G實(shí)驗(yàn)在早期診斷深部真菌感染中的價(jià)值分析

陳贏(yíng)

近些年，深部真菌感染的發(fā)生率可謂是一直呈上升的趨勢(shì)，據(jù)歐洲1份尸檢報(bào)告顯示，在1978～1982年真菌感染的發(fā)生率為1.6%，而到1988～1992年則升高到4.1%［1］。在美國(guó)，10年中真菌感染由2‰升高至3.8‰，同時(shí)，在全部醫(yī)院獲得性血流感染中，念珠菌菌血癥排在第4位，而死亡率排在第1位［2］。深部真菌感染會(huì)極大地增加患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)，據(jù)報(bào)道，侵襲性念珠菌病、曲霉病的死亡率分別可達(dá)到10%～49%、62%～85%［3］。目前，病原學(xué)檢查是診斷深部真菌感染的主要手段，但出結(jié)果慢，且靈敏度不高，難以滿(mǎn)足臨床需要。G實(shí)驗(yàn)也稱(chēng)為1-3-β-D葡聚糖檢測(cè)方法，是目前診斷深部真菌感染最有價(jià)值的血清學(xué)診斷方法之一。本研究旨在探討G實(shí)驗(yàn)在早期診斷深部真菌感染中的價(jià)值，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年4月～2018年4月本院48例疑似深部真菌感染患者作為研究對(duì)象，男29例，女19例；年齡36～83歲，平均年齡(60.57±8.74)歲。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 所有患者采集靜脈血液3 ml，離心處理后取上清0.1 ml，加入0.9 ml的樣品處理液中，然后以70℃環(huán)境孵育10 min，取出后放入冷水浴中冷卻5 min，待檢。同時(shí)收集患者的痰液標(biāo)本，以清晨第一口痰為宜，生理鹽水漱口后自然咳痰至無(wú)菌容器中，或者對(duì)于干咳無(wú)痰的患者可采用雙管保護(hù)的標(biāo)本毛刷采集下呼吸道分泌物，待檢。

1.2.2G實(shí)驗(yàn)方法 取0.2 ml待測(cè)血清樣本，加入酶反應(yīng)主劑中，待其溶解后，轉(zhuǎn)移至無(wú)熱原平底試管中，進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)儀器為MB-80微生物動(dòng)態(tài)快速檢測(cè)系統(tǒng)(北京金山川科技發(fā)展有限公司)，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)自動(dòng)計(jì)算出1-3-β-D葡聚糖的含量。陰性：1-3-β-D葡聚糖的含量＜10 pg/ml；陽(yáng)性：1-3-β-D葡聚糖的含量≥20 pg/ml。

1.2.3真菌培養(yǎng)聯(lián)合鏡檢法 痰液標(biāo)本以無(wú)菌接種環(huán)，取干酪樣或膿性部分的痰涂成均勻薄片，進(jìn)行革蘭染色涂片鏡檢，根據(jù)《全國(guó)臨床操作規(guī)程》配置革蘭染色液，儀器為PREVIColorGram12自動(dòng)革蘭染色儀。同時(shí)將痰標(biāo)本在沙保氏培養(yǎng)基(廣州迪景微生物科技有限公司)上連續(xù)劃線(xiàn)涂抹，置于35℃的孵育箱中培養(yǎng)48 h，挑取沙保氏培養(yǎng)基上的真菌菌落，革蘭染色后，在顯微鏡(日產(chǎn)尼康)下觀(guān)察，確定為真菌后，用WalkAway40系統(tǒng)(美國(guó))鑒定。

1.3診斷標(biāo)準(zhǔn) 觀(guān)察比較兩種不同檢測(cè)方法陽(yáng)性情況及檢查結(jié)果。深部真菌感染診斷標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)歐洲腫瘤研究治療組織深部真菌感染合作組提出。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩種不同檢測(cè)方法陽(yáng)性情況比較 48例患者中真菌培養(yǎng)聯(lián)合鏡檢法陽(yáng)性率為52.1%(25/48)，其中白假絲酵母菌17株，克柔念珠菌3株，曲霉菌3株，熱帶念珠菌2株。G實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率為68.8%(33/48)。G實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率明顯高于真菌培養(yǎng)聯(lián)合鏡檢法陽(yáng)性率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2兩種不同檢測(cè)方法檢查結(jié)果 48例患者中臨床確診為深部真菌感染患者29例。G實(shí)驗(yàn)診斷深部真菌感染的敏感性為93.10%(27/29)、特異性為68.42%(13/19)、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為81.82%(27/33)、陰性預(yù)測(cè)值為86.67%(13/15)、準(zhǔn)確性為83.33%(40/48)。真菌培養(yǎng)聯(lián)合鏡檢法診斷深部真菌感染的敏感性為65.52%(19/29)、特異性為68.42%(13/19)、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為76.00%(19/25)、陰性預(yù)測(cè)值為56.52%(13/23)、準(zhǔn)確性為66.67%(32/48)。見(jiàn)表1。

