• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    杜鵑花F1代群體主要表型性狀及SSR標記的多樣性分析

    2019-11-28 10:54:11沈梓力李美芹邱甜吳燕燕吳月燕謝曉鴻
    江蘇農業(yè)科學 2019年18期
    關鍵詞:表型性狀種質資源杜鵑花

    沈梓力 李美芹 邱甜 吳燕燕 吳月燕 謝曉鴻

    摘要:通過性狀的統(tǒng)計分析和開發(fā)的SSR多態(tài)位點的統(tǒng)計分析,篩選以粉紅泡泡(母本)和白鶴(父本)雜交育種產生的F1代的優(yōu)良新品種,以期作為今后開發(fā)推廣的一種新型種質資源。采用表型分析結合SSR分子標記分析的方式,對杜鵑親本及F1代的49份種質的遺傳多樣性進行系統(tǒng)評價和分類分析。表型性狀結果表明,花色的變異系數最大,為54%;葉片絨毛變異系數最小,為25%。表型性狀聚類分析結果表明,親本及F1代聚為7個類群,第1類包含2個個體,第2類包含2個個體,第3類包含4個個體,第4類包含17個個體,第5類包含4個個體,第6類包含9個個體,第7類包含13個個體。分子聚類結果表明,親本及F1代共聚成6個類群,第1類包含13個個體,第2類包含7個個體,第3類包含7個個體,第4類包含8個個體,第5類包含15個個體,第6類包含1個個體。據SSR標記的聚類與表型性狀聚類具有一定的相關性但并不完全一致。

    關鍵詞:杜鵑花;表型性狀;SSR標記;種質資源

    中圖分類號: S685.210.24文獻標志碼: A

    文章編號:1002-1302(2019)18-0177-05

    收稿日期:2018-05-27

    基金項目:浙江省寧波市重大科技專項(編號:2014C11002);浙江省“生物工程”重中之重學科學生創(chuàng)新計劃(編號:CX2017012)。

    作者簡介:沈梓力(1993—),男,浙江溫州人,碩士研究生,研究方向為食品化學工程與安全控制。E-mail:747643963@qq.com。

    通信作者:謝曉鴻,碩士,高級農藝師,研究方向為觀賞植物應用研究。E-mail:285300628@qq.com。

    杜鵑花(Rhododendron simsii L.)屬杜鵑花科(Ericaceae)杜鵑花屬(Rhododendron),是我國十大名花之一。我國是杜鵑花的起源地之一,具有豐富的種質資源,但是我國新種質資源的開發(fā)起步較晚,造成我國種質資源相對匱乏的局面[1]。目前,多利用雜交育種的方式選育優(yōu)良植株,這類植株具有觀賞性高的特點,但難以確保基因的多樣性,可能會對進一步的育種工作造成影響。因此,利用表型性狀結合分子標記技術篩選優(yōu)良新種質是杜鵑花選育的有效途徑。表型多樣性的研究主要是通過科學有效地采樣、合理有效的數學統(tǒng)計方法[2],根據形態(tài)性狀、生理生化性狀等變異較穩(wěn)定的性狀,揭示群體的遺傳規(guī)律和變異大小,客觀評價其遺傳多樣性。目前,許多學者利用表型性狀研究生物多樣性,在甜瓜(Cucumis melo L.)[3]、大蒜(Allium sativum L.)[4]、菊花(Chrysanthemum×morifolium Ramat.)[5]、水稻(Oryza sativa)[6]、獼猴桃(Actinidia spp.)[7]、孔雀草(Tagetes patula L.)[8]、板栗(Castanea mollissima Bl.)[9]等植物中得到了應用?;蚨鄻有澡b定多依據植株基因組的重要作用位點的多樣性進行鑒定,確定植株基因的多樣性。

    簡單重復序列(simple sequence sepeat,簡稱SSR)即微衛(wèi)星DNA(microsatellite DNA),是廣泛存在于真核和原核生物基因組中1~6個核苷酸基元串聯重復而成的DNA序列[10],是基于PCR技術建立起來的第2代分子標記技術,該標記主要根據生物中SSR位點的多寡來判斷不同生物個體的基因多樣性,從而判斷物種的多樣性及豐富性,具有多態(tài)性高、共顯性、通用性高、可靠性且重復性高等特點[11],常用于遺傳連鎖圖譜的構建、遺傳多樣性的檢測、基因定位及分子標記輔助選擇等。

