5%。因此為了獲得種植牙治療的成功，保證種植體周圍組織的健康至關(guān)重要。

從藥用植物中提取的天然產(chǎn)物一直是藥用產(chǎn)品來源之一，其中許多活性物質(zhì)可用于治療多種疾病。金銀花中富含酚酸、類黃酮、花色苷和原花色素，這些化合物具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗微生物、抗癌、抗炎、清熱解毒和免疫調(diào)節(jié)等［5-6］。連翹的果實是一種重要的中藥，在《中國藥典》中有記載，具有解熱、解毒和抗炎作用［7］。二者擁有“花中雙壁，藥中兄弟” 的美稱［8］。有研究［9］表明：甘氨酸齦下噴砂在治療種植體周圍炎的過程中較單獨基礎(chǔ)治療效果更好，在糾正軟組織炎癥方面很有優(yōu)勢。金銀花和連翹在口腔疾病治療中的應(yīng)用已有報道［10］，但將兩者結(jié)合與甘氨酸噴砂聯(lián)合治療種植體周圍炎還鮮有研究報道。因此本研究將金銀花連翹的復(fù)合提取液用于甘氨酸齦下噴砂治療中，探討其對于種植體周圍炎治療的輔助作用效果。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取2018 年10 月－2020 年5 月于吉林大學(xué)口腔醫(yī)院就診的種植體周圍炎患者。種植體周圍炎診斷標(biāo)準(zhǔn)：探診深度（probing depth，PD） ≥5 mm；改良菌斑指數(shù)（modified plaque index，mPLI）≥1；改良齦溝出血指數(shù)（modified sulcus bleeding index，mSBI） ≥2；種植體周圍漸進性骨質(zhì)丟失＞2 mm［11］。納入標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)被診斷為種植體周圍炎的患者；②種植體周圍無竇道、松動、無咬合創(chuàng)傷；③12 個月內(nèi)未接受種植體周圍炎的相關(guān)治療，3 個月內(nèi)無全身用藥史；④無全身系統(tǒng)性疾病和相關(guān)治療史，配合研究，依從性良好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①影像學(xué)檢查種植體周圍骨丟失＞50%，種植體松動；②近期接受過種植體周圍炎相關(guān)治療，3 個月內(nèi)使用全身性抗生素；③可能損害傷口愈合并影響治療結(jié)果的全身性疾病、藥物或狀況；④妊娠或哺乳期女性；⑤每天吸煙10 支以上，對本研究所用藥物過敏，精神疾病，心和肺功能不全患者以及存在溝通障礙無法配合治療的患者。

經(jīng)篩選共納入研究對象56 例。本研究已通過吉林大學(xué)口腔醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核并批準(zhǔn)，已取得研究對象知情同意并簽署知情同意書。研究對象于研究期間陸續(xù)進入觀察，每位患者觀察時間為4 周。記錄每位患者的基本信息包括病歷號、姓名、性別和年齡以及治療前后的PD、mPLI、mSBI，并收集種植牙周袋內(nèi)齦溝液（peri-implant sulcular fluid， PISF），于實驗室檢測PISF 中白細(xì)胞介素6 （interleukin-6，IL-6）水平，于治療前及治療后的第1、2 和4 周對患者恢復(fù)情況進行觀察。盡可能控制其他條件保持一致，以增加可比性。

1.2 復(fù)合中藥制備方法復(fù)合中藥制備于吉林大學(xué)口腔醫(yī)院和吉林大學(xué)材料學(xué)院實驗室完成。稱量280 g 固態(tài)金銀花藥材，75%乙醇回流提取3 次，合并3 次的回流液后回收至無醇味，過濾。取其中1/2 濾液濃縮、抽濾后定容至1 000 mL 獲得金銀花溶液。稱量1 500 g 連翹藥材，75% 乙醇回流提取3 次，合并3 次的回流液后回收至無醇味，過濾。取其中1/2 過濾液濃縮、抽濾后定容制取1 000 mL連翹溶液。分別取以上獲得的2 種濾液各500 mL混合均勻、濃縮和抽濾后再定容至1 000 mL，即獲得混合藥品溶液，使其主要成分綠原酸、咖啡酸和連 翹 苷 含 量 分 別 約 為4.3、0.1 和2.5 g·L－1。于4 ℃保存待用［12］。

