白細(xì)胞介素-17A 水平及基因多態(tài)性與宮頸癌相關(guān)性

賴 婷 朱 燕 陳 琳

貴州省貴陽市婦幼保健院婦科，貴州貴陽 550003

宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性健康的常見疾病，我國宮頸癌發(fā)病率逐年上升，死亡率隨年齡增加而增高[1]。研究認(rèn)為宮頸癌是由多因素造成的，人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染已被明確為宮頸癌的主要病因。但HPV 易感性受到參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子的基因多態(tài)性影響，而且在宮頸癌的發(fā)展過程有多種細(xì)胞因子的基因多態(tài)性發(fā)揮作用[2]。白細(xì)胞介素-17（interleukin-17，IL-17）是一種炎性細(xì)胞因子，在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[3-5]。IL-17 家族有多個(gè)細(xì)胞因子和受體，IL-17A 就是其家族的重要成員，rs2275913 基因位于IL-17A 的啟動(dòng)子區(qū)。本研究通過對(duì)宮頸癌患者血清IL-17A 含量及其啟動(dòng)子基因多態(tài)性的檢測，探討IL-17A 水平及其啟動(dòng)子的基因多態(tài)性與宮頸癌的相關(guān)性，旨在為治療及預(yù)測宮頸癌臨床預(yù)后提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012 年3 月～2016 年3 月在貴州省貴陽市婦幼保健院（以下簡稱“我院”）進(jìn)行手術(shù)治療的宮頸癌患者185 名作為研究組，同期于我院門診體檢的健康女性185 例作為對(duì)照組。研究組年齡23～68 歲，平均（43.45±5.12）歲，對(duì)照組年齡25～55 歲，平均（41.33±5.24）歲，兩組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），具有可比性。兩組均排除心、腎、肝、內(nèi)分泌疾病，妊娠及其他惡性腫瘤等病史。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，兩組人群自愿參加本課題研究，均簽署知情同意書。

1.2 方法

空腹采集外周血3 mL，離心后取血清放置于-80℃冰箱保存，集中檢測兩組血清中IL-17A 水平和啟動(dòng)子rs2275913 的基因多態(tài)性。酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（上海藍(lán)基生物科技公司，批號(hào)：E01I0362）測定血清IL-17A 的含量；DNA 提取參照血基因組DNA 小量試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：D0063）。按說明書進(jìn)行，測定DNA 樣本濃度后置于-80℃冰箱保存。Taqman探針法分析兩組IL-17A 基因啟動(dòng)子rs2275913（G/A）基因型，使用7500 熒光定量PCR 儀（美國ABI 公司）完成目的片段的擴(kuò)增和基因型檢測。IL-17A 基因rs2275913 引物序列為，F(xiàn)：5′-ATTTCTGCCCTTCCCATTTT-3′R：5′-CCCAGGAGTCATCGTTGTTT-3′。IL-17A rs2275913 分別將A 位點(diǎn)探針的5′端標(biāo)記為VIC（fluorescent VIC dye），G 位點(diǎn)探針5′端標(biāo)記為FAM（fluorescent FAM dye）從而檢測A堿基和G 堿基。PCR 擴(kuò)增程序包括95℃活化10 min，92℃變性15 s，65℃退火45 s，72℃延伸45 s，共循環(huán)40 次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；多因素分析采用Logistic 回歸分析。以P <0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清IL-17A 含量比較情況

研究組血清IL-17A 含量為（44.18±16.62）ng/L，對(duì)照組血清IL-17A 含量為（26.72±9.64）ng/L，兩組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。

2.2 兩組IL-17A 基因啟動(dòng)子rs2275913 頻率分布情況

經(jīng)Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律檢驗(yàn)，所有基因型在兩組中均符合遺傳平衡，具有群體代表性。結(jié)果顯示，兩組中基因型AG 出現(xiàn)的頻率高；且研究組基因型AA 出現(xiàn)的頻率高于基因型GG，對(duì)照組則相反；比較差異有有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）。同時(shí)與對(duì)照組比較，研究組A 等位基因出現(xiàn)的頻率高于G 等位基因，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.007）。見表1。

表1 IL-17A 基因啟動(dòng)子rs2275913 位點(diǎn)的基因頻率分布[例（%）]

2.3 IL-17A 基因多態(tài)性與宮頸癌易感性的相關(guān)性分析

與基因型GG 人群比較，基因型AA 人群患宮頸癌的危險(xiǎn)性顯著增高（P=0.006，OR=2.31，95%CI：1.27～4.20），但是基因型AG 人群發(fā)生宮頸癌的危險(xiǎn)性不顯著。見表2。

表2 IL-17A 基因多態(tài)性與宮頸癌易感性的相關(guān)性分析（例）

2.4 IL-17A 基因多態(tài)性與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性分析

結(jié)果顯示，IL-17A 等位基因頻率與臨床分期（P=0.001，OR=0.48，95%CI：0.32～0.73）、分化程度（P=0.000，OR=2.21，95%CI：1.46～3.36）、脈管侵潤（P=0.040，OR=1.53，95%CI：1.01～2.31）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.003，OR=0.52，95%CI：0.34～0.80）具有相關(guān)性；與年齡、宮頸間質(zhì)浸潤、宮旁侵潤無關(guān)（P >0.05）。見表3。

