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      越鞠丸對功能性消化不良模型大鼠血清MTL 水平及胃竇黏膜NO 表達(dá)的影響

      2019-11-19 06:28:26徐嘉淦龍惠珍
      浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志 2019年11期
      關(guān)鍵詞:飲水量莫沙胃竇

      徐嘉淦 葉 影 龍惠珍

      功能性消化不良(functional dyspepsia,F(xiàn)D)是一種常見的功能紊亂的消化系統(tǒng)疾病。FD 發(fā)病機(jī)制尚不明確,但隨著對FD 研究的不斷深入,胃腸動力障礙、胃腸激素水平失調(diào)以及腦-腸軸功能失調(diào)被認(rèn)為是其病理生理學(xué)基礎(chǔ)。2017 年中醫(yī)診療共識,將FD分為五型并對應(yīng)相應(yīng)方劑,分別為脾虛氣滯證(香砂六君子湯)、肝胃不和證(柴胡疏肝散)、脾胃濕熱證(連樸飲)、脾胃虛寒證(理中丸)、寒熱錯(cuò)雜證(半夏瀉心湯)[1]。越鞠丸出自《丹溪心法》,主要組成為蒼術(shù)、川芎、焦山梔、神曲、連翹、香附。丹溪治郁所強(qiáng)調(diào)的是以調(diào)中為主,用越鞠丸以開胃腸三焦之郁,從而使胸膈痞悶、胃脘脹痛、噯腐吞酸、惡心欲吐、飲食積滯等癥消失。本研究通過動物實(shí)驗(yàn),觀察越鞠丸對FD 大鼠胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率以及血清胃動素(MTL)水平、胃竇黏膜一氧化氮(NO)含量的影響,探討其可能的作用機(jī)制。

      1 實(shí)驗(yàn)材料

      1.1 實(shí)驗(yàn)動物 48 只SPF 級SD 大鼠,雄性,由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心代為采購并飼養(yǎng)于該中心,動物合格證號:SYXK(浙)2016-0148,動物實(shí)驗(yàn)室許可證:X1602001。倫理審查編號:ZSLL-2016-135。

      1.2 藥物與試劑 越鞠丸藥物組成:香附、川芎、蒼術(shù)、梔子、神曲各10g,由浙江省中醫(yī)院中藥房提供。所有藥物由浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥理實(shí)驗(yàn)室制備,藥物加10 倍水后先浸泡1h,再大火煎煮1h,過濾部分藥渣,再加入6 倍水煎1h,過濾藥渣,把2 次水煎液合并,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮成生藥濃度0.45、0.9、1.8g/mL,置4℃冰箱備用。枸櫞酸莫沙必利片(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司,規(guī)格:5mg/片,批號B14200018378),與蒸餾水比配成濃度0.15mg/mL 的混懸液,置4℃冰箱備用。半固體營養(yǎng)糊[2]:羧甲基纖維素鈉(上海申光食用化學(xué)品有限公司)5g、奶粉8g、糖4g、淀粉4g、墨汁2mL、蒸餾水125mL 配成,濃度1g/mL,臨用前配置使用。血清胃動素(MTL)試劑盒(上海信裕生物科技有限公司,批號XY-E12646);一氧化氮(NO)試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號AOB-1)。

      1.3 儀 器 酶標(biāo)儀(芬蘭Labsystems Multiskan MS 公司),玻璃勻漿器(海門市盛泰實(shí)驗(yàn)器材廠);超低溫冰箱:日本SANYO MDF-382EAANSS;脫水機(jī)、包埋機(jī)、病理切片機(jī)、凍臺、組織攤片機(jī)(上海徠卡儀器有限公司)。

