宮凈液防治奶牛子宮內(nèi)膜炎試驗(yàn)報(bào)告

李世宏,楊亞軍,秦 哲,劉希望,孔曉軍,焦增華,李劍勇

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅 蘭州 730050)

奶牛子宮內(nèi)膜炎是子宮內(nèi)膜受病原微生物感染而發(fā)生的炎癥,是奶牛養(yǎng)殖業(yè)中的3 大常見(jiàn)病之一,我國(guó)該病發(fā)病率一般為5%～25%,最高可達(dá)30%,平均20% 左右。該病可導(dǎo)致奶牛不孕,胎間距延長(zhǎng),奶產(chǎn)量也降低,嚴(yán)重影響奶牛業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展,給奶牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,我國(guó)每年因該病治療造成的人力和醫(yī)藥費(fèi)損失高達(dá)數(shù)十億元人民幣。國(guó)內(nèi)外治療本病的藥物和方法也不少,但較理想的不多。為此,我們科研團(tuán)隊(duì)研制了治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的專用純中藥藥劑,進(jìn)行了臨床治療和預(yù)防試驗(yàn),取得了滿意的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 主要設(shè)備與器材 全自動(dòng)動(dòng)物血細(xì)胞分析儀(邁瑞B(yǎng)C2800V)和配套試劑、生物組織包埋機(jī)(KD-BM,浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司)、石蠟切片機(jī)(德國(guó)徠卡公司)、顯微鏡、冰箱(海爾BCD-257SL)、離心機(jī)、水浴鍋、20 mL 離心管、20 mL注射器、真空采血管、子宮內(nèi)膜組織活檢器、超聲波清洗機(jī)及實(shí)驗(yàn)室常用器皿等。

1.2 藥品 宮凈液,純中藥合劑,棕褐色液體,久置有微量沉淀,氣香,味微酸苦;規(guī)格為100 mL/瓶、500 mL/瓶。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所研制中試產(chǎn)品。

1.3 治療試驗(yàn)

1.3.1 病例 甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心、臨洮宏達(dá)奶牛養(yǎng)殖等6 個(gè)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)的患子宮內(nèi)膜炎奶牛,共收治155 例。

1.3.2 用法用量 用藥前,試驗(yàn)牛必須嚴(yán)格執(zhí)行外陰部清洗與消毒措施。以直腸把握子宮頸法通過(guò)輸精管將藥液注入子宮腔內(nèi),每次100 mL,隔日1次,3～4 次1 個(gè)療程,一般1 個(gè)療程即可治愈。注意,灌注的宮凈液藥液溫度應(yīng)接近患牛體溫。

1.3.3 療效判定 用藥前后治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的療效判定標(biāo)準(zhǔn)可以為試驗(yàn)用藥提供理論和實(shí)踐依據(jù)。具體判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

表1 治療奶牛子宮內(nèi)膜炎療效判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4 對(duì)患牛血液白細(xì)胞和子宮局部炎性細(xì)胞的影響 治療前后分別于奶牛尾靜脈采集血液,進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類;治療前后采集子宮頸口分泌物,涂片,姬姆薩染色,顯微鏡下檢查計(jì)數(shù),如果100 個(gè)視野內(nèi)出現(xiàn)的白細(xì)胞在10 個(gè)以內(nèi)判為(-),11～30 個(gè)判為(+),31～80 個(gè)判為(++),81～150 個(gè)判為(+++),151 個(gè)以上判為(++++)。

1.5 對(duì)子宮內(nèi)膜炎病原菌的作用

1.5.1 對(duì)體內(nèi)病原菌的作用 對(duì)72 例子宮內(nèi)膜炎患牛于治療前和停藥后第10 天,盡可能無(wú)菌操作采取患牛子宮頸內(nèi)分泌物,培養(yǎng)、分離和鑒定細(xì)菌。

1.5.2 按倍比稀釋法將宮凈液從1∶50(40 mg/mL)開(kāi)始,到1∶12 800(0.08 mg/mL)共稀釋為10個(gè)梯度,對(duì)從子宮內(nèi)膜炎病例分離的6 種159 株病原菌進(jìn)行了抑菌試驗(yàn)。

