硨磲人工繁育研究進展

鄧遠球，鄧岳文，梁飛龍

（廣東海洋大學水生生物博物館，廣東 湛江 524025）

硨磲屬軟體動物門Mollusca，雙殼綱Bivalvia，簾蛤目Veneroida，硨磲科Tridacnoidea，分布在印度尼西亞、緬甸、馬來西亞、菲律賓、澳大利亞、巴布亞新幾內亞、所羅門群島等國，以及我國臺灣、海南、西沙群島和南海等印度洋、太平洋海域[1-4]。目前，世界上報道的硨磲有2屬10種[1-4]，其中硨磲屬（Tridacna）有 8種，硨蠔屬（Hippopus）有 2種。在我國分布的硨磲有6種，分別為大硨磲（Tridacna gigas）、無鱗硨磲（Tridacnaderasa）、鱗硨磲（Tridacnasquamosa）、長硨磲（Tridacna maxima）、番紅硨磲（Tridacna crocea）和硨蠔（Hippopus hippopus）。

硨磲最顯著特征為硨磲與蟲黃藻（zooxanthellae）共生，蟲黃藻的種類不同含有的色素不同，使得硨磲外套膜具有孔雀藍、粉紅、翠綠、棕紅等鮮艷的顏色，并且具有各式各樣的花紋，蟲黃藻通過光合作用合成硨磲生長發(fā)育所需的絕大部分營養(yǎng)物質[5-7]。蟲黃藻的光合作用需要合適的光照，因此，硨磲的垂直分布受到與其共生的蟲黃藻的限制，多棲息在水面下20 m水深以內。

硨磲對海洋環(huán)境特別珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)具有重要作用，由于人們過度捕撈和生存環(huán)境變化，導致硨磲的大部分種類處于頻臨滅絕狀態(tài)[8-11]。為了保護硨磲的種群數量，從20世紀70年代開始，澳大利亞、菲律賓、帕勞、印度尼西亞和所羅門群島等先后開始進行硨磲的人工育苗和養(yǎng)殖技術研究[1-2，12-20]。我國硨磲人工育苗及養(yǎng)殖技術研究開展比較晚，人工育苗和養(yǎng)殖資料稀缺，僅見羅偉[21]進行了番紅硨磲幼蟲生長研究，張躍環(huán)等[22-23]進行了鱗硨磲和硨蠔人工繁育技術研究，譚圍等[24]進行了番紅硨磲循環(huán)水養(yǎng)殖模式研究，劉小霞等[25]等進行了光照對不同規(guī)格番紅硨磲氧、氨氮及磷酸鹽代謝的影響研究等。該文綜合國內外硨磲人工育苗的研究進展，以期為硨磲人工育苗的研究和推廣提供參考。

1 育苗的水質要求

硨磲育苗期間的水溫保持27～30℃，鹽度31～35，溶解氧大于 6 mg/L，pH 值 8.1～8.5[26]。Blidberg E[27]進行了銅離子和低鹽度對庫氏硨磲幼蟲生長發(fā)育和成活的影響試驗，結果表明海水鹽度從32降低到25時，盡管對幼蟲發(fā)育沒有影響，但培育3 d成活率降低了48%，鹽度降低到20時成活率則降低了73%。因此，育苗期間除了保持合適的水溫外，還要保持鹽度穩(wěn)定并且達到30以上[22]。

2 親貝采集

硨磲為雌雄同體，雄性先熟，Lucas J S認為通常雄性成熟年齡2—3齡，雌性3—4齡[28]。根據硨磲的個體大小和種類，每只親體產卵量從幾百萬個到上億個不等。我國南海硨磲繁殖期為2—8月，硨磲性腺成熟度檢測方法有組織穿刺法和性腺外觀觀察法。組織穿刺法，通過組織穿刺針吸取少量生殖細胞在顯微鏡下觀察判定硨磲性腺成熟度，成熟卵子直徑約100 μm，卵黃呈灰黃色，精子活動頻率高[14，22，26]；但 Braley R D[14]認為采用組織穿刺針對硨磲進行活體檢查會造成貝體損傷，導致硨磲死亡，因此，硨磲親貝數量較少時，不建議采用活體穿刺方法對硨磲的性腺發(fā)育狀況進行檢查。硨磲性腺發(fā)育外觀觀察檢測法，通過硨磲進出水管觀察性腺周圍的外套膜顏色判斷硨磲的性腺發(fā)育狀況，發(fā)育成熟的性腺外觀為橘色[14，26]。

