高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定橄欖油食品模擬物中的四種丙烯酸類(lèi)物質(zhì)

□ 顏 黎 江蘇理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院 ?；莼?江蘇理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院 常州危險(xiǎn)貨物與包裝檢測(cè)技術(shù)中心

李 威 邵晨杰 常州危險(xiǎn)貨物與包裝檢測(cè)技術(shù)中心 王 欣 江蘇理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院

羅世鵬 江蘇理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院 常州危險(xiǎn)貨物與包裝檢測(cè)技術(shù)中心

丙烯酸類(lèi)物質(zhì)是一類(lèi)含有丙烯酸骨架的化合物總稱(chēng)，如丙烯酸、α-甲基丙烯酸、β-甲基丙烯酸（巴豆酸）等等。它們是一類(lèi)重要的有機(jī)酸，本身就是精細(xì)化學(xué)品，還可以用于合成其他高分子材料、膠粘劑以及醫(yī)藥中間體等化工產(chǎn)品，因此也被廣泛用于各種食品接觸材料的合成當(dāng)中。然而，丙烯酸類(lèi)化合物具有一定的致敏性，容易刺激皮膚和黏膜，如果食品接觸材料中含有未聚合的丙烯酸類(lèi)單體，通過(guò)遷移至食品中而被人體吸收，就有可能對(duì)肺、肝、腎等臟器產(chǎn)生傷害。因此，我國(guó)食品接觸材料法規(guī)GB 9685-2016[1]規(guī)定，食品接觸材料中丙烯酸和甲基丙烯酸的遷移限量為6.0 mg/kg；歐盟塑料法規(guī)還規(guī)定了巴豆酸在聚合物薄膜的全遷移限量（QMA）[2]為0.05 mg/6 dm2。

近年來(lái)，關(guān)于丙烯酸類(lèi)化合物的檢測(cè)已有報(bào)道[3-5]。例如，劉蘭[6]等人在2014年利用高效液相色譜法對(duì)土曲霉發(fā)酵液中的衣康酸進(jìn)行了檢測(cè)；張朝陽(yáng)等[7]在2016年使用高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了丙烯酸在卡波姆共聚物中的殘留量測(cè)定；胡新功[8]等在2018年報(bào)道了食品接觸材料中巴豆酸遷移量的檢測(cè)方法。

綜上可見(jiàn)，雖然國(guó)內(nèi)關(guān)于丙烯酸類(lèi)化合物的檢測(cè)的報(bào)道較多，但對(duì)于食品模擬物中的衣康酸、甲基丙烯酸遷移量的檢測(cè)報(bào)道較少。目前也未見(jiàn)報(bào)道上述4種丙烯酸類(lèi)化合物的同時(shí)檢測(cè)研究。因此，建立一種同時(shí)檢測(cè)食品模擬物中這4種丙烯酸類(lèi)物質(zhì)的研究方法能避免分別測(cè)試，提高檢測(cè)效率，具有很好的實(shí)用價(jià)值。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

丙烯酸、甲基丙烯酸、巴豆酸與衣康酸均為試劑級(jí)，磷酸為分析純，橄欖油為化學(xué)純，以上均購(gòu)自上海國(guó)藥；乙酸乙酯、乙腈、甲醇、異丙醇均為色譜純（上海安譜）；水用超純水制備（Millipore）；高效液相色譜儀，Agilent 1260，配二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫）；3-15離心機(jī)（ZONKIA SC-3610）；數(shù)顯型多管式旋渦混合器(TALBOYS)； 移 液 槍 (Sartorius)； 水相和有機(jī)相針式過(guò)濾器（上海安譜）。