    目前,有學者利用表型性狀結合分子標記技術研究生物遺傳多樣性,在五節(jié)芒(Miscanthus floridulus)[12]、棉屬(Gossypium Lin.)[13]、紫薇(Lagerstroemia indica)[14]、杜鵑(Rhododendron L.)[15-16]等植物中均有報道,但利用表型性狀結合SSR標記創(chuàng)制雜交F1代杜鵑花種質資源的研究尚未見報道。開展杜鵑花種質資源創(chuàng)制,對于杜鵑花優(yōu)良種質資源的收集、保存、評價和利用具有重要意義。因此,本研究以白鶴和粉紅泡泡雜交F1代為基礎,結合形態(tài)標記和SSR分析,開展了杜鵑花種質資源的創(chuàng)制研究,旨在為杜鵑花的新種質創(chuàng)制、生產應用以及杜鵑花種質資源的發(fā)展提供科學依據。

    1?材料與方法

    1.1?試驗材料

    試驗母本白鶴與父本粉紅泡泡于2011年4月進行雜交,2016年9月進行試驗,田間試驗基地為浙江省寧波市北侖萬景杜鵑良種園,從獲得的100株F1代中隨機抽取49株作為試驗材料。

    1.2?試驗方法

    1.2.1?表型性狀的選取與編碼

    收集親本及F1代49株植株的葉片并編號掛牌,對表型性狀進行統(tǒng)計。以杜鵑花數量分類[17]與杜鵑花品種資源和構建分類體系的調查研究[18]為基礎。選取園藝植物的10個性狀進行統(tǒng)計(表1),主要分為株型、分枝特性、枝條顏色、葉片顏色、絨毛特性、葉緣、花冠類型、花冠形狀、花色以及花緣進行性狀統(tǒng)計和測量。

    1.2.2?基因組DNA提取

    采用改良CTAB法[19]提取基因組DNA,采用BIO-RAD Smart Spec Plus核酸純度儀和1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測所提取DNA的完整性和純度,根據檢測結果將可用DNA樣品稀釋至50 ng/μL,保存于-20 ℃冰箱中備用。

    1.2.3?SSR分析

    選用本試驗開發(fā)的10對多態(tài)性SSR引物對親本及F1代49份材料的基因型進行檢測。PCR反應總體系為10 μL,包括1 μL 1×Buffer(含Mg+)、0.8 μL0.2 mmol/L dNTPs、1 μL 0.25 mmol/L上下游引物、0.1 μL0.5 U DNA polymerase以及0.5 μL 50 ng/μL DNA模板,加6.6 μL ddH2O補齊體系。反應在Eppendorf公司生產的Mastercycler普通梯度PCR儀上進行。反應程序:94 ℃預變性4 min;94 ℃變性40 s,56 ℃退火40 s,72 ℃延伸1 min,35個循環(huán);72 ℃延伸7 min;4 ℃保存。PCR擴增產物利用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)檢測,EB染色,紫外凝膠成像系統(tǒng)(Bio-rad Gel Doc XR+)成像觀察。

    1.3?數據處理與分析

    對表型數據進行統(tǒng)計整理后,遺傳距離利用Pearson相關系數進行轉化后表示;統(tǒng)計整理SSR位點信息,利用SPSS 19.0軟件進行聚類分析方法計算并建立表型及基因分類樹狀圖[20]。

    2?結果與分析

    2.1?主要性狀分析

    由表2可知,雜交后代出現了一定程度的遺傳變異,個體間也出現了明顯的性狀差異。其株型、枝條、葉片、花等均出現一定比例的性狀分化,49株子代植株中,質量性狀中植株株型的變異系數為30%;枝條分枝特性變異系數為35%,顏色變異系數為34%;葉片顏色變異系數為35%, 絨毛變異系數為25%,葉緣變異系數為50%;花的變異系數相對較大,花冠類型變異系數為53%,花冠形狀變異系數為41%,花色變異系數為54%,花緣變異系數為35%。