表1 兩種不同檢測(cè)方法檢查結(jié)果

3 討論

近些年，由于重癥疾病患者的增加，深部真菌感染的發(fā)生率越來(lái)越高。有資料顯示，HIV感染患者發(fā)生深部真菌感染的危險(xiǎn)高達(dá)47.4%，慢性肺部疾病為9.3%，白血病為3.1%器官移植為1.3%［4］。由于缺乏典型的臨床癥狀，加上診斷水平有限，早期診斷異常困難，預(yù)后較差。資料顯示，全球每年死于深部真菌感染的患者多達(dá)65萬(wàn)，在ICU中的發(fā)生率達(dá)到17.0%，其中死亡率就高達(dá)38.0%［5］。據(jù)2011年我國(guó)大規(guī)模研究表明，深部真菌感染率為8.9%，總體死亡率達(dá)到13.4%，與其他國(guó)家有所差異的是，我國(guó)主要以曲霉菌感染最多，占到70.0%左右，而白色念珠菌占27.5%［6］。

真菌培養(yǎng)和涂片法是診斷深部真菌感染的傳統(tǒng)方法，均存在一定的優(yōu)缺點(diǎn)，臨床價(jià)值有限，如真菌培養(yǎng)的時(shí)效性差，不能用作快速診斷，影響因素多，從痰、尿標(biāo)本中分離出白色假絲酵母菌、曲霉菌等條件致病菌時(shí)，還需要與真菌涂片直接鏡檢相結(jié)合進(jìn)行判斷。而單純真菌涂片直接鏡檢的檢出率較低，對(duì)于血液等無(wú)菌體液標(biāo)本，如果發(fā)現(xiàn)有真菌存在則可馬上診斷，否則，只有在查見(jiàn)有大量菌絲時(shí)才能診斷。很多真菌的細(xì)胞膜中都含有1-3-β-D葡聚糖，這是構(gòu)成真菌細(xì)胞壁的重要成分。當(dāng)機(jī)體受到真菌的侵害后，吞噬細(xì)胞會(huì)吞噬真菌，從而可使1-3-β-D葡聚糖釋放到體液中，而淺部真菌感染不會(huì)引起這個(gè)過(guò)程。因此，觀(guān)察體液中1-3-β-D葡聚糖含量能夠反映有無(wú)深部真菌感染［7］。研究表明，除隱球菌、接合菌外，G實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛴米髂钪榫?、曲霉、毛孢子菌等引起的深部真菌感染的診斷，無(wú)需培養(yǎng)，能夠快速出結(jié)果，只是無(wú)法確定菌種［6］。本研究結(jié)果顯示，48例患者中真菌培養(yǎng)聯(lián)合鏡檢法陽(yáng)性率為52.1%(25/48)，其中白假絲酵母菌17株，克柔念珠菌3株，曲霉菌3株，熱帶念珠菌2株。G實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率為68.8%(33/48)。G實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率明顯高于真菌培養(yǎng)聯(lián)合鏡檢法陽(yáng)性率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。48例患者中臨床確診為深部真菌感染患者29例。G實(shí)驗(yàn)診斷深部真菌感染的敏感性為93.10%(27/29)、特異性為68.42%(13/19)、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為81.82%(27/33)、陰性預(yù)測(cè)值為86.67%(13/15)、準(zhǔn)確性為83.33%(40/48)。真菌培養(yǎng)聯(lián)合鏡檢法診斷深部真菌感染的敏感性為65.52%(19/29)、特異性為68.42%(13/19)、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為76.00%(19/25)、陰性預(yù)測(cè)值為56.52%(13/23)、準(zhǔn)確性為66.67%(32/48)。不過(guò)由于新生隱球菌厚壁莢膜等原因可能引起假陰性，同時(shí)惡性腫瘤、使用蘑菇、靜脈使用抗生素、血液透析等原因可能引起假陽(yáng)性。因此，G實(shí)驗(yàn)雖然對(duì)深部真菌感染具有較好的診斷效能，但必要時(shí)仍需要與病原學(xué)檢查相結(jié)合，以提高準(zhǔn)確率。

綜上所述，G實(shí)驗(yàn)對(duì)深部真菌感染的早期診斷效能高，優(yōu)于病原學(xué)檢查。