      2 實(shí)驗(yàn)方法

      2.1 分組及處理 48 只SPF 級健康雄性SD 大鼠,4周齡,體質(zhì)量(150±20)g,所有大鼠在室溫20℃,安靜,光照12h 的環(huán)境下,自由進(jìn)食、飲水,每天定時(shí)清潔動物房。適應(yīng)性飼養(yǎng)3 天后,稱重,隨機(jī)分為空白組、模型組、莫沙必利組、越鞠丸低、中、高劑量組??瞻捉M大鼠予以自由飲水、進(jìn)食;模型組、莫沙必利組、越鞠丸組按照郭氏夾尾法進(jìn)行模型制備,每組8 只[3]。越鞠丸低、中、高劑量分別按4.5、9、18g/kg 進(jìn)行灌胃,各組1 次/天,每次2mL;莫沙必利組予莫沙必利0.3mg/200g,每次2mL,空白組及模型組用生理鹽水2mL 代替。均連續(xù)灌胃7 天。

      2.2 體質(zhì)量、飲水量、進(jìn)食量測定 每天上午9:00定時(shí)稱量各組大鼠體質(zhì)量,并做記錄。每天早8:00 給予各籠大鼠固定數(shù)量的固體顆粒飼料(或純凈水),至次日早8:00 測定剩余量。平均1 只大鼠每日進(jìn)食量(飲水量)=(每日給予大鼠總飼料(飲水量)一次日上午測定剩余量)/單籠大鼠數(shù)目。統(tǒng)計(jì)測評造模前后大鼠體重改變差值、飲水量差值與進(jìn)食量差值,以評價(jià)大鼠胃腸推動功能情況及造模是否成功,再測定大鼠的胃排空殘留率與腸推進(jìn)率。

      2.3 胃內(nèi)殘留率測定 給藥第7 天,末次給藥后禁食、水24h,每只大鼠用2mL 半固體營養(yǎng)糊灌胃,30min 后麻醉處死動物,眼球取血4mL,同時(shí)打開腹腔,取出大鼠胃及小腸。在胃的賁門和幽門處用細(xì)線扎緊,取出整個(gè)胃,用濾紙擦干,稱重。沿胃大彎將胃剪開,置于0.9%Nacl 溶液中充分清洗胃內(nèi)容物,用濾紙擦干,稱重。胃排空殘留率=[(胃全重-胃凈重)/半固體營養(yǎng)糊質(zhì)量(2g)]×100%。

      2.4 小腸推進(jìn)率測定 取出胃后,仔細(xì)分離腸系膜,將幽門至回盲部的一段腸管剪下,將腸管不加牽引平鋪于平板白紙上測量小腸長度和墨汁在小腸中的移行距離,小腸推進(jìn)率=(墨汁在小腸中的移行距離/小腸總長度)×100%。

      2.5 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(1)血清胃動素測定:眼球取血4mL,置于4℃下離心機(jī),以3000r/min 離心10min,分離血漿儲藏于-80℃超低溫冰箱保存,采取上清液按照大鼠胃動素(MTL)酶聯(lián)免疫分析檢測步驟檢測血清中MTL 含量。(2)胃竇NO 檢測:取出大鼠胃竇組織,用濾紙擦干,剪取部分,加入9 倍體積的生理鹽水,用玻璃勻漿器勻漿,再用2000r/min 的離心15min,取上清液保存于-80℃超低溫冰箱,按照硝酸還原酶法測定大鼠胃竇組織NO 含量。

      2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0 軟件統(tǒng)計(jì)創(chuàng)建數(shù)據(jù)庫進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用單因素方差分析(One-Way ANOVA),當(dāng)方差齊時(shí)用LSD 法,不齊時(shí)選用Dunnett’s T3 檢驗(yàn)。P<0.05 時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

      3.1 一般情況 按照郭氏夾尾法造模,不斷夾大鼠尾部,激怒之后的大鼠前肢抬高并站立,相互撕打?qū)χ?,并不斷發(fā)出“呼呼”的呼氣聲。造模后3 天發(fā)現(xiàn)其總進(jìn)食、飲水量減少,有部分大鼠出現(xiàn)焦慮、易怒、易驚;第5 天部分大鼠出現(xiàn)活動減少,打架反應(yīng)遲緩;第7 天大多數(shù)大鼠出現(xiàn)消瘦,毛發(fā)枯黃毛躁,脫落明顯,對外界刺激顯得緊張焦慮,與FD 大鼠模型表現(xiàn)基本相符。