    2.2?杜鵑花F1代表型性狀相關性分析

    基于遺傳相似系數矩陣,用SPSS 19.0軟件對親本和49份材料進行聚類分析,獲得10個性狀的聚類圖。由圖1可知,F1代表型性狀主要聚為7個類群,第1類包含2個個體,分別為粉紅泡泡和87;第2類包含2個個體,分別為白鶴和6;第3類包含4個個體,分別為白鶴36、64、49和51;第4類包含17個個體,分別為70、79、75、55、65、58、38、63、66、71、25、91、27、19、48、69和86;第5類包含4個個體,分別是21、32、14和31;第6類包含9個個體,分別是46、89、20、44、16、34、15、7和90;第7類包含13個個體,分別是10、50、24、5、52、18、9、22、40、11、35、17和26。在第1類中,87號植株與粉紅泡泡聚為一類;第2類中,6號個體與白鶴聚為一類;第3類中,64號植株花為玫紅色,與其他3個個體存在很大差異,但是在株型上有很大的相似性;第4類中的17個個體中,種質分類最為混亂,發(fā)生花色變異的植株大多聚在這一類,表明該聚類種質性狀復雜,極有可能發(fā)生一定程度的變異,因此可以作為新種質資源選育的分類點;第5類中,花型和花色均有一定程度的變異,可作為候選新種質的類別;第6類聚類中,植株從屬性和花色屬性上都與母本白鶴相似,發(fā)生了極少量的變異,因此不宜作為新種質的開發(fā)類別;第7類中花屬性發(fā)生了變異,可作為候選新種質的類別。

    2.3?SSR標記的多態(tài)性

    利用試驗開發(fā)的10個標記對49個后代及親本進行多態(tài)性篩選,共擴增出23條多態(tài)性條帶,多態(tài)性條帶數為2~4個(表3)。

    2.4?雜交F1代聚類分析

    通過UPGMA進行聚類分析表明,親本和F1代49份種質共聚成6個類群,第1類包含13個個體,分別為63、64、66、86、5、9、11、87、粉紅泡泡、24、32、46和48;第2類包含7個個體,分別為34、71、19、7、31、14和75;第3類包含7個個體,分別為58、69、10、27、50、44和65;第4類包含8個個體,分別為9、白鶴、16、35、51、22、40和70;第5類包含15個個體,分別為79、89、26、21、18、25、38、52、90、15、17、20、36、49和91;第6類包含1個個體,為55號(圖2)。

    以質量性狀為基礎,結合Pearson相關系數的聚類結果和SSR分子標記聚類結果,選取觀賞價值高且遺傳多樣性高的品種作為候選種質。55號種質花冠類型為單瓣,花冠形狀為碟型,花色為粉色,花緣為波狀,綜合了親本的生物學性狀且出現了一定程度的變異,基于Pearson相關系數的聚類結果顯示55號種質聚到第4類,基于SSR分子標記的聚類聚到第6類,表明55號雜交種質具有較高的性狀差異和遺傳差異。64號雜交種質花冠類型為重瓣,花冠形狀為碟型,花色為玫紅色,花緣為波狀,在花冠類型和花色方面出現了一定程度的變異,基于Pearson相關系數的聚類聚到第3類,與親本白鶴聚為一類,基于SSR分子標記的聚類聚到第1類,與親本粉紅泡泡聚為一類,表明64號雜交種質是親本植株的雜交種質,變異系數相對較小,但觀賞性狀相對較高。因此,具有較高的觀賞性狀和一定遺傳差異的55號和64號雜交種適合作為候選新品種。經過表現型的觀察和對比親本表現型與F1代49份種質,發(fā)現55號(圖3)、64號新種質(圖4)。這2種新種質的性狀穩(wěn)定且遺傳性優(yōu)良,因此可以將這2種新種質從中挑選出來,作為新品種進行推廣。

    3?討論與結論

    目前,許多學者利用表型性狀的改變來衡量植株變異[21-24],但是表型變異需要長期的積累過程才能逐步形成,難以及時反饋生物的變異信息,且是基因和環(huán)境因子共同作用的結果。因此,利用表型性狀結合分子標記對生物變異進行統(tǒng)計分析,是衡量生物變異及基因多樣性的一個重要手段[25]。分子標記聚類具有更高的靈敏度。利用分子標記技術研究杜鵑花種質的遺傳多樣性,可以不受環(huán)境、發(fā)育時期和器官等的限制,從基因組水平上揭示其遺傳變異的程度,且在早期就可進行新品種的鑒定[26]。

