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    流式細(xì)胞儀檢測B系淋巴細(xì)胞白血病微小殘留的研究進(jìn)展

    2019-11-12 01:58:02郭鵬舉
    健康大視野 2019年20期
    關(guān)鍵詞:流式細(xì)胞術(shù)白血病

    郭鵬舉

    【摘 要】流式細(xì)胞術(shù)(FCM)也就是識(shí)別白血病或腫瘤細(xì)胞的免疫表型標(biāo)志(LAIP)與正常細(xì)胞的不同之處,通過多參數(shù)分析,將非正常細(xì)胞群表達(dá)的抗原識(shí)別出來,從而辨別正常細(xì)胞與白血病或腫瘤細(xì)胞的一種技術(shù)。這種技術(shù)的靈敏度較高,能夠識(shí)別出有核細(xì)胞內(nèi)10-3—10-5的白血病細(xì)胞,這種方法操作比較簡便,覆蓋范圍較廣,可以進(jìn)行定量分析,且特異性強(qiáng)??梢詫?duì)白血病微小細(xì)胞殘留?。∕RD)進(jìn)行方便有效的檢測,在為該疾病后續(xù)的診斷提供依據(jù)的同時(shí)指導(dǎo)臨床的個(gè)體化治療,以及治療方案的制定,也可以對(duì)白血病的復(fù)發(fā)進(jìn)行有效的預(yù)測,對(duì)病人的病情進(jìn)行可靠的判斷。隨著近幾年對(duì)流式細(xì)胞術(shù)的進(jìn)一步研究,流式細(xì)胞儀設(shè)備被不斷的升級(jí),同時(shí),新的熒光標(biāo)記抗體技術(shù)不斷問世,以及多色熒光標(biāo)記抗體的開發(fā),單一免疫表型的流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展到三色、四色最終發(fā)展到六色,這樣的進(jìn)步使LAIP更容易被檢測出來。通過查閱近年來相關(guān)FCM文獻(xiàn),本文就流式細(xì)胞術(shù)在B淋巴細(xì)胞性白血?。˙-ALL)MRD檢測中的進(jìn)展進(jìn)行分析。

    【關(guān)鍵詞】流式細(xì)胞術(shù);白血病;微小殘留

    【中圖分類號(hào)】R733【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1005-0019(2019)20-0-02

    急性B淋巴細(xì)胞性白血?。˙-ALL)是急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋcute lymphoblastic leukemia,ALL)最常見的亞型,這一型白血病的出現(xiàn)表明惡性轉(zhuǎn)化的B淋巴系前體細(xì)胞在克隆增殖,其發(fā)病率約占成人ALL的75%。目前,經(jīng)過醫(yī)療技術(shù)治療策略的進(jìn)步,經(jīng)過系統(tǒng)化療后70%-90%的ALL患者可完全緩解,但是如果有微小殘留?。?minimal residual disease,MRD)的病人,疾病復(fù)發(fā)就有較高的幾率,所以MRD是ALL患者疾病復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,所以MRD的檢出對(duì)于患者存活率的提高具有重要意義。

    1 MRD檢測的意義

    目前,ALL的治療因不斷改進(jìn)的治療策略以及新型化療藥物的研發(fā)問世已經(jīng)有了很大的進(jìn)步,經(jīng)專業(yè)系統(tǒng)化療方案治療后,患者完全緩解率可達(dá)70%-90%,3-5年無進(jìn)展生存率可達(dá)60%,但ALL患者20%的疾病復(fù)發(fā)率仍然不容忽視。相關(guān)研究指出,一般情況下發(fā)病時(shí),ALL患者體內(nèi)的白血病細(xì)胞數(shù)約為1012/L,而在完全緩解后,患者體內(nèi)仍殘留有108-109個(gè)白血病細(xì)胞,這些殘留的白血病細(xì)胞即MRD,是造成ALL復(fù)發(fā)的根本原因,而復(fù)發(fā)機(jī)率與殘留的白血病細(xì)胞數(shù)量呈正比例關(guān)系,復(fù)發(fā)機(jī)率上升的同時(shí),時(shí)間也隨之縮短。德國Cave等歸納了很多白血病化療患者的信息,得出了一個(gè)結(jié)論:有MRD者的復(fù)發(fā)時(shí)間比無MRD者要短了很多,有MRD的患者復(fù)發(fā)率也較高,是無MRD患者的5.7倍。同時(shí)Cave等研究也顯示,有MRD者的死亡率是無MRD者的10倍,MRD≥10-2患者復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性較MRD≥10-3患者相比會(huì)增加16倍速。據(jù)此結(jié)論,可以認(rèn)為在疾病各個(gè)階段,ALL患者復(fù)發(fā)率和死亡率都是隨著殘留的白血病細(xì)胞數(shù)的增加而呈上升趨勢(shì)。研究認(rèn)為,經(jīng)過系統(tǒng)治療獲得完全緩解的ALL患者,若存在MRD≥10-4的情況,疾病在任何時(shí)間點(diǎn)均有復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn),因此,對(duì)MRD水平進(jìn)行定期監(jiān)測對(duì)于控制疾病復(fù)發(fā),具有極其重要的意義。同時(shí),MRD也可以輔助疾病的危險(xiǎn)分層,根據(jù)對(duì)CpG島甲基化聯(lián)合MRD水平的測定來對(duì)對(duì)疾病進(jìn)行危險(xiǎn)度分組,將會(huì)成為未來發(fā)展的方箱,并為決策治療提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)支撐。