3 促熟培育

一般雙殼類親貝的人工催熟方法為升溫和增加餌料投喂量，而硨磲不同于其他雙殼類，硨磲的食物85%以上來自于與其共生的蟲黃藻[2，29-30]。因此，硨磲促熟需要為蟲黃藻提供生長所需要的營養(yǎng)鹽和合適的光照。親貝運輸到育苗場后，清洗干凈殼表面的附著物，用含氯消毒劑進行消毒處理，性腺發(fā)育良好的可以立即進行人工催產；如果親貝成熟度不足，需要進行人工促熟培育，通過增加營養(yǎng)鹽促進與硨磲共生的蟲黃藻生長和繁殖為硨磲提供更多的合成有機物；硨磲促熟培育池屋頂為遮光率50%的塑料膜或玻璃瓦，目的是保持光照以促進蟲黃藻的生長繁殖為硨磲性腺發(fā)育合成更多的有機物[14，22]。

4 人工催產

目前，硨磲催產的方法有注射5-羥色胺、性產物浸泡、溫差刺激和雙氧水刺激等[12-14，31-36]。其中，效果最好的是從外套腔或足絲孔注射5-羥色胺。Braley R D[14]將0.17 g的5-羥色胺晶體溶解于250 mL過濾海水中形成A2mM溶液，小型硨磲每只注射0.5 mL，大型種類每只2～4 mL進行催產。Mies M等[31]指出從硨磲足絲孔注射5-羥色胺比從外套腔注射效果好，注射濃度為1 mg/ml，每只親貝注射1 mL，親貝受到刺激后最快幾十秒鐘就開始排出精子，并且親貝催產后成活率高。Gwyther J等[32]用性腺提取物浸泡誘導硨磲排精產卵，但Heslinga G.A等[33]指出性產物浸泡誘導硨磲排精產卵需要殺死成熟的硨磲以獲取性產物會損耗母貝資源，并且效果也不好。Beckvar N等[12]認為噴射濃度3%的過氧化氫到入水管可以誘導硨磲排放，但Fitt等[34]認為噴射過氧化氫誘導硨磲排放會導致硨磲分泌過量的粘液和閉殼。由于硨磲雌雄同體，在成熟個體中同時具有發(fā)育成熟的精巢和卵巢，為了避免自體授精，要分別收集親貝排出的精液和卵液。一般情況下，親貝注射5-羥色胺后1至數分鐘可以排放精子，排精后快的幾分鐘，慢的30多分鐘，再排出卵子，親貝排精后將其移到其他池子或容積比較大的塑料桶繼續(xù)排放卵子，也可以原池排放分別收集精子和卵子。Neo M L等[35]建議硨磲排卵后1小時內進行人工授精，并控制精子和卵子的比例防止多精授精的出現。張躍環(huán)建議卵子與精子之比為1∶50～1∶100進行授精，Mies M則建議1個卵子配200個精子進行人工受精[22，31]。

5 幼蟲培育

硨磲胚胎的發(fā)育過程和其他雙殼類相似，經歷受精卵、擔輪幼蟲、浮游面盤幼蟲、后期面盤幼蟲、稚貝等發(fā)育階段。根據種類和水溫的不同，硨磲幼蟲的大小和發(fā)育速度有小的差異，一般受精卵直徑約為100 μm，授精后12 h發(fā)育為擔輪幼蟲，2 d后發(fā)育為面盤幼蟲，8～10 d后發(fā)育成足面盤幼蟲，10～14 d 后變態(tài)為稚貝，2～3 年后生長為成貝[22，36]。受精卵孵化期間培育密度每毫升15～20個，幼蟲培育密度為每毫升1～4個[14，22]。盡管硨磲幼蟲在沒有外部食物來源時，也能夠變態(tài)為稚貝，但人工投喂餌料可以大幅度提高稚貝的成活率[14，33，37]。因此，硨磲受精卵變態(tài)為面盤幼蟲的第二天開始投喂餌料，餌料的投喂量根據幼蟲的培育密度和發(fā)育階段決定，Braley R D等[14]建議投喂量為1 000～15 000細胞/mL的金藻，張躍環(huán)等[22]則建議投喂5 000～10 000細胞/mL的金藻。Braley R D和Southgate P C等認為硨磲幼蟲合適的開口餌料為金藻[14，38]，Southgate P C 等[38]用等鞭金藻（Isochrysis sp）、巴夫藻（Pavlova sp）、四鞭藻（Tetraselmis sp）和威氏海鏈藻（Thalassiosira weissflogii）4種餌料進行納氏硨磲面盤幼蟲的攝食和消化試驗，結果表明受精后48～72 h的面盤幼蟲才能攝食4種微藻，其中，48 h后面盤幼蟲攝食等鞭金藻和巴夫藻的比例分別為77%和70%，投餌2 h后幼蟲消化等鞭金藻和巴夫藻的比例為26.1%和14.3%，而相同時間內幼蟲攝食四鞭藻和威氏海鏈藻的幼蟲只有10%和30%，并且投餌2 h后沒有觀察到幼蟲能夠消化四鞭藻和威氏海鏈藻。