    在杜鵑花實際生產過程中,優(yōu)良種質資源大多根據表型性狀進行篩選,在生產過程中會造成選育失敗以及種質的性狀不穩(wěn)定的現象。在實際生產過程中,利用更為科學的手段進行種質資源的選育成為解決新種質選育所面臨問題的關鍵。因此,利用分子標記技術結合表型性狀的差異進行選育是相對更為科學的選育體系。這為杜鵑花的選育工作提供了更為科學的依據。

    本研究對F1代49份種質以及親本的10個表型性狀的聚類分析研究表明,供試材料的表型性狀相似程度高的樣本聚為一類,通過此表型聚類結果可知,利用Person相關系數進行表型聚類具有極高的應用價值。表型聚類結合分子標記聚類分析結果表明,兩者聚類結果不完全一致,具有一定的差異。這可能是因為所選SSR位點的覆蓋率以及SSR位點的作用位點的不同而具有一定的差異。但是通過表型聚類結合分子聚類對生物變異進行分析,具有更高的應用價值以及現實意義。

    參考文獻:

    [1]吳?葒,楊雪梅,邵慧敏,等. 杜鵑花產業(yè)的種質資源基礎:現狀、問題與對策[J]. 生物多樣性,2013,21(5):628-634.

    [2]郝?蕾,張國盛,穆喜云,等. 北沙柳種質資源居群表型多樣性[J]. 西北植物學報,2017,37(5):1012-1021.

    [3]熊姜玲,趙光偉,徐志紅,等. 甜瓜柄蔓夾角主基因+多基因遺傳分析[J]. 中國農學通報,2016,32(34):55-61.

    [4]王海平,李錫香,沈?鏑,等. 基于表型性狀的中國大蒜資源遺傳多樣性分析[J]. 植物遺傳資源學報,2014,15(1):24-31.

    [5]李仁偉,王?晨,戴思蘭,等. 菊花品種表型性狀與SRAP分子標記的關聯分析[J]. 中國農業(yè)科學,2012,45(7):1355-1364.

    [6]從夕漢,施伏芝,阮新民,等. 東南亞62個秈型水稻親本SSR遺傳多樣性分析[J]. 核農學報,2016,30(5):859-868.

    [7]湯佳樂,黃春輝,吳?寒,等. 野生毛花獼猴桃果實表型性狀及SSR遺傳多樣性分析[J]. 園藝學報,2014,41(6):1198-1206.

    [8]傅巧娟,李春楠,陳?一,等. 基于表型性狀的孔雀草種質遺傳多樣性分析[J]. 植物遺傳資源學報,2015,16(5):1117-1122,1127.

    [9]江錫兵,湯?丹,龔榜初,等. 基于SSR標記的板栗地方品種遺傳多樣性與關聯分析[J]. 園藝學報,2015,42(12):2478-2488.

    [10]Annicchiarico P,Nazzicari N,Ananta A,et al. Assessment of cultivar distinctness in alfalfa:a comparison of genotyping-by-sequencing,simple-sequence repeat marker,and morphophysiological observations[J]. The Plant Genome,2016,9(2):1-12.

    [11]李美芹,潘葉羽,錢萍仙,等. 杜鵑花EST-SSR標記的開發(fā)及遺傳多樣性分析[J]. 植物生理學報,2016,52(3):356-364.

    [12]艾?辛,蔣建雄,肖?亮,等. 荻與五節(jié)芒種間雜交F1群體主要農藝性狀的遺傳及相關性分析[J]. 草地學報,2017,25(4):814-822.

    [13]葉禎維,鄧曉英,石玉真,等. 雜交棉中棉所70后代分離群體產量品質的表型變異分析[J]. 棉花學報,2016,28(1):1-10.

    [14]賀?丹,唐?婉,劉?陽,等. 尾葉紫薇與紫薇F1代群體主要表型性狀與SSR標記的連鎖分析[J]. 北京林業(yè)大學學報,2012,34(6):121-125.