    2 FCM對(duì)B-ALL免疫表型的分型及在MRD監(jiān)測中的準(zhǔn)確性和可靠性

    對(duì)于白血病患者來說,抗原表達(dá)會(huì)體現(xiàn)出不同于正常人的表達(dá)模式,而通過這一規(guī)律,分析白血病患者異常表型,可以進(jìn)行白血病的免疫分型及診斷?,F(xiàn)如今,在ALL患者的免疫分型和MRD水平監(jiān)測中,F(xiàn)CM檢測技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于臨床,成為適用于大多數(shù)B-ALL患者的檢測技術(shù)。

    國外研究者將PCR與FCM的檢測結(jié)果進(jìn)行對(duì)比,以評(píng)估FCM的敏感性和可靠性,該研究分別應(yīng)用PCR和FCM方法,同時(shí)對(duì)62例ALL治療獲CR患者骨髓進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果為62例病例中,兩種方法結(jié)果不一致的僅有兩例,而對(duì)60例患者的檢測結(jié)果均為相同,其中檢出MRD≥10-4者12例,<10-4者48例,兩種方法的一致性可以達(dá)到96.77%,這一結(jié)果表明兩種方法具有良好的相關(guān)性。

    3 FCM在B-ALL患者M(jìn)RD檢測中的進(jìn)展及展望

    經(jīng)過正規(guī)治療后的B系淋巴細(xì)胞白血病患者,在骨髓增生的階段,也會(huì)有正常的B系足細(xì)胞存在,但是傳統(tǒng)的單色免疫標(biāo)志無法識(shí)別正常的B系祖細(xì)胞將不會(huì)被識(shí)別,為了解決這一問題,需要找到在腫瘤細(xì)胞表達(dá)的免疫表型,即白血病相關(guān)免疫表型(Leukemia associated immunophenotype,LAIP)進(jìn)行FCM分析,LAIP有三種類型,第一種主要是T淋巴細(xì)胞,第二種為異常前體B淋巴細(xì)胞表型,常用的免疫標(biāo)志物有CD19/CD34/CD10/CD58等,第三種是由融合基因表達(dá)的融合蛋白,而MRD檢測的CD分子與融合蛋白的表達(dá)有關(guān)。因此,單色免疫標(biāo)志被三色流式細(xì)胞術(shù)取代,利用三色流式細(xì)胞術(shù)檢測LAIP,這樣可以增加后期MRD的監(jiān)測結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性,也可作為白血病診斷的依據(jù),同時(shí)可以對(duì)于病人的疾病進(jìn)展進(jìn)行預(yù)測,評(píng)估復(fù)發(fā)的可能性,給與臨床準(zhǔn)確的指導(dǎo),讓醫(yī)生能夠更好地進(jìn)行下一步疾病干預(yù),減少疾病死亡率。其中主要應(yīng)用的是三色和四色FCM。

    用流式細(xì)胞術(shù)檢測MRD的方式有很多種。國外研究者開發(fā)了一種新的方法,這種方法是用層次聚類分析進(jìn)行的,跟以往所應(yīng)用的傳統(tǒng)方法有較高的關(guān)聯(lián)。如果能夠?qū)⑦@種方法和方便使用的軟件結(jié)合,或許可以提高分析技術(shù),達(dá)到自動(dòng)化的全過程分析。實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)分析MRD的目標(biāo),使這一過程更加精確的同時(shí),可操作性也更高。

    參考文獻(xiàn)

    景清,李戈,張劍波,等.不同步或跨系表達(dá)抗原檢測兒童急性B淋巴細(xì)胞白血病微小殘留病[J].中國小兒血液與腫瘤雜志,2009,14(8) :249-252.

    常英軍,趙曉甦.多參數(shù)流式細(xì)胞儀檢測急性髓細(xì)胞白血病微小殘留?。禾魬?zhàn)與對(duì)策[J].臨床薈萃,2016,31(6):581-584.

    蔡清,王寧玲,張愛梅等.急性淋巴細(xì)胞白血病微小殘留病與中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的關(guān)系[J]臨床輸血與檢驗(yàn),2009,11(1):54-57.

    張樂萍,程翼飛,劉桂蘭,等.急性B淋巴細(xì)胞白血病患兒微小殘留病流式細(xì)胞術(shù)檢測的臨床意義[J].中華兒科雜志,2005,43(8):481-485.

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