1.6 治療前后子宮病理組織學(xué)檢查 用子宮內(nèi)膜組織活檢器采取治療前和治愈后的子宮內(nèi)膜組織,制片,顯微鏡下觀察比較。

1.7 治療患牛乳中孕酮含量測(cè)定 治療前采集乳樣1 次,以后每隔3 d 采乳樣1 次,直至有臨床發(fā)情表現(xiàn)為止。乳樣放射免疫分析法(RIA)測(cè)定孕酮含量。

1.8 預(yù)防試驗(yàn)

1.8.1 試驗(yàn)?zāi)膛?在甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心、臨洮宏達(dá)奶牛養(yǎng)殖等6 個(gè)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)選無(wú)難產(chǎn)、胎衣不下、陰道脫和子宮脫的產(chǎn)后母牛,年齡和胎次均接近,按產(chǎn)犢順序分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。

1.8.2 預(yù)防方法 試驗(yàn)組奶牛在產(chǎn)后4～6 d 子宮灌注宮凈液(藥液溫水熱浴,溫度接近奶牛體溫)100 mL,對(duì)照組奶牛不做任何處理。

2 結(jié)果

2.1 治療結(jié)果 用宮凈液治療子宮內(nèi)膜炎試驗(yàn)?zāi)膛?55 例,痊愈132 例,好轉(zhuǎn)11 例,無(wú)效12 例,治愈率為85.16%,有效率為92.26%;治療后3 個(gè)情期受胎129 例,受胎率為83.23%;治愈后的牛只(132頭)3 個(gè)情期受胎率為97.72%。健康對(duì)照組(剔除子宮內(nèi)膜炎試驗(yàn)?zāi)膛?142 例,產(chǎn)后3 個(gè)情期受胎116 例,受胎率為81.69%。試驗(yàn)收治的病例多為嚴(yán)重的子宮內(nèi)膜炎(久治無(wú)效或病程較久)或用一般抗生素治療無(wú)效;在132 例治愈的奶牛中82.58%(109 例)是1 個(gè)療程治愈,12.88%(17 例)是2 個(gè)療程治愈,只有4.55%(6 例)用了3 個(gè)療程治愈,宮凈液表現(xiàn)出良好的治療效果。治愈牛3 個(gè)情期受胎率達(dá)到97.72%,明顯高于健康對(duì)照組產(chǎn)后3 個(gè)情期的受胎率,表明宮凈液有良好的促進(jìn)子宮機(jī)能恢復(fù)、促進(jìn)卵巢功能、提高受胎率的作用。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 臨床治療奶牛子宮內(nèi)膜炎情況

2.2 宮凈液對(duì)患牛血液炎性和子宮局部炎性細(xì)胞的影響 治療前患牛白細(xì)胞總數(shù)均高于正常值,治愈后恢復(fù)到正常范圍,治療前嗜中性細(xì)胞比例明顯升高,治療后亦恢復(fù)到正常范圍,治療前淋巴細(xì)胞比例明顯降低,治療后亦恢復(fù)到正常范圍。檢查53例病牛子宮頸口分泌物白細(xì)胞,治療前白細(xì)胞量(++)～(++++)的47 例,(+)的6 例;治療后43 例轉(zhuǎn)為(-),6 例為(+),4 例為(++)。治療后隨著炎癥減輕或痊愈,分泌物中白細(xì)胞減少或消失。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 53 例子宮內(nèi)膜炎治療前后血液白細(xì)胞數(shù)

2.3 宮凈液對(duì)子宮內(nèi)膜炎病原菌的作用 宮凈液對(duì)6 種159 株病原菌的化膿鏈球菌、乳房鏈球菌、乳鏈球菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺菌作用較強(qiáng),3～5 min 即可全部殺死;對(duì)綠膿桿菌效果弱,需要10 min 以上方可殺死。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 宮凈液對(duì)6 種159 株病原菌的抑菌結(jié)果

2.4 治療前后子宮病理組織學(xué)變化 治療前子宮內(nèi)膜活檢,鏡檢可見(jiàn)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞腫大、變形、核固縮,黏膜下固有膜有大量嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)、聚集,黏膜表面本身變成膿膜。治療后子宮內(nèi)膜活檢,鏡檢可見(jiàn)子宮內(nèi)膜炎癥反應(yīng)消退,黏膜下微小膿腫灶消失。檢查結(jié)果見(jiàn)表5。