    [15]Caser M,Akkak A,Scariot V. Are rhododendron hybrids distinguishable on the basis of morphology and microsatellite polymorphism?[J]. Scientia Horticulturae,2010,125(3):469-476.

    [16]Marczewski T,Chamberlain D F,Milne R I. Hybridization in closely related Rhododendron species:half of all species-differentiating markers experience serious transmission ratio distortion[J]. Ecology and Evolution,2015,5(15):3003-3022.

    [17]周蘭英,王永清,張?麗,等. 46種杜鵑花屬植物表型性狀的數量分類[J]. 林業(yè)科學,2009,45(8):67-75.

    [18]周?泓. 杜鵑花品種資源多樣性研究及品種分類體系構建[D]. 杭州:浙江大學,2012:1-109.

    [19]Siegel C S,Stevenson F O,Zimmer E A. Evaluation and comparison of FTA card and CTAB DNA extraction methods for non-agricultural taxa[J]. Applications in Plant Sciences,2017,5(2):1-7.

    [20]王瓊瓊,薛志慧,林偉東,等. 不同茶樹種質間稀土元素積累差異研究[J]. 園藝學報,2017,44(6):1198-1206.

    [21]夏國華,朱先富,俞春蓮,等. 不同地理種源大別山山核桃堅果表型性狀和脂肪酸組分分析[J]. 果樹學報,2014,31(3):370-377.

    [22]馮晶晶,劉?磊,鄭?崢,等. 醋栗番茄Solanum pimpinellifolium遺傳多樣性分析[J]. 植物遺傳資源學報,2017,18(4):611-619,628.

    [23]鄭?昕,孟?超,姬志峰,等. 脫皮榆山西天然居群葉性狀表型多樣性研究[J]. 園藝學報,2013,40(10):1951-1960.

    [24]蔣會兵,宋維希,矣?兵,等. 云南茶樹種質資源的表型遺傳多樣性[J]. 作物學報,2013,39(11):2000-2008.

    [25]羅?凱,盧會翔,吳正丹,等. 中國西南地區(qū)甘薯主要育種親本的遺傳多樣性及群體結構分析[J]. 中國農業(yè)科學,2016,49(3):593-608.

    [26]吳則東,江?偉,馬龍彪. 分子標記技術在農作物品種鑒定上的研究進展及未來展望[J]. 中國農學通報,2015,31(33):172-176.