2.5 血清IL-17A 含量及基因多態(tài)性與宮頸癌易感性的相關(guān)性分析

研究組和對(duì)照組血清IL-17A 含量平均為35 ng/L，在血清IL-17A 含量＜35 ng/L 的人群中，基因型AA 人群宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)為1.995 倍（95%CI：0.880～4.520），但在血清IL-17A 含量≥35 ng/L 的人群中，基因型AA 人群宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)上升至2.500 倍（P=0.049，95%CI：1.00～6.23）。見表4。

3 討論

據(jù)我國國家癌癥中心數(shù)據(jù)顯示，2015 年我國新發(fā)宮頸癌9.89 萬例，死亡3.05 萬例[6]。宮頸癌嚴(yán)重威脅我國婦女的生命及身體健康，高危型HPV 持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸癌的主要原因，但是單獨(dú)HPV 感染不足以致癌，有效細(xì)胞因子產(chǎn)生的免疫應(yīng)答在促進(jìn)或抵制HPV 感染中起關(guān)鍵作用。HPV 的易感性可能受到參與免疫反應(yīng)的基因多態(tài)性的影響。個(gè)體基因組學(xué)突變是導(dǎo)致人群發(fā)生差異性、多樣性的重要因素，也是腫瘤易感性差異化的重要原因之一[7]?；蛲蛔?，尤其是啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性，影響基因轉(zhuǎn)錄的過程，致使對(duì)應(yīng)基因異常表達(dá)，蛋白質(zhì)功能發(fā)生變化，影響個(gè)體對(duì)癌癥的易感性[8]。近年研究表明宮頸癌有遺傳傾向，且與多種易感基因多態(tài)性緊密相關(guān)[2]。

表3 IL-17A 基因多態(tài)性與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性分析[例（%）]

表4 血清IL-17A 含量、基因多態(tài)性與宮頸癌易感性分析（例）

IL-17 是由初始CD4T 淋巴細(xì)胞分化的Th-17 效應(yīng)細(xì)胞分泌，是具有多種生物學(xué)效應(yīng)的重要炎癥介質(zhì)。IL-17 可作用于不同的靶細(xì)胞，誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子，參與細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)，可招募白細(xì)胞，促進(jìn)多種細(xì)胞釋放炎性因子，促進(jìn)血管生成，促進(jìn)細(xì)胞增殖，從而介導(dǎo)腫瘤、炎癥等病理狀態(tài)發(fā)生及發(fā)展。研究認(rèn)為Th-17 細(xì)胞免疫應(yīng)答及其效應(yīng)因子IL-17可促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展[9-14]。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者血清IL-17A 含量較正常組明顯升高；陳志芳等[11]研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變患者手術(shù)治療后3 個(gè)月，Th-17/Treg 比率降低、血清IL-17 水平明顯降低、HPV 明顯轉(zhuǎn)陰，提示IL-17 可能直接參與宮頸HPV感染的免疫逃避，并與宮頸癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)。IL-17 基因多態(tài)性和一些疾病遺傳易感性有關(guān)，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、胃癌、乳腺癌等[15-18]。Quan 等[19]研究發(fā)現(xiàn)IL-17A 基因rs2275913 不僅與宮頸癌易感性、宮頸癌高風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，而且與高臨床分期及脈管癌栓陽性相關(guān)。Cong 等[20]發(fā)現(xiàn)rs2275913 多態(tài)性影響宮頸癌的發(fā)展，提示IL-17A 可能參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。本研究也發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者基因型AA 和A 等位基因出現(xiàn)的頻率高于對(duì)照組，提示IL-17A 基因多態(tài)性與宮頸癌患病的風(fēng)險(xiǎn)性相關(guān)。但與劉素芹等[21]未發(fā)現(xiàn)rs2275913 基因型與患宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的研究結(jié)果不一致，可能與地域性遺傳特質(zhì)性及樣本量不同有關(guān)。本研究還提示IL-17A 基因多態(tài)性與臨床分期、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵潤相關(guān)；高IL-17A 水平人群中，AA 基因型患宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)更高，認(rèn)為IL-17A 水平及基因多態(tài)性與宮頸癌進(jìn)展密切有關(guān)。趙子龍等[9]發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者術(shù)前給予化療，不僅可以縮小宮頸腫瘤體積，還可抑制宮頸癌組織中IL-17 的表達(dá)，減少宮頸癌復(fù)發(fā)。因此，這些研究結(jié)果顯示，IL-17A基因及產(chǎn)生的細(xì)胞因子促進(jìn)宮頸癌的進(jìn)展。

綜上所述，本研究提示IL-17A 水平及基因多態(tài)性與宮頸癌遺傳易感性相關(guān)，且其在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色，其具體機(jī)制還需進(jìn)一步深入探討。