1.3 研究對象分組和治療方法本研究按照患者意愿分為2 組。①中藥組：共納入26 例；②對照組：共納入30 例。中藥組治療方法為齦上潔治和齦下刮治后將EMS 噴砂機中的蒸餾水替換為金銀花連翹提取液，結(jié)合甘氨酸噴砂顆粒進行齦下噴砂；對照組治療方法為齦上潔治和齦下刮治后進行甘氨酸顆粒+蒸餾水齦下噴砂。2 組患者均在上述過程結(jié)束后進行3%H2O2+0.9%NaCl 注射液交替沖洗。該過程均由經(jīng)培訓(xùn)的1 名牙周病專業(yè)醫(yī)生進行。在初次治療后的第1、2 和4 周于本院復(fù)診，治療前和治療后由另一專業(yè)醫(yī)生對患牙的PD、mSBI和mPLI 進行檢查并統(tǒng)計評分，并收集治療前及治療后第4 周復(fù)診時PISF 進行IL-6 水平檢測。

1.4 牙周指數(shù)檢測和計分標(biāo)準(zhǔn)測量種植牙的近中頰側(cè)、頰側(cè)中央、遠(yuǎn)中頰側(cè)、近中舌側(cè)、舌側(cè)中央和遠(yuǎn)中舌側(cè)6 個位點的PD、mSBI 和mPLI，并記錄，取平均值。

①mPLI 評分標(biāo)準(zhǔn)：0分為種植牙面無菌斑；1分為塑料探針尖輕劃種植牙面后能發(fā)現(xiàn)菌斑；2 分為肉眼可發(fā)現(xiàn)菌斑存在；3 分為可見大量菌斑出現(xiàn)。結(jié)果根據(jù)臨床檢查記錄為0、1、2 和3 分［13］。②mSBI 檢測以約20 g 的力控制牙周探針沿種植體齦緣探診，0 分無任何出血出現(xiàn)，1 分為探診后見出血點，2 分為齦溝內(nèi)線狀出血，3 分為探診后重度出血。結(jié)果根據(jù)臨床檢查記錄為0、1、2 和3 分。③PD： 以約20 g 的力控制塑料探針，探測齦緣到牙周袋底的間距，以mm 為單位記錄［14］。

1.5 PISF 中IL-6水平檢測PISF采集方法：PISF 由有經(jīng)驗的檢查員收集，在上午8：00～9：00收集樣品。囑參與者在樣本采集前1 h 避免進食、飲水和吸煙。用無菌棉簽擦除種植體周圍齦上菌斑，無菌棉卷隔離待測種植牙，三用槍頭輕輕吹干牙面， 將預(yù)先稱質(zhì)量的無菌Whatman 3 號濾紙（2 mm×20 mm）輕輕插入種植牙周袋最底部30 s取出，放入無菌干燥的EP 管中，稱質(zhì)量后加入200 μL PBS緩沖液，－70 ℃保存待檢。受唾液或血液污染的濾紙條棄用，60 min后重復(fù)取樣方案［15-16］。

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）法檢測IL-6 水平，按照試劑盒使用說明書進行操作（單位：μg·L－1）。