    猜你喜歡
    表型性狀種質資源杜鵑花
    杜鵑花開
    待到杜鵑花開時
    心聲歌刊(2020年4期)2020-09-07 06:37:14
    杜鵑花
    哦,杜鵑花!
    瓠瓜類型砧木重組近交系(RIL)遺傳作圖群體耐濕澇表型性狀分析
    寧夏外引水稻種質資源表型性狀遺傳多樣性分析
    寧夏外引水稻種質資源表型性狀遺傳多樣性分析
    綠肥作物紫云英研究進展
    大白菜種質資源抗根腫病基因CRa和CRb的分子標記鑒定與分析
    茄子種質資源農藝性狀遺傳多樣性分析
    国产精品99久久99久久久不卡 | 国产精品国产三级国产专区5o| 中国国产av一级| 黄频高清免费视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美精品一区二区大全| 久久狼人影院| 亚洲国产最新在线播放| 观看美女的网站| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 青青草视频在线视频观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 99久久人妻综合| 久久久久久久国产电影| 精品第一国产精品| 久久ye,这里只有精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日本wwww免费看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲在久久综合| 国产黄色视频一区二区在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 午夜激情久久久久久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 免费观看av网站的网址| 久久久久久人妻| 亚洲精品日本国产第一区| 国产成人a∨麻豆精品| 久久久久精品久久久久真实原创| 婷婷色综合大香蕉| 国产成人一区二区在线| 18禁动态无遮挡网站| 日韩一区二区三区影片| 国产精品免费大片| 久久影院123| a级毛片在线看网站| 在线观看免费视频网站a站| 精品一区二区三卡| 人妻少妇偷人精品九色| 韩国av在线不卡| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲av男天堂| 免费观看在线日韩| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 男人添女人高潮全过程视频| 美国免费a级毛片| 777米奇影视久久| 中文字幕色久视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 满18在线观看网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久人人97超碰香蕉20202| 最近手机中文字幕大全| av又黄又爽大尺度在线免费看| 有码 亚洲区| 人成视频在线观看免费观看| 黑丝袜美女国产一区| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 十八禁高潮呻吟视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产一区二区激情短视频 | 欧美日韩综合久久久久久| 丝袜在线中文字幕| 国产成人精品一,二区| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产不卡av网站在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产熟女午夜一区二区三区| a级毛片在线看网站| 日韩欧美精品免费久久| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品一区二区免费观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美精品一区二区大全| 人妻 亚洲 视频| 国产成人精品福利久久| 午夜精品国产一区二区电影| av在线老鸭窝| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产亚洲最大av| av一本久久久久| 国产精品无大码| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产熟女欧美一区二区| 久久这里有精品视频免费| 日韩电影二区| 韩国av在线不卡| 高清在线视频一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产深夜福利视频在线观看| 在现免费观看毛片| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 亚洲精品一区蜜桃| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲av免费高清在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 精品少妇久久久久久888优播| 十分钟在线观看高清视频www| 中文字幕色久视频| freevideosex欧美| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 人体艺术视频欧美日本| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲第一青青草原| 国产野战对白在线观看| 国产成人精品一,二区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 999精品在线视频| 大片免费播放器 马上看| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美精品av麻豆av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲综合色惰| 亚洲精品视频女| 最黄视频免费看| 亚洲欧美精品自产自拍| 观看av在线不卡| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲国产精品999| 日本91视频免费播放| 亚洲,一卡二卡三卡| 在线看a的网站| 男人操女人黄网站| 熟女电影av网| 日本色播在线视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 视频在线观看一区二区三区| 美女高潮到喷水免费观看| 午夜福利在线免费观看网站| 国产午夜精品一二区理论片| 18禁观看日本| 午夜免费观看性视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美97在线视频| 另类精品久久| 中文字幕制服av| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲国产欧美网| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲国产精品一区三区| 丰满少妇做爰视频| 免费av中文字幕在线| av电影中文网址| 中国国产av一级| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品少妇久久久久久888优播| 男人爽女人下面视频在线观看| 伊人久久国产一区二区| 丁香六月天网| 日韩中文字幕欧美一区二区 | av在线观看视频网站免费| 国产av码专区亚洲av| 久久99精品国语久久久| 大陆偷拍与自拍| 99热国产这里只有精品6| 国产精品 国内视频| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 2018国产大陆天天弄谢| av福利片在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 有码 亚洲区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 色视频在线一区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 卡戴珊不雅视频在线播放| 丝袜在线中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 91成人精品电影| 久久久久久人妻| 