植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、體成分和抗氧化能力的影響

令狐克川 張瑞強(qiáng) 張干 姜瀅 溫超 周巖民

摘要：為了探究植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、體成分和抗氧化功能的影響，選用規(guī)格相近的中華絨螯蟹360只，隨機(jī)分4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)18只蟹，分別飼喂在基礎(chǔ)飼料中添加0、25、50、100 mg/kg植物甾醇的試驗(yàn)日糧。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，50 mg/kg植物甾醇添加組可提高中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能，且有降低中華絨螯蟹血清總膽固醇水平含量的趨勢(shì)（P=0.081）;50、100 mg/kg植物甾醇添加組可食內(nèi)臟丙二醛（MDA）含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），過氧化氫酶（CAT）活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。雄蟹可食內(nèi)臟中的總膽固醇含量低于雌蟹，而粗蛋白含量高于雌蟹。由此可知，植物甾醇可在一定程度上提高中華絨螯蟹的生產(chǎn)性能且降低中華絨螯蟹血清總膽固醇含量，改善可食內(nèi)臟的抗氧化能力，50 mg/kg為適宜添加水平;與雌蟹相比，雄蟹可食內(nèi)臟總膽固醇含量較低，而粗蛋白含量較高。

關(guān)鍵詞：植物甾醇;中華絨螯蟹;生長(zhǎng)性能;血清生化指標(biāo);體成分;抗氧化

中圖分類號(hào)：S966.163文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2019）18-0204-05

收稿日期：2018-05-11

作者簡(jiǎn)介：令狐克川（1995—），女，貴州黔南人，碩士研究生，從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料加工研究。E-mail：201780514@njau.edu.cn。

通信作者：周巖民，教授，從事飼料加工與飼料科學(xué)研究。E-mail：zhouym6308@163.com。

植物甾醇，又稱植物固醇，屬植物性甾體化合物，是植物細(xì)胞膜的組成部分，為具有多種生理活性的三萜烯[1-2]。植物甾醇在以游離形式和酯化形式存在于堅(jiān)果、谷物、豆類和植物種子等的油脂中[3-4]。植物甾醇的結(jié)構(gòu)與動(dòng)物性甾醇（膽固醇）的結(jié)構(gòu)基本相似，均以環(huán)戊烷全氫菲為骨架，屬于4-無甲基甾醇，具有相同的手性結(jié)構(gòu)，兩者在側(cè)鏈上的結(jié)構(gòu)差異造成了生理功能不同[5]。植物甾醇能抑制膽固醇在腸道中的吸收或影響肝/膽的膽固醇代謝，可降低血液中的膽固醇[6]，并具有調(diào)節(jié)生長(zhǎng)、抗氧化和消炎退熱等功效[7]。近年，已出現(xiàn)對(duì)某些植物甾醇飼料中的應(yīng)用研究。張嚴(yán)偉等研究表明，基礎(chǔ)日糧中添加40、80 mg/kg植物甾醇能顯著提高團(tuán)頭魴的質(zhì)量增加率和特定生長(zhǎng)率[8]。候艷君等的研究結(jié)果顯示，植物甾醇能使異育銀鯽血漿膽固醇含量顯著降低[9]。顧莞婷等發(fā)現(xiàn)，植物甾醇可降低肉鴨血清的膽固醇含量，提高機(jī)體抗氧化酶活性[10]。我國(guó)農(nóng)業(yè)部于2008年批準(zhǔn)植物甾醇為飼料添加劑，2010年我國(guó)批準(zhǔn)其為新資源食品[11-12]。

中華絨螯蟹，又稱大閘蟹，是我國(guó)經(jīng)濟(jì)蟹類之一，營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美，深受廣大消費(fèi)者青睞，我國(guó)大閘蟹產(chǎn)量從2004年的42.5萬t增長(zhǎng)至2015年的82.33萬t，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中占有重要地位[13-14]。膽固醇是各種海水甲殼類動(dòng)物所必需的營(yíng)養(yǎng)素。汪留全等研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.2%膽固醇有利于幼蟹的生長(zhǎng)，還能有效提高幼蟹對(duì)飼料的利用率[15]。飼料中膽固醇不足或過多都會(huì)造成三疣梭子蟹生長(zhǎng)性能下降[16]。目前，植物甾醇對(duì)魚類膽固醇代謝的影響已有研究報(bào)道，但其對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)及膽固醇代謝的影響未見報(bào)道。本研究以中華絨螯蟹為試驗(yàn)對(duì)象，研究植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能、血清生化、體成分和抗氧化功能的影響，旨在為植物甾醇在蟹類飼料中的合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