2.5 對(duì)子宮內(nèi)膜炎患牛乳中孕酮含量的影響治療前卵巢有黃體的30 例子宮內(nèi)膜炎患牛乳汁孕酮含量平均為(9.44±6.65)ng/mL;第一次子宮灌注宮凈液后,9 例在3 d 內(nèi)、14 例在6 d 內(nèi)、其余均在15 d 內(nèi)乳汁孕酮含量降至2 ng/mL 以下,說(shuō)明宮凈液有較好的溶解黃體的作用;治療后平均(13.8±8.4)d 降至(1.0±0.9)ng/mL 時(shí),表明黃體消退、卵泡發(fā)育;而臨床上觀察的發(fā)情時(shí)間平均為治療后(38.2±21.7)d,較孕酮分析確定的卵泡發(fā)育晚25 d 左右。

表5 治療前后子宮內(nèi)膜病理組織變化結(jié)果

治療前卵巢無(wú)黃體患牛,乳汁孕酮平均含量為(0.65±0.36)ng/mL,治療后孕酮含量在低水平波動(dòng),到(15.8±9.1)d 乳汁孕酮開(kāi)始升高,(21.3±8.6)d 增至(4.14±2.54)ng/mL 時(shí),并繼續(xù)增高,表明已有泡發(fā)育、排卵并形成黃體,以后轉(zhuǎn)為18 d 左右的正常周期性變化。這些患牛臨床觀察到的發(fā)情時(shí)間平均為治療后(41.7±19.6)d,較孕酮分析確定的卵泡發(fā)育晚26 d 左右。

2.6 預(yù)防效果 奶牛子宮內(nèi)膜炎大多數(shù)是由于產(chǎn)后早期感染所至。妊娠期子宮局部處于免疫抑制狀態(tài),產(chǎn)后早期子宮的正常防御機(jī)制還未建立起,而此時(shí)子宮頸口開(kāi)張,病原菌可以自由進(jìn)入,子宮復(fù)舊過(guò)程中脫落的母體胎盤(pán)、殘留在子宮內(nèi)的血液和胎水都為病原菌繁殖提供了良好的基質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)。前蘇聯(lián)學(xué)者報(bào)道,正常分娩母牛產(chǎn)后第1 天,子宮沖洗液1 mL 內(nèi)含有52.5 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌,第3 天含有273 萬(wàn)個(gè),第5 天含有948 萬(wàn)個(gè),第7 天含有325 萬(wàn)個(gè),第15 天含有34.8 萬(wàn)個(gè)。產(chǎn)后5 d 是子宮內(nèi)細(xì)菌最易繁殖的時(shí)期,在此時(shí)給奶牛子宮灌注宮凈液獲得了理想的效果,試驗(yàn)組子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率只有5%而同期對(duì)照組發(fā)病率為16.9%,比較差異顯著(P＜0.05);產(chǎn)后3 個(gè)情期受胎率試驗(yàn)組較對(duì)照組提高9.43%。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 宮凈液對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎預(yù)防試驗(yàn)

3 結(jié)論

宮凈液是治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的純中藥制劑,該藥組方清熱解毒、活血化瘀、抗菌消炎、縮宮排膿的治療原則。試驗(yàn)表明,宮凈液對(duì)引起子宮內(nèi)膜炎的常見(jiàn)病原菌有很好的抑制和殺滅作用;能抑制慢性炎灶中的肉芽組織增生,減輕炎癥過(guò)程的病理?yè)p傷,有良好的抗炎和促進(jìn)組織恢復(fù)的作用;可以增強(qiáng)子宮平滑肌的興奮性,促進(jìn)子宮收縮,但不引起子宮的強(qiáng)直性收縮,有良好的縮宮排膿作用;對(duì)卵巢機(jī)能有良性調(diào)節(jié)作用,有利于母牛生殖機(jī)能的恢復(fù),提高治愈牛的受胎率。臨床應(yīng)用取得了良好的治療和預(yù)防效果,療效確實(shí),治愈后的奶牛奶產(chǎn)量有增加的趨勢(shì),得到了養(yǎng)殖戶的認(rèn)可,是治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的理想藥劑。