1.2 橄欖油標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5 g（精確到0.1 mg）4種丙烯酸化合物加入四個(gè)100 mL容量瓶中，加水溶解后用水定容，此為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；然后通過(guò)計(jì)算，分別準(zhǔn)確移取一定體積的上述4種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液加入10 mL容量瓶中，用異丙醇定容，配制成濃度均為200 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，然后再用異丙醇逐級(jí)稀釋成10、20、40、60、80 mg/L與100 mg/L的異丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后取6個(gè)離心管，分別在每個(gè)離心管中加入10 g橄欖油，然后在每個(gè)離心管中分別加入100 mL上述6種標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋10 s混勻。此時(shí)橄欖油中4種丙烯酸類(lèi)物質(zhì)的濃度分別為0.10、0.20、0.40、0.60、0.80 mg/kg與1.00 mg/kg。

1.3 儀器工作條件

色譜柱：選擇Agilent poroshell 120 EC-C18（4.0 mm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：5%乙腈和95%的磷酸水溶液（v/v=0.05%）；進(jìn)樣量：20 μL；流速：1.00 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：205 nm；經(jīng)過(guò)優(yōu)化后的梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相的梯度洗脫條件

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

考察了甲醇、乙腈、水以及乙酸乙酯四種不同溶劑對(duì)橄欖油中目標(biāo)物的提取效果，結(jié)果表明水的提取效果最好，甲醇和乙腈峰形不佳，乙酸乙酯無(wú)法分層；因此確定采用水作為提取溶劑。最終橄欖油的樣品前處理?xiàng)l件如下：準(zhǔn)確稱(chēng)取10 g橄欖油于玻璃離心管中，加入5.00 mL水，渦旋提取2 min，然后在4 000 r/min下離心3 min，分層后移取清液1.5 mL于進(jìn)樣小瓶中，用0.45 mm濾膜過(guò)濾后進(jìn)行HPLC分析。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜柱和流動(dòng)相的選擇

從色譜圖（圖1）可以看出衣康酸、丙烯酸、巴豆酸與甲基丙烯酸的最強(qiáng)吸收峰分別在195、200、209 nm與205 nm處。綜合考慮溶劑的截止波長(zhǎng)，因此選擇205 nm作為本實(shí)驗(yàn)的最佳吸收波長(zhǎng)，乙腈和水為流動(dòng)相；色譜柱采用常規(guī)C18即可滿(mǎn)足要求；為了改善峰形，進(jìn)行了酸度調(diào)節(jié)，結(jié)果表明當(dāng)采用乙腈-0.05%磷酸水溶液（v/v=0.05%）進(jìn)行酸度調(diào)節(jié)時(shí)，能達(dá)到最好的效果，由于要同時(shí)分離4種目標(biāo)物質(zhì)，為了節(jié)約分析時(shí)間，提高靈敏度，采用梯度洗脫進(jìn)行分離，能夠取得滿(mǎn)意結(jié)果。

圖1 橄欖油中四種丙烯酸化合物水提取后的分析色譜圖

2.3 檢出限、定量限限性范圍和精密度實(shí)驗(yàn)

將1.2中的6種橄欖油標(biāo)準(zhǔn)工作液，采用2.1中的最佳方法提取后進(jìn)行HPLC分析，以信噪比3/1確定方法的檢出限，結(jié)果表明丙烯酸的檢出限為0.019 mg/kg，定量限為0.063 mg/kg；甲基丙烯酸的檢出限為0.017 mg/kg，定量限為0.057 mg/kg；衣康酸的檢出限為0.015 mg/kg，定量限為0.050 mg/kg；巴豆酸的檢出限為0.011 mg/kg，定量限為0.037 mg/kg。分別在空白樣品中添加0.10、0.50、5.0 mg/kg的3個(gè)不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明平均回收率在93.0%～110.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）在0.10%～6.5%，說(shuō)明方法準(zhǔn)確可靠。

3 結(jié)論

本研究建立了橄欖油食品模擬物中丙烯酸、甲基丙烯酸、巴豆酸和衣康酸4種化合物的同時(shí)檢測(cè)方法，該方法前處理簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確可靠，檢出限檢在0.010～0.019 mg/kg，能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規(guī)的限量要求，為企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格把關(guān)，保障消費(fèi)者的健康安全。