1.1.1?植物甾醇

試驗(yàn)用植物甾醇由宜春大海龜生命科學(xué)有限公司提供，主要成分為谷甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇等，有效成分含量為95%。

1.1.2?試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)用中華絨螯蟹，由江蘇金康達(dá)集團(tuán)提供，初體質(zhì)量為（3.00±0.05） g。

1.2?試驗(yàn)設(shè)計(jì)與日糧

本試驗(yàn)于2017年7月11日至9月5日在江蘇盱眙金康達(dá)集團(tuán)試驗(yàn)場(chǎng)進(jìn)行，選用規(guī)格相近的中華絨螯蟹360只隨機(jī)分為4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)18只（公母各半），設(shè)置飼喂基礎(chǔ)日糧（表1）的對(duì)照組和分別添加25、50、100 mg/kg的植物甾醇的試驗(yàn)組，進(jìn)行8周試驗(yàn)。

1.4?飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)蟹在水族箱（直徑100 cm，高80 cm）中飼養(yǎng)，每個(gè)水族箱為1個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)用水為池塘水。試驗(yàn)開始7 d前，將水注入水族箱，種植水花生，等水花生成活，水質(zhì)符合養(yǎng)殖用水要求后放入試驗(yàn)蟹，投放前進(jìn)行稱體質(zhì)量，保證各水族箱中的試驗(yàn)蟹平均質(zhì)量相近。每天投飼2次，投飼量約為蟹總質(zhì)量5%，其中07：30投飼1/3，17：00投飼2/3，以不?；蚵允橐?。每天吸污，加注新水，換水量約為總水量的1/3，定時(shí)充氧。飼養(yǎng)期間觀察并記錄脫殼與螃蟹死亡數(shù)。

1.5?樣品采集

試驗(yàn)過程中記錄每個(gè)水族箱中蟹的脫殼次數(shù)，在試驗(yàn)結(jié)束（第8周末）時(shí)對(duì)每個(gè)水族箱中的試驗(yàn)蟹分別進(jìn)行計(jì)數(shù)、稱質(zhì)量。放置于冰上麻醉后對(duì)試驗(yàn)蟹稱質(zhì)量（公母各半），然后采用1 mL經(jīng)Acd-b抗凝劑潤(rùn)洗后的注射器于爪部采集血液，4 000 r/min 離心10 min分離血清后分裝于小離心管中，于-20 ℃ 保存待測(cè)。然后迅速分離可食內(nèi)臟（肝胰腺和性腺）和腹部、腿部肌肉，收集于凍存管中，-80 ℃冰箱保存待測(cè)。

1.6?測(cè)定指標(biāo)及方法

1.6.1?生長(zhǎng)性能

試驗(yàn)期間，記錄中華絨螯蟹的死亡數(shù)與脫殼數(shù)。試驗(yàn)結(jié)束后，測(cè)定初質(zhì)量、末質(zhì)量及采食量等指標(biāo)，生長(zhǎng)性能指標(biāo)以增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率、餌料系數(shù)、平均脫殼次數(shù)等表示，計(jì)算方法如下：

特定生長(zhǎng)率（SGR）=100×（ln末質(zhì)量-ln初質(zhì)量）/飼養(yǎng)時(shí)間;

餌料系數(shù)（FCR）=飼料消耗量/增質(zhì)量;

平均脫殼次數(shù)=總脫殼次數(shù)/螃蟹總數(shù)。

1.6.2?血清生化指標(biāo)測(cè)定

血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（UREA）、甘油三脂（TG）及總膽固醇（TC）含量采用全自動(dòng)生化分析儀（日立7100）測(cè)定，所用試劑盒購(gòu)自上海科華生物工程股份有限公司。