      3.2 各組大鼠體質(zhì)量及飲食量、飲水量比較 造模后,模型組大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量、飲水量、進(jìn)食量下降;藥物治療后,各治療組大鼠體質(zhì)量并未出現(xiàn)明顯改變;但越鞠丸組均出現(xiàn)進(jìn)食量、飲水量明顯增加。

      3.3 各組大鼠胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率比較 與空白組大鼠比較,模型組大鼠胃內(nèi)殘留率增高明顯,小腸推進(jìn)率顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)性(P<0.05);與模型組大鼠比較,莫沙必利組、越鞠丸中、高組大鼠胃內(nèi)殘留率均降低(P<0.05),莫沙必利組、越鞠丸低、中、高組大鼠腸推進(jìn)率均升高(P<0.05),見表1。

      表1 各組大鼠胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率比較(%,±s)

      表1 各組大鼠胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率比較(%,±s)

      注:與空白組比較,*P<0.05;與模型組比較,△P<0.05;空白組、模型組:生理鹽水灌胃;莫沙必利組:莫沙必利0.3mg/200g 灌胃;越鞠丸低、中、高劑量組分別按4.5、9、18g/kg 灌胃;FD:功能性消化不良

      3.4 各組大鼠血MTL 含量、胃竇組織NO 水平比較與空白組比較,模型組大鼠血MTL 顯著降低,胃竇組織NO 含量顯著增加(P 均<0.05)。與模型組比較,莫沙必利組、越鞠丸中、高劑量組大鼠血清MTL均增加、胃竇組織NO 含量均減少(P 均<0.05)。越鞠丸高劑量組胃竇組織NO 含量與莫沙必利組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。越鞠丸中、高劑量組血MTL 與莫沙必利組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

      表2 各組大鼠胃竇NO、血MTL 含量比較(±s)

      表2 各組大鼠胃竇NO、血MTL 含量比較(±s)

      注:與空白組比較,*P<0.05;與模型組比較,△P<0.05;空白組、模型組:生理鹽水灌胃;莫沙必利組:莫沙必利0.3mg/200g 灌胃;越鞠丸低、中、高劑量組分別按4.5、9、18g/kg 灌胃;FD:功能性消化不良;NO:一氧化氮;MTL:胃動素

      4 討論

      MTL 主要存在于胃腸道及中樞神經(jīng)組織中,可控制胃腸道動力,調(diào)節(jié)胃收縮活動,其主要作用于胃腸道、膽管和oddis 括約肌等[4]。研究表明,MTL 可刺激胃腸道MMCⅢ期的收縮,為消化間期激素[5]。與胃腸運(yùn)動功能的關(guān)系十分密切[6]。

      NO 是抑制性神經(jīng)遞質(zhì),在胃腸活動以及其他許多疾病中起著重要作用。在腸神經(jīng)系統(tǒng)中通過一氧化氮合酶(NOS)作用生成的NO 可松弛胃腸道平滑肌,其對胃腸道運(yùn)動具有抑制作用[7]。

      本研究中,模型組與空白組比較,胃內(nèi)殘留量明顯增加,小腸推進(jìn)率明顯下降,同時(shí)模型組大鼠血清MTL 水平下降,胃竇黏膜NO 水平升高,提示FD 發(fā)病與血清MTL、NO 水平,胃腸運(yùn)動障礙密切相關(guān)。越鞠丸組胃內(nèi)殘留率下降,小腸推進(jìn)率升高,同時(shí)能增加血清MTL 分泌,下調(diào)NO 含量,其增強(qiáng)胃腸推動能力的作用機(jī)制可能與此相關(guān)。同時(shí)在越鞠丸低、中、高三組中,中劑量與高劑量效果較好,說明中藥在用量上亦存在量效關(guān)系。

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