我院腸桿菌屬ESBLs耐藥情況及CTX-M-1、SHV型耐藥基因研究

劉建強(qiáng) 趙志國(guó) 黃冬梅

【摘 要】目的：了解2016-2018年本院腸桿菌屬分布情況及部分耐藥基因分型。方法：利用WHONET5.6軟件分析耐藥率變化。針對(duì)產(chǎn)ESBLs酶菌株進(jìn)行CTX-M-1、SHV型耐藥基因分型。結(jié)果：2016-2018年期間共得到腸桿菌屬124株;大多數(shù)菌株來(lái)自神經(jīng)外科（19%），標(biāo)本類型主要為痰（56%）;腸桿菌屬對(duì)青霉素類、頭孢菌素類、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗菌素均存在較高耐藥率（>20%），對(duì)復(fù)方新諾明的耐藥率明顯呈上升趨勢(shì)。有46（37.1%）株對(duì)ESBLs耐藥菌株，主要為CTX-M-15型（21.7%）。結(jié)論：建議通過(guò)更多的研究建立一套完整的基因耐藥監(jiān)測(cè)體系。

【關(guān)鍵詞】腸桿菌屬;ESBLs;耐藥;CTX-M-1;SHV

Abstract：Objective To understand the distribution of Enterobacter and the types of drug resistance genes in the isolated specimens of our hospital from 2016 to 2018. Methods：The change of drug resistance rate was analyzed by WHONET5.6 software. CTX-M-1 and SHV-type genotyping were performed on strains producing ESBLs.Results： A total of 124 strains of Enterobacter were obtained during 2016-2018;Most of the strains were from neurosurgery（19%）.The type of specimen was mainly sputum （56%）; Enterobacteriaceae have high resistance rate to penicillins，cephalosporins and monocyclic β-lactam antibiotics， which is more than20%.The resistance rate of Nomin is rising clearly. There were 46（37.1%）strains resistant to ESBLs， mainly CTX-M-15（21.7%）.Conclusions：It is suggested that a complete set of genetic drug resistance monitoring procedures should be established through more research.

Key words： Enterobacter;ESBLs;Drug resistance;CTX-M-1;SHV

【中圖分類號(hào)】R378.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-0019（2019）20-0-02

腸桿菌屬隸屬于腸桿菌科，廣泛分布于自然環(huán)境中，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的包括14種[1]，是重要的在院內(nèi)感染機(jī)會(huì)性致病菌之一。而且其耐藥機(jī)制是復(fù)雜的其中對(duì)于介導(dǎo)產(chǎn)ESBLs酶分子機(jī)制一直是熱點(diǎn)，且具有一定的區(qū)域特點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來(lái)源：2016-2018年我院門診病人與住院病人送檢至病原微生物實(shí)驗(yàn)室保存的菌株。

1.1.2 主要試劑與設(shè)備：血·腸道菌分隔瓊脂平板、VITEK2 Compact、天根細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、PCR試劑盒、PCR儀、高速冷凍離心機(jī)、電泳儀、全自動(dòng)凝膠成像分析系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 樣本信息收集：通過(guò)醫(yī)院LIS系統(tǒng)收集2016-2018年期間門診病人與住院病人送檢標(biāo)本經(jīng)分離鑒定為腸桿菌屬的菌株。

1.2.2分析方法：利用WHONET5.6軟件對(duì)所收集菌株信息按標(biāo)本類型、科室分布進(jìn)行分析。

1.2.3 產(chǎn)ESBLs酶的菌株收集：根據(jù)CLSI2016版指南對(duì)所收集的目次菌株以紙片擴(kuò)散法進(jìn)行初篩試驗(yàn)、確認(rèn)試驗(yàn)以篩選出產(chǎn)ESBLs的菌株，質(zhì)控菌株是大腸埃希菌ATCC 25922。