1.6.3?體成分測(cè)定

參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 14772—2008《食品中粗脂肪的測(cè)定》中的規(guī)定操作，采用索氏提取法測(cè)定螃蟹粗脂肪（CF）含量;粗蛋白（CP）含量采用凱氏定氮儀測(cè)定;總膽固醇含量采用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測(cè)定，操作按照說明書進(jìn)行。

1.6.4?肝臟和肌肉抗氧化能力測(cè)定

丙二醛（MDA）含量、總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和過氧化氫酶（CAT）活性采用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測(cè)定，其中MDA含量采用硫代巴比妥酸方法測(cè)定，具體操作步驟參照Ma等的方法[17]，SOD活性參考Ertekin等的方法[18]測(cè)定，CAT活性參照Firat等的方法[19-20]進(jìn)行測(cè)定，T-AOC 采用比色法測(cè)定。

1.7?數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007初步整理后采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，生產(chǎn)性能數(shù)據(jù)采用One-way ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，其他數(shù)據(jù)采用一般線性模型（GLM）進(jìn)行雙因素方差分析，模型包括植物甾醇添加量、性別及二者互作，以P<0.05為差異顯著性水平，0.05

2?結(jié)果與分析

2.1?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，日糧添加植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能無顯著影響（P>0.05）。但與對(duì)照組相比，50、100 mg/kg植物甾醇添加組的末均質(zhì)量分別提高13.54%、9.31%（P>0.05），特定生長(zhǎng)率分別提高7.3%和4.7%（P>0.05），餌料系數(shù)分別降低了11.38%和2.44%（P>0.05）。

2.2?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，日糧中添加植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹血清中的TP、ALB、UREA、TG含量無顯著影響（P>0.05）。添加50、100 mg/kg植物甾醇使血清中的TC含量顯著降低（P<0.05）。

2.3?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹體成分的影響

由表4可知，日糧中添加植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹可食內(nèi)臟和肌肉的CP、CF及TC含量無顯著影響（P>0.05）。雄蟹可食內(nèi)臟TC含量顯著低于雌蟹（P<0.05），而CP含量則顯著高于雌蟹（P<0.05）。

2.4?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹可食內(nèi)臟抗氧化能力的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，日糧中添加植物甾醇50、100 mg/kg使可食內(nèi)臟MDA含量顯著降低（P<0.05），CAT活性顯著提高（P<0.05）。性別對(duì)可食內(nèi)臟抗氧化能力無顯著影響（P>0.05）。

2.5?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹肌肉抗氧化能力的影響

由表6可知，隨日糧中植物甾醇添加量的提高，中華絨螯蟹肌肉CAT活性有提高趨勢(shì)（P=0.058）。雄蟹肌肉SOD活性顯著低于雌蟹（P<0.05），而CAT活性顯著高于雌蟹（P<0.05）。

3?討論

3.1?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能的影響

植物甾醇是一種植物活性成分， 其在動(dòng)物體內(nèi)能改善機(jī)體生長(zhǎng)情況[20]。吳先華等研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加150、200 mg/kg 植物甾醇可顯著提高育肥豬日采食量、日增質(zhì)量[21]。陳颋等亦報(bào)道，植物甾醇可提高肥育豬生長(zhǎng)性能且有改善肥育豬肉質(zhì)的趨勢(shì)[22]。賈代漢等研究表明，在日糧中添加15、30 mg/kg 植物甾醇可提高肉雞平均日增質(zhì)量和飼料轉(zhuǎn)化率[23]。本試驗(yàn)研究顯示，當(dāng)日糧中植物甾醇添加量為50 mg/kg 時(shí)，中華絨螯蟹的末均質(zhì)量、特定生長(zhǎng)率最大，餌料系數(shù)最低;但植物甾醇添加量為100 mg/kg時(shí)，中華絨螯蟹的生長(zhǎng)性能有所下降。這與何昭友報(bào)道的肥育豬生長(zhǎng)性能隨植物甾醇添加量增加而提高的結(jié)果[24]不一致，可能是由于動(dòng)物品種、生長(zhǎng)階段的差異所致。

