HPLC 法測(cè)定不同月份遠(yuǎn)志中遠(yuǎn)志皂苷的含量

劉慶華，郭海利，姚 瑩，王小莉，張 欣，張雪娟，張小民

（1.太原市食品藥品檢驗(yàn)所，山西太原030006；2.山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006；3.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

細(xì)葉遠(yuǎn)志（Polygala tenuifolia Willd）為遠(yuǎn)志科植物的一種，與卵葉遠(yuǎn)志（Polygala sibirica L.）共同收錄于《中國(guó)藥典》2015 版[1]。遠(yuǎn)志的干燥根為中醫(yī)常用藥，其功效主要有益智、安神、解酒、祛痰、鎮(zhèn)咳、抗衰老及抑菌等[2-7]。遠(yuǎn)志資源分布廣泛，其中山西種植面積最廣[8]。已有研究者對(duì)不同產(chǎn)地遠(yuǎn)志的質(zhì)量進(jìn)行了評(píng)價(jià)，認(rèn)為山西和陜西為遠(yuǎn)志的道地產(chǎn)區(qū)，均為細(xì)葉遠(yuǎn)志，質(zhì)量最好[9-11]。遠(yuǎn)志的化學(xué)成分主要有三萜皂苷類(lèi)、酮類(lèi)、寡糖脂類(lèi)及生物堿類(lèi)等[12-13]。細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷（C36H56O12）、遠(yuǎn)志酮Ⅱ（C25H28O15）和3，6- 二芥子?；崽牵–36H46O17）作為遠(yuǎn)志的主要藥用有效成分，共同被收載于藥典[1]。

本試驗(yàn)以遠(yuǎn)志皂苷為指標(biāo)，通過(guò)HPLC 法測(cè)定并比較2 年生遠(yuǎn)志在不同采收月份中遠(yuǎn)志皂苷的含量，以確定該地區(qū)遠(yuǎn)志的最佳采收時(shí)期。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為2018 年3—10 月每月下旬在平遙縣中藥基地采收的遠(yuǎn)志根部，干燥粉碎后備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱為Kinetex C18（4.6 mm×100 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；流動(dòng)相為甲醇-0.05%磷酸溶液（體積比70∶30）；柱溫為30 ℃；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL。

1.2.2 溶液制備

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取適量細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對(duì)照品，精密稱(chēng)定，加甲醇配制為1.0 mg/mL 的溶液。

1.2.2.2 供試品溶液的制備 供試品粉末過(guò)（355±13）μm 篩，精密稱(chēng)定1 g，置錐形瓶中，加入70%甲醇50 mL，超聲處理（400 W，40 kHz）1 h，放冷后再次稱(chēng)質(zhì)量，70%甲醇補(bǔ)質(zhì)量。搖勻過(guò)濾后取過(guò)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)屑尤?0%氫氧化鈉溶液50 mL，加熱回流2 h，放冷后調(diào)pH 值為4～5。50 mL 水飽和的正丁醇振搖提取，共3 次，合并正丁醇，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，定容，搖勻即得。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

按照1.2.2 溶液的制備方法，將遠(yuǎn)志皂苷標(biāo)準(zhǔn)品配制成質(zhì)量濃度分別為5，10，20，25，50，100 μg/mL 的溶液，在1.2.1 的色譜條件下測(cè)定相對(duì)峰面積與相對(duì)保留時(shí)間，得到標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（圖1）。以遠(yuǎn)志皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)、相對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸直線(xiàn)方程為：y＝2.990 6x＋0.629 6（R2＝0.999 9），線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.2 精密度試驗(yàn)