日韩欧美一区视频在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日韩电影二区| 90打野战视频偷拍视频| 热99久久久久精品小说推荐| 成年美女黄网站色视频大全免费| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产熟女欧美一区二区| 美女主播在线视频| 久久热在线av| 春色校园在线视频观看| 综合色丁香网| 亚洲精品在线美女| av女优亚洲男人天堂| 在线观看人妻少妇| 中文字幕制服av| 高清视频免费观看一区二区| 男女无遮挡免费网站观看| 香蕉丝袜av| 精品酒店卫生间| 91国产中文字幕| 电影成人av| 国产精品三级大全| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| av在线播放精品| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产片特级美女逼逼视频| 天美传媒精品一区二区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 美女福利国产在线| 日日爽夜夜爽网站| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 9热在线视频观看99| 国产精品久久久久久精品电影小说| 香蕉精品网在线| 人妻系列 视频| 午夜福利乱码中文字幕| 日本91视频免费播放| 老司机影院毛片| 大香蕉久久网| 午夜av观看不卡| 两性夫妻黄色片| av网站在线播放免费| 亚洲成国产人片在线观看| 热re99久久国产66热| 精品卡一卡二卡四卡免费| 9热在线视频观看99| 久久久久精品性色| 老熟女久久久| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精华国产精华液的使用体验| h视频一区二区三区| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲成色77777| 欧美bdsm另类| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产激情久久老熟女| 欧美国产精品一级二级三级| 美女福利国产在线| 又黄又粗又硬又大视频| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品99久久99久久久不卡 | 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 97在线人人人人妻| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久久精品人妻al黑| 国产精品不卡视频一区二区| 99国产综合亚洲精品| av.在线天堂| 一区在线观看完整版| 日日撸夜夜添| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜免费鲁丝| 嫩草影院入口| a 毛片基地| 久久亚洲国产成人精品v| 免费大片黄手机在线观看| 国产av码专区亚洲av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美精品一区二区大全| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产精品一区二区在线不卡| 在线观看国产h片| 亚洲成人一二三区av| 欧美 日韩 精品 国产| 免费在线观看完整版高清| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产成人av激情在线播放| 大片免费播放器 马上看| 不卡av一区二区三区| 丝袜喷水一区| 国产淫语在线视频| av在线观看视频网站免费| 五月伊人婷婷丁香| 久久影院123| 国产在视频线精品| 亚洲国产色片| 欧美成人午夜免费资源| 久久久国产欧美日韩av| 成人毛片60女人毛片免费| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品一区在线观看国产| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 欧美成人午夜免费资源| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品一区二区在线观看99| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 成人黄色视频免费在线看| 视频区图区小说| 午夜福利视频精品| 热99国产精品久久久久久7| 成年动漫av网址| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 国产日韩欧美亚洲二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久久久国产网址| 日韩中文字幕视频在线看片| 伦理电影免费视频| 免费黄色在线免费观看| 久久久久久人人人人人| 男女午夜视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 91精品三级在线观看| 中文天堂在线官网| 日本av免费视频播放| 大片免费播放器 马上看| 欧美精品亚洲一区二区| 日本91视频免费播放| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲av成人精品一二三区| videossex国产| 久久人人爽人人片av| 亚洲第一av免费看| 大陆偷拍与自拍| 1024视频免费在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲国产色片| 美女午夜性视频免费| 国产在线视频一区二区| 永久免费av网站大全| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美中文综合在线视频| 亚洲国产色片| 18禁动态无遮挡网站| 日本免费在线观看一区| 91aial.com中文字幕在线观看| 夫妻午夜视频| 咕卡用的链子| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产午夜精品一二区理论片| 久久久久久久久久久免费av| 啦啦啦在线观看免费高清www| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 丝袜在线中文字幕| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲av成人精品一二三区| 黑人猛操日本美女一级片| 午夜精品国产一区二区电影| 久久婷婷青草| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 看非洲黑人一级黄片| 97在线视频观看| 五月天丁香电影| 18禁观看日本| av网站免费在线观看视频| 亚洲av成人精品一二三区| av国产久精品久网站免费入址| 国产精品国产三级国产专区5o| 男人添女人高潮全过程视频| 天堂中文最新版在线下载| av免费观看日本| a级毛片黄视频| 国产深夜福利视频在线观看| www.av在线官网国产| 一区二区三区精品91| 欧美精品国产亚洲| 18禁动态无遮挡网站| 少妇的逼水好多| 一区二区三区精品91| 男女国产视频网站| av电影中文网址| 亚洲第一av免费看| 精品酒店卫生间| 2018国产大陆天天弄谢| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久久久久久国产电影| www.av在线官网国产| 亚洲人成电影观看| 午夜老司机福利剧场| 欧美成人精品欧美一级黄| 免费在线观看完整版高清| 亚洲精品自拍成人| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品蜜桃在线观看| 国产成人精品在线电影| 国产黄频视频在线观看| 久久 成人 亚洲| 三级国产精品片| 亚洲av电影在线进入| 日韩伦理黄色片| 两个人看的免费小视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 蜜桃在线观看..