6 植入（接種）蟲黃藻

硨磲從幼蟲變態(tài)為稚貝的過程中，食性從攝食外源性單細胞藻轉化為建立內源性蟲黃藻系統(tǒng)，隨后以共生的蟲黃藻光合作用產物為主要營養(yǎng)來源，如果足面盤幼蟲沒有攝食蟲黃藻則不能完成變態(tài)[22]。但是，硨磲不能通過卵子將蟲黃藻傳給后代，因此必須通過人工方法向硨磲幼蟲植入（接種）蟲黃藻，以提高幼蟲的變態(tài)率。要植入蟲黃藻，首先要獲得蟲黃藻，獲取蟲黃藻的方法主要有3種，一是殺死硨磲，取下外套膜，用過濾海水沖洗干凈，再用小刀將硨磲外套膜上附著的蟲黃藻刮落，用28～55 μm網目過濾去掉大的組織碎片；二是從成體硨磲切下一小塊外套膜而不是殺死硨磲，其他處理過程相同；三是收集成體硨磲的糞便過濾濃縮以獲取蟲黃藻濃縮液[14，26]。張躍環(huán)等[22]指出受精卵發(fā)育至面盤幼蟲6 d后植入蟲黃藻，將幼蟲濃縮為每毫升30～40個，每毫升加入40～60萬細胞蟲黃藻，每日或隔日進行1次，每次浸泡約2 h，直到用顯微鏡觀察到每一個足面盤幼蟲消化腺中有3個蟲黃藻止。李育培等[26]認為，面盤幼蟲3 d后接種蟲黃藻，每天1次，連續(xù)5 d，每100個幼苗添加6～8萬個蟲黃藻，顯微鏡下觀察到幼蟲體內含有黃棕色球體時表明接種成功，此時可以停止投喂金藻等餌料。

幼蟲變態(tài)為稚貝后即與蟲黃藻建立共生關系，稚貝的食物主要來自蟲黃藻的光合作用產物。硨磲稚貝的培育采用微流水和微充氣的方式進行，需要光照強度 3 000～5 000 lx 的光照和合適的營養(yǎng)鹽[14，22，39]，以促進蟲黃藻的生長和繁殖。營養(yǎng)鹽的投放量依據硨磲稚貝的大小和種類進行調整，Grice A M等[40]指出殼長5 mm的長硨磲（T.maxima）每日添加20 μm的硫酸銨時生長受到抑制，殼長11 mm的稚貝每日添加20～50 μm的硫酸銨則促進其生長，建議殼長11～16 mm稚貝每日硫酸銨添加量從20 μm逐漸增加到50 μm，殼長達80 mm以上的硫酸銨使用量為80 μm。Fitt等[41]使用 50 μm 的無機氮培育無鱗硨磲（T.derasa）10 d，生長率比對照組提高60%～70%。因此，要根據硨磲稚貝的種類和規(guī)格確定使用營養(yǎng)鹽的種類和數量。

7 建議

目前，硨磲人工育苗中存在的主要問題是幼蟲變態(tài)為稚貝的成活率過低，幼蟲變態(tài)率不足1%，甚至千分之一[22，34，42]，嚴重影響了硨磲人工養(yǎng)殖和放流工作。我國開展硨磲人工育苗工作晚，研究資料稀缺。今后要重點開展硨磲親貝人工催熟培育的光照強度、營養(yǎng)鹽的種類及投放量對硨磲親貝性腺發(fā)育影響的成活率研究，以及蟲黃藻光合作用產物不足時代用餌料的開發(fā)；其次，不同種類硨磲親貝的催產方法研究；第三，蟲黃藻的獲得和批量培養(yǎng)技術的研究，以及蟲黃藻植入硨磲幼蟲的技術；第四，硨磲稚貝培養(yǎng)技術研究，包括光照強度，營養(yǎng)鹽配方、鹽度和水溫等環(huán)境因子對稚貝的影響等。