取相同質(zhì)量濃度的供試品溶液，在1.2.1 色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5 次，測(cè)定峰面積，RSD 為0.56%，表明儀器精密度良好。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取9 月份采收的樣品，分成5 份，每份1 g，配制供試液，在1.2.1 色譜條件下分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，RSD＝1.18%（n＝5）＜3%，表明樣品重現(xiàn)性好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取適量8 月份采收的樣品，分別在0，2，4，6，8，12 h 按照1.2.1 的色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)得RSD為0.45%，表明樣品在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的供試品1 g，加入0.5 mg 遠(yuǎn)志皂苷對(duì)照品，制備供試液，進(jìn)行含量測(cè)定，并計(jì)算回收率。結(jié)果表明，平均回收率為98.47%，RSD 為0.87%（表1），遠(yuǎn)志中遠(yuǎn)志皂苷回收率符合要求。

表1 遠(yuǎn)志中遠(yuǎn)志皂苷回收率測(cè)定結(jié)果

2.6 樣品測(cè)定

將不同月份采收的遠(yuǎn)志樣品按1.2.2.2 方法制備成待測(cè)試樣，相同色譜條件下測(cè)定待測(cè)樣品。測(cè)定結(jié)果顯示，3—10 月遠(yuǎn)志皂苷含量分別為：0.484%，0.358%，0.607%，0.687%，1.376%，0.941%，1.308%，1.821%（圖2）。由圖2 可知，隨著遠(yuǎn)志生長(zhǎng)月份的增加，遠(yuǎn)志中遠(yuǎn)志皂苷的含量呈上升趨勢(shì)，在10 月份達(dá)到最高值（1.821%）。10 月份樣品的色譜圖如圖3 所示。

3 結(jié)論與討論

山西是遠(yuǎn)志種植最為廣泛的地區(qū)。關(guān)于遠(yuǎn)志中皂苷含量的測(cè)定，諸多學(xué)者進(jìn)行了研究。目前，利用HPLC 法測(cè)定遠(yuǎn)志中細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的方法已基本成熟，并收錄于2015 版《中國(guó)藥典》中。李軍等[14]建立了HPLC 法測(cè)定遠(yuǎn)志中總皂苷含量的方法。劉可等[15]建立了HPLC- CAD 法測(cè)定遠(yuǎn)志中細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量的方法。劉雪梅等[16]利用HPLC 法測(cè)定了遠(yuǎn)志合劑中細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的含量。趙云生等[17]對(duì)晉產(chǎn)遠(yuǎn)志資源的皂苷元含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，遠(yuǎn)志皂苷元含量與該資源所屬的農(nóng)業(yè)氣候區(qū)相關(guān)，其中，太原盆地、上黨盆地、晉西丘陵等氣候區(qū)皂苷元含量較高。

本試驗(yàn)材料采收于平遙基地，屬于太原盆地，該地較為適宜遠(yuǎn)志資源的人工種植。劉艷芳等[9]對(duì)不同來(lái)源的遠(yuǎn)志資源進(jìn)行過(guò)有效成分的定量分析，結(jié)果表明，陜西、山西種植的遠(yuǎn)志資源質(zhì)量較高，測(cè)定了山西萬(wàn)榮遠(yuǎn)志種植基地不同月份采收的遠(yuǎn)志中細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的含量，發(fā)現(xiàn)3—5 月與10—11 月為細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量最高時(shí)期。本試驗(yàn)中細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量在3—10 月呈上升趨勢(shì)，10 月達(dá)到最高。本試驗(yàn)結(jié)果與劉艷芳等[9]的結(jié)果不一致，是因?yàn)檫h(yuǎn)志種植地區(qū)不同，本試驗(yàn)材料采自于太原盆地，劉艷芳等[9]的試驗(yàn)材料采自運(yùn)城盆地，兩地溫度、氣候、濕度等都存在差異，遠(yuǎn)志資源的質(zhì)量因種植地區(qū)而異。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，平遙中藥基地遠(yuǎn)志資源中遠(yuǎn)志皂苷含量隨生長(zhǎng)月份的增加而增加，最佳采收時(shí)期為10 月。研究結(jié)果為遠(yuǎn)志資源的采收時(shí)期提供了理論依據(jù)。