1.6 隨訪在入選時間段內(nèi)，以每例患者入選后治療開始為研究起始，觀察周期為治療后4 周，治療后第4 周隨訪時結(jié)果記為最終治療結(jié)果。要求每例患者于治療起始后的第1、2 和4 周來本院面診，每例患者均隨訪3 次，每次隨訪周期誤差在1 d 以內(nèi)，在第3 次面診后結(jié)束隨訪，每次隨訪時間平均為7、14 和28 d。未能按規(guī)定完成治療或不能如期面診者視為失訪。本研究共失訪3 例，其中中藥組2 例，對照組1 例。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 25.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。 One-sample Kolmogorov-Smirnov Test 檢驗2 組患者年齡、治療前后PD 和PISF 中IL-6 水平是否呈正態(tài)分布，Levene 檢驗方差齊性。2 組患者年齡、治療前PD 和治療前后IL-6 水平均符合正態(tài)分布，以±s 表示，組內(nèi)比較采用配對樣本t檢驗，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。mPLI 和mSBI 為等級資料，采用Wilcoxon 檢驗和Mann Whitney 檢驗進行組內(nèi)和組間檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2 組患者一般資料和治療前檢測指標(biāo)2 組患者年齡和治療前受試種植牙位PD、mPLI 和mSBI以及PISF 中IL-6 水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1 和2。

表1 2 組患者年齡和治療前PD 及PISF 中IL-6 水平Tab.1 Ages, PD and levels of IL-6 in PISF of patients in two groups before treatment (±s)

表1 2 組患者年齡和治療前PD 及PISF 中IL-6 水平Tab.1 Ages, PD and levels of IL-6 in PISF of patients in two groups before treatment (±s)

Group Control Traditional Chinese medicine n 30 26 t P Age(year)48.20±8.29 47.88±10.95 0.122 0.903 PD(l/mm)6.64±0.76 6.56±0.76 0.418 0.677 IL-6[ρB/(μg·L－1)]5.46±0.44 5.36±0.53 0.747 0.458

表2 2 組患者治療前mPLI 和mSBI 評分Tab.2 Scores of mPLI and mSBI of patients in two groups before treatment

2.2 2 組患者治療后檢測指標(biāo)在隨訪期間中藥組失訪2 例，對照組失訪1 例，不納入統(tǒng)計。最終中藥組24 例患者完成研究，對照組29 例患者完成研究，共53 例患者納入統(tǒng)計。中藥組患者治療前PD 和IL-6 水平為（6.56±0.76） mm 和（5.36±0.53） μg·L－1，治療后為（3.01±0.48） mm 和（1.04±0.13） μg·L－1；對照組治療前PD 和IL-6水平為（6.64±0.76）mm和（5.46±0.44）μg·L－1，治療后為（3.56±0.60） mm和（1.54±0.23） μg·L－1；2 組患者mPLI 和mSBI 評分均降低。中藥組和對照組治療后PD、PISF 中IL-6 水平、mPLI 和mSBI 評分均較治療前降低，中藥組較對照組變化更明顯（P＜0.05）。見表3 和4。

表3 2 組患者治療后PD 和PISF 中IL-6 水平Tab. 3 PD and levels of IL-6 in PISF of patients in two groups after treatment (±s)

表3 2 組患者治療后PD 和PISF 中IL-6 水平Tab. 3 PD and levels of IL-6 in PISF of patients in two groups after treatment (±s)

Group n PD(l/mm)Control Traditional Chinese medicine 29 24 t P 3.56±0.60 3.01±0.48 3.364＜0.05 IL-6[ρB/(μg·L－1)]1.54±0.23 1.04±0.13 9.592＜0.05

表4 2 組患者治療后mPLI 和mSBI 評分Tab.4 Scores of mPLI and mSBI of patients in two groups after treatment