3.2?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹血清生化指標(biāo)的影響

膽固醇是膽汁酸及其鹽類、類固醇激素和它們的衍生物等生物活性物質(zhì)的合成前體，其含量過多或過少都不利于動(dòng)物健康[25]。Law等研究發(fā)現(xiàn)，1～2 g/d游離植物甾醇或1.6～3.2 g/d 酯化甾醇能顯著降低人血清的TC和LDL-C含量[26-27]。顧莞婷等研究表明，飼糧中添加20 mg/kg植物甾醇能顯著降低肉鴨血液中總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量[28]。賈代漢等研究發(fā)現(xiàn)，20 mg/kg植物甾醇添加組能顯著降低肉仔雞血清總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量[23]。張嚴(yán)偉等報(bào)道，日糧中以添加40 mg/kg植物甾醇時(shí)降低團(tuán)頭魴血漿低密度脂蛋白膽固醇效果最為明顯[8]。本試驗(yàn)結(jié)果與此類似，日糧中植物甾醇添加量為50、100 mg/kg的血清TC含量低于對(duì)照組，但2組之間無顯著差異。有研究表明，植物甾醇降膽固醇作用具有劑量依賴關(guān)系，達(dá)到最大降幅后，繼續(xù)加大添加量則不能進(jìn)一步降低膽固醇[29]。植物甾醇降低血清膽固醇的機(jī)制可能是抑制膽固醇吸收或部分替代膽固醇溶于微團(tuán)被腸細(xì)胞吸收進(jìn)入血液[30]。

3.3?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹體成分的影響

目前，關(guān)于植物甾醇對(duì)動(dòng)物體成分影響的研究報(bào)道較少，所得結(jié)論也不一致。張嚴(yán)偉等研究表明，植物甾醇可提高團(tuán)頭魴肌肉粗脂肪含量[8]。顧莞婷等發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比，植物甾醇明顯提高肉鴨肌間脂肪含量，胸肌率略有提高[10]。而何昭友則報(bào)道，添加不同植物甾醇水平對(duì)育肥豬屠宰率、瘦肉率、背膘厚、眼肌面積沒有顯著性影響[24]，本試驗(yàn)也得到了類似結(jié)果，添加不同水平植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹體成分、可食內(nèi)臟和肌肉的CP和CF含量無顯著影響，但性別對(duì)中華絨螯蟹可食內(nèi)臟的TC和CP含量有影響，表現(xiàn)為雌性中華絨螯蟹可食內(nèi)臟的TC、CP含量顯著大于雄性中華絨螯蟹。這可能是由于不同性別的中華絨螯蟹組織結(jié)構(gòu)差異所致[31]。

3.4?植物甾醇對(duì)中華絨螯蟹可食內(nèi)臟和肌肉抗氧化能力的影響

植物甾醇具有一定的抗氧化作用，陳茂彬等研究發(fā)現(xiàn)，植物甾醇乙酸酯和植物甾醇油酸酯能顯著提高荷瘤小鼠紅細(xì)胞CAT活性[32]。張嚴(yán)偉等研究表明，植物甾醇可以提高團(tuán)頭魴前期肝胰臟SOD和CAT的活性[8]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，日糧中添加植物甾醇50、100 mg/kg可顯著降低可食內(nèi)臟MDA含量，提高可食內(nèi)臟CAT活性。隨日糧中植物甾醇添加量的增加，中華絨螯蟹肌肉CAT活性有提高的趨勢(shì)。劉慧瓊等研究表明，β-谷甾醇具有清除羥自由基和抑制超氧陰離子的作用，這是植物甾醇具有抗氧化功能的原因之一[33]。雄蟹肌肉SOD活性顯著低于雌蟹，而CAT活性顯著高于雌蟹，造成此差異的相關(guān)生理機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4?結(jié)論

日糧中添加植物甾醇可一定程度上提高中華絨螯蟹的生長(zhǎng)性能，有降低血清TC含量的趨勢(shì)，且能提高中華絨螯蟹可食內(nèi)臟和肌肉的抗氧化能力。50 mg/kg為植物甾醇在中華絨螯蟹日糧中的適宜添加水平。此外，雄蟹可食內(nèi)臟TC含量顯著低于雌蟹，CP含量顯著高于雌蟹。

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