1.2.4 基因組DNA提取與PCR：按天根基因組試劑盒操作步驟提取目的菌株基因組DNA。分別以CTX-M-1、SHV基因設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

1.2.5PCR產(chǎn)物電泳與測(cè)序：配制1.5%瓊脂糖凝膠，在100V電壓下電泳，對(duì)凝膠成像分析，將符合要求的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至上海生工測(cè)序。

2 結(jié)果

2.1 目的菌株構(gòu)成、類型及科室分布情況 2016-2018年期間我實(shí)驗(yàn)室共分離出腸桿菌屬124株，所有的送檢標(biāo)本類型中主要為痰、尿液、血標(biāo)本，且以神經(jīng)外科、泌尿外科、重癥醫(yī)學(xué)科1三個(gè)科室腸桿菌屬檢出率最高。

2.2 腸桿菌屬耐藥情況 2016-2018年腸桿菌屬耐藥率變化情況（詳見(jiàn)表1），存在46株對(duì)ESBLs酶耐藥。

2.3 PCR測(cè)序結(jié)果 有24株目的菌株測(cè)序成功，6株為CTX-M-3型ESBLs（13%）、10株為CTX-M-15型ESBLs（21.7%）、8株為SHV12型ESBLs（17.4%）。

3 討論

本研究中利用WHONET5.6軟件對(duì)2016-2018年期間我院病原微生物實(shí)驗(yàn)室得到的所有菌株進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)目的菌株分離自神經(jīng)外科（19%）、泌尿外科（11%）、重癥醫(yī)學(xué)科1（9%），其標(biāo)本類型主要是痰、尿液、血，與John N Kateregga等[2]研究一致。而我國(guó)學(xué)者盧兆蓮等研究[3]顯示科室分布為骨創(chuàng)傷科為主（21.2%）、老年綜合病房（12.3%）、神經(jīng)外科（11.6%），考慮與機(jī)體抵抗力比較差，或者接受過(guò)侵入性操作等因素有關(guān)。復(fù)方新諾明的耐藥率明顯呈上升趨勢(shì)，而青霉素類、頭孢類菌素類、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗菌素的耐藥率盡管呈下降趨勢(shì)，但其耐藥率仍處于較高水平，其中頭孢曲松的耐藥率高達(dá)32.7%，這與盧兆蓮等[3]等研究相似。在郭普等[4]的研究中發(fā)現(xiàn)腸桿菌屬細(xì)菌對(duì)喹諾酮類、氨基糖苷類抗菌素有較高的耐藥率，而我院腸桿菌屬對(duì)喹諾酮類抗菌素的耐藥性呈下降趨勢(shì)，之所以出現(xiàn)這種耐藥差異筆者認(rèn)為可能與不同地區(qū)臨床醫(yī)生經(jīng)驗(yàn)性用藥習(xí)慣以及地域環(huán)境等綜合因素有關(guān)。經(jīng)基因進(jìn)行分析結(jié)果表明CTX-M-15型所占比例高于SHV12型，可見(jiàn)我院CXT-M-1型ESBLs酶耐藥基因比較常見(jiàn)，這與Simon G等的研究是一致的[5]。這種耐藥性可通過(guò)結(jié)合、傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)化等方式在細(xì)菌之間傳遞[6]，導(dǎo)致其產(chǎn)ESBLs酶的基因分型更為復(fù)雜，形勢(shì)更為嚴(yán)峻。

4 結(jié)論

我院腸桿菌屬主要存在于自身抵抗力低的病人，隨痰液、尿液、血液傳播，以CTX-M-3型、 CTX-M-15型、SHV12型ESBLs耐藥為主，亦對(duì)其他抗菌素存在耐藥現(xiàn)象，其耐藥機(jī)制是復(fù)雜的，需要進(jìn)一步探索，從基因?qū)用姹O(jiān)測(cè)其發(fā)展方向，為更合理的臨床用藥提供指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)

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