3 討 論

在種植體周圍炎的發(fā)病過程中，厭氧革蘭陰性致病菌起著重要作用［17］。有研究［18-19］顯示：在種植牙12 個月后，金黃色葡萄球菌有較高的檢出率，因為該細(xì)菌對鈦具有高親和力，而且PISF 中各種促炎細(xì)胞因子尤其是IL-6 水平顯著升高，可作為診斷種植體周圍炎臨床參數(shù)的輔助指標(biāo)。金銀花連翹中藥在全身疾病包括口腔疾病中有多重作用。研究［20-21］顯示：金銀花連翹藥具有抗流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸系統(tǒng)致病菌和提升免疫力的效果，而且金銀花與連翹能夠抑制IL-6 的生成從而對抗炎癥。研究［22］顯示：金銀花中的多酚部分可減少牙齦成纖維細(xì)胞中脂多糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和炎癥標(biāo)記，其作用與其抗氧化劑和抗炎活性有關(guān)，提示其可用于減輕包括牙周疾病在內(nèi)的炎癥過程。趙媛媛等［23］研究發(fā)現(xiàn)：金銀花對多種細(xì)菌均有抑制作用，但抗菌效果存在一定差異，其對金黃色葡萄球菌抑菌及殺菌作用最為明顯。由此可見，金銀花提取物對于種植體周圍炎的治療作用值得探討。連翹是我國常用中藥材之一，具有抗氧化、保肝和降血脂等多種功能?！秱摗分杏涊d“連翹清透邪熱之結(jié)而解郁”，楊本軍等［24］研究發(fā)現(xiàn)：連翹果實提取物連翹苷可能通過阻斷Toll 樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）信號通路有效地調(diào)控脂多糖誘導(dǎo)的炎癥，從而減少炎性因子的表達。此外，甘氨酸噴砂粉的使用在短時間（24 h）內(nèi)對抑制細(xì)菌在牙種植體表面再定植具有積極作用，而且比碳酸氫鈉噴砂粉的腐蝕性?。?5］。在此基礎(chǔ)上，本研究設(shè)計觀察甘氨酸齦下噴砂與金銀花連翹提取液聯(lián)合用于種植體周圍炎的療效。

盡管已有數(shù)據(jù)顯示使用種植牙修復(fù)缺失牙的長期成功經(jīng)驗，但也會發(fā)生生物學(xué)和技術(shù)方面的并發(fā)癥，如種植體周圍炎，這被認(rèn)為是最具挑戰(zhàn)性的生物學(xué)并發(fā)癥，未經(jīng)治療可能會導(dǎo)致種植治療失敗，因此完善治療方式尤為重要［26-27］。因此，本文作者嘗試通過PD、mSBI 評分、mPLI 評分和IL-6 水平的變化來研究金銀花連翹提取液的抗菌抗炎作用與甘氨酸顆粒噴砂聯(lián)合基礎(chǔ)治療的機械清除菌斑作用來實現(xiàn)對種植體周圍炎治療效果的觀察。本研究結(jié)果顯示：不論是否應(yīng)用復(fù)合中藥提取液，患種植體周圍炎的種植牙牙周指數(shù)和炎癥因子水平在治療后的記錄周期內(nèi)均趨于健康。但中藥組患者PD、IL-6 水平、mPLI 評分和mSBI 評分的降低均較對照組更明顯。PD、mPLI 評分和mSBI 評分是檢測種植體周圍疾病的臨床指標(biāo)，與種植體周圍疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)［28］。

本研究結(jié)果顯示：金銀花連翹提取液聯(lián)合甘氨酸噴砂可以改善種植體周圍炎的臨床癥狀，PISF中IL-6 水平的降低表明這種治療方法可以改善炎癥狀態(tài)。這些結(jié)果均說明甘氨酸噴砂聯(lián)合牙周基礎(chǔ)治療對種植體周圍炎有良好的治療效果，且金銀花連翹提取液對種植體周圍炎的治療有良好的促進作用。但本研究并沒有設(shè)置僅使用中藥的中藥組，因為甘氨酸噴砂聯(lián)合牙周基礎(chǔ)治療效果良好，在臨床工作中已可常規(guī)應(yīng)用，本文作者只研究中藥制劑作為輔助療法的作用。本研究結(jié)果顯示：金銀花連翹提取液的輔助作用使整體的治療效果更加明顯。本研究結(jié)果為將來中藥制劑在臨床的應(yīng)用打下了良好基礎(chǔ)。

綜上所述，在牙周基礎(chǔ)治療之上進行甘氨酸噴砂對種植體周圍炎有良好的治療效果，金銀花連翹提取液對該治療效果有較好的促進作用。但本研究觀察周期較短，該復(fù)合中藥的長期療效仍需加以證明?；挤N植體周圍炎的種植牙生存率的提高需消除病因以及定期的維護治療。