| 亚洲伊人久久精品综合| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产精品久久久久久久久免| 91精品三级在线观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品久久久久久久久免| 九草在线视频观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 精品少妇久久久久久888优播| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美日韩精品网址| 国产成人精品一,二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久久久精品性色| 国产有黄有色有爽视频| 精品久久久久久电影网| 嫩草影院入口| 少妇精品久久久久久久| 国产精品av久久久久免费| 天堂8中文在线网| 啦啦啦啦在线视频资源| 尾随美女入室| 色婷婷av一区二区三区视频| 嫩草影院入口| 少妇的逼水好多| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久影院123| 国产日韩欧美在线精品| 成人毛片60女人毛片免费| 777米奇影视久久| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲五月色婷婷综合| 在线观看一区二区三区激情| 国产黄色免费在线视频| 亚洲四区av| 五月开心婷婷网| 波多野结衣一区麻豆| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久国产精品大桥未久av| 黄色怎么调成土黄色| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 999久久久国产精品视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 搡老乐熟女国产| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩一本色道免费dvd| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产成人精品无人区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品免费视频内射| 满18在线观看网站| 97在线视频观看| 在线观看www视频免费| 熟女电影av网| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 成人二区视频| 色网站视频免费| 亚洲av福利一区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 黄片无遮挡物在线观看| av国产精品久久久久影院| 在线观看人妻少妇| 成年人免费黄色播放视频| 成人国产麻豆网| 国产成人欧美| 亚洲av电影在线进入| 爱豆传媒免费全集在线观看| 伊人久久国产一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲久久久国产精品| 一区二区av电影网| 国产精品久久久久成人av| 女性生殖器流出的白浆| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲美女黄色视频免费看| 观看av在线不卡| 香蕉精品网在线| 熟女电影av网| 国产精品欧美亚洲77777| 国产免费又黄又爽又色| 久久免费观看电影| 观看美女的网站| 免费在线观看完整版高清| 最新中文字幕久久久久| 欧美人与性动交α欧美软件| 大香蕉久久网| 久久久久视频综合| 99热全是精品| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲av在线观看美女高潮| 伊人亚洲综合成人网| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 日韩欧美一区视频在线观看| 日韩中字成人| 又黄又粗又硬又大视频| 久久国产精品大桥未久av| 精品一区在线观看国产| 久久久久久久国产电影| 91国产中文字幕| 成年人午夜在线观看视频| 深夜精品福利| 国产成人精品婷婷| 国产爽快片一区二区三区| 欧美精品一区二区免费开放| 中国国产av一级| 午夜免费观看性视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲精品国产av成人精品| 91精品三级在线观看| 少妇的丰满在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲三级黄色毛片| 日本wwww免费看| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲成色77777| 久久国产亚洲av麻豆专区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产黄色免费在线视频| av不卡在线播放| 久久av网站| 国产男人的电影天堂91| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲成人手机| 最近中文字幕2019免费版| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产成人91sexporn| 在线观看www视频免费| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 好男人视频免费观看在线| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲久久久国产精品| 777米奇影视久久| 免费少妇av软件| 国产麻豆69| 久久久久久免费高清国产稀缺| 男女免费视频国产| 久久精品国产综合久久久| 亚洲第一青青草原| 777米奇影视久久| 成年女人在线观看亚洲视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 少妇 在线观看| 两性夫妻黄色片| 国产成人aa在线观看| 99国产综合亚洲精品| 亚洲国产欧美网| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 制服人妻中文乱码| tube8黄色片| 男女边吃奶边做爰视频| 高清在线视频一区二区三区| 国产黄频视频在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品,欧美精品| 下体分泌物呈黄色| 叶爱在线成人免费视频播放| 天堂中文最新版在线下载| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产成人一区二区在线| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲av.av天堂| 婷婷成人精品国产| 视频在线观看一区二区三区| 国产日韩欧美视频二区| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲欧美清纯卡通| 久久久久久久久久久免费av| 搡老乐熟女国产| 午夜免费观看性视频| 中文字幕色久视频| 久久久精品免费免费高清| 爱豆传媒免费全集在线观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 极品人妻少妇av视频| av线在线观看网站| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久精品久久久久久久性| 国产国语露脸激情在线看| 黄色 视频免费看| 街头女战士在线观看网站| 日韩一区二区三区影片| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 精品一区二区免费观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲伊人色综图| 视频区图区小说| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产爽快片一区二区三区| 免费观看a级毛片全部| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 成人黄色视频免费在线看| 激情视频va一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲精品,欧美精品| 美女视频免费永久观看网站| 麻豆av在线久日| 亚洲精品第二区| 亚洲av中文av极速乱| 国产成人欧美| 亚洲av成人精品一二三区| 熟妇人妻不卡中文字幕| 视频区图区小说| 日本欧美视频一区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一区福利在线观看|