頸椎?、蛱?hào)丸治療椎動(dòng)脈型頸椎病兔動(dòng)物模型作用及機(jī)制研究

李煥婷，武毛毛，樊鴻星，張男男，高博聞*

（包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院·內(nèi)蒙古包頭·014040）

隨著全球各領(lǐng)域廣泛信息化進(jìn)程和隨之而來(lái)的人類(lèi)工作、生活方式的轉(zhuǎn)變，頸椎病目前已成為全球常見(jiàn)病，發(fā)病率不斷增高[1]，并呈現(xiàn)出低齡化趨勢(shì)。不僅疾病癥狀會(huì)對(duì)患者造成嚴(yán)重困擾，而且隨病情進(jìn)展危險(xiǎn)性較高，已備受全社會(huì)關(guān)注。椎動(dòng)脈型頸椎?。–SA）是國(guó)內(nèi)頸椎病分型中常見(jiàn)類(lèi)型之一，屬中醫(yī) “眩暈”、“痹證”、“頭痛”、“項(xiàng)強(qiáng)”等范疇。是由于各種因素壓迫或刺激椎動(dòng)脈導(dǎo)致血管狹窄、折曲、供血不平衡所致，也稱(chēng)椎-基底動(dòng)脈供血不足綜合征，頸性眩暈等[2]。椎-基底動(dòng)脈系統(tǒng)供應(yīng)約全腦2/5血量，主要保障大腦后部、小腦以及腦干的血供[3]，該動(dòng)脈系統(tǒng)循環(huán)障礙引起以腦干前庭功能受損、平衡失調(diào)等方面的表現(xiàn)，如眩暈，伴有側(cè)支循環(huán)血管擴(kuò)張引發(fā)的頭痛，以及肩頸部疼痛、視物旋轉(zhuǎn)、黑朦、惡心嘔吐、胸悶、耳鳴和視物昏花等癥狀，甚至出現(xiàn)突然暈厥、猝倒。該類(lèi)疾病危害較大，但病因病機(jī)復(fù)雜，還不甚明確。雖針對(duì)該類(lèi)疾病已經(jīng)嘗試頸椎旋轉(zhuǎn)復(fù)位、牽引、擴(kuò)血管藥物等多種治療方法，但尚未實(shí)現(xiàn)其防治手段有效、辯證、全面、無(wú)害、長(zhǎng)期的目標(biāo)，很多臨床和科研人員將目光投向以整體觀(guān)、辯證論治為指導(dǎo)理念的祖國(guó)醫(yī)學(xué)寶庫(kù)。

頸椎?、蛱?hào)丸是內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院在中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導(dǎo)下，按照處方設(shè)計(jì)原則配伍葛根、白芷、藁本、桂枝、白芍、柴胡、升麻、僵蠶、半夏、川芎、當(dāng)歸、龍骨、牡蠣及甘草等諸藥，組方而成的臨床驗(yàn)方，已在臨床使用30多年，療效確切，得到醫(yī)生和患者的普遍認(rèn)可[4]。但該方劑目前藥效學(xué)、物質(zhì)基礎(chǔ)及相關(guān)機(jī)制等基礎(chǔ)研究開(kāi)展較少，研究資料還有待完善，本研究通過(guò)建立頸椎病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型對(duì)其藥理學(xué)、藥效學(xué)及可能作用機(jī)制進(jìn)行探討，為其臨床應(yīng)用提供更多理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)日本大耳白兔48只，雌雄各半，體重2～2.5 kg，由北京芳元養(yǎng)殖場(chǎng)提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0012。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與實(shí)驗(yàn)儀器

頸椎?、蛱?hào)丸（批號(hào)：20151116）處方：葛根、川芎、當(dāng)歸、柴胡、僵蠶、白芷等，由內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院制劑中心提供；消痔靈注射液（批號(hào)：15071603國(guó)藥準(zhǔn)字Z22026175）吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司；0.9%氯化鈉注射液 （批號(hào)：7B15091801國(guó)藥準(zhǔn)字H37020766）山東齊都藥業(yè)有限公司；硫化鈉（批號(hào)：20160108）天津市大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)；頸復(fù)康顆粒（批號(hào)：610078國(guó)藥準(zhǔn)字Z13022204）頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司；經(jīng)顱多普勒儀（深圳市德力凱電子有限公司）；電子天平JA5001（上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司）

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 模型的制作

采用注射硬化劑法制作椎動(dòng)脈型頸椎病動(dòng)物模型。取健康日本大耳白兔48只，先用剪刀剪短頸部體毛，以剃須刀剃掉剩下短毛，最后用6.0%硫化鈉脫掉剩余體毛。采用經(jīng)顱多普勒技術(shù)（TCD）檢測(cè)家兔腦血流，記錄椎-基底動(dòng)脈血流速度。抽取消痔靈注射液10 ml，注射于日本大耳兔右側(cè)頸椎橫突側(cè)面，分別于第2周和第4周重復(fù)注射。4周后，再次采用TCD檢測(cè)各兔腦血流，選取右側(cè)椎動(dòng)脈平均血流速度（Vm）均小于造模前對(duì)應(yīng)流速10 cm/s以上者作為成功模型。

1.3.2 動(dòng)物分組及給藥

挑選成功模型兔40只，隨機(jī)分成5組，即頸椎?、蛱?hào)丸高、中、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組（頸復(fù)康顆粒組）和模型對(duì)照組。另取未造模兔8只，作為空白對(duì)照組。給藥組采取藥物混懸液灌胃的方式給藥，1天1次。高劑量組3 g/kg，中劑量組1 g/kg，低劑量組0.3 g/kg，頸復(fù)康治療組1 g/kg劑量給藥，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組給予等體積生理鹽水，給藥周期為10天。

1.3.2 經(jīng)顱多譜勒檢測(cè)

將日本大耳兔頸部及枕后體毛刮盡，均勻地涂上介質(zhì)。測(cè)定椎動(dòng)脈血流時(shí)，TCD探頭頻率為10 MHz，聚焦深度40～60 mm，與椎動(dòng)脈血流方向呈30～40度角；測(cè)定基底動(dòng)脈血流時(shí)，探頭位于枕外隆突后方，探頭頻率調(diào)整為2 MHz，與基底動(dòng)脈血液流向呈30度角，聚焦深度70～80 mm，分別測(cè)定家兔左椎動(dòng)脈（LVA）、右椎動(dòng)脈（RVA）及基底動(dòng)脈(BA)收縮期血流速度（Vp）、平均血流速度（Vm）、舒張末期血流速度（Vd）、搏動(dòng)指數(shù)（Pi）和阻力指數(shù)（Ri）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理用SPSS 19.0軟件進(jìn)行成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物右側(cè)椎動(dòng)脈血流參數(shù)

由表1可見(jiàn)，經(jīng)右側(cè)頸部注射硬化劑，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物RVA的Vp、Vm、Vd等參數(shù)與正常對(duì)照組相比均顯著降低，血流速度減慢，Pi、Ri無(wú)顯著變化。但經(jīng)陽(yáng)性對(duì)照藥、頸椎病Ⅱ號(hào)丸各劑量組治療都不能引起上述指標(biāo)的顯著改變。

表 1 各組右側(cè)椎動(dòng)脈 Vp、Vm、Vd、Pi、Ri比較（±s）

*與正常對(duì)照組比較P＜0.05#與模型組比較P＜0.05

分組 Vp(cm/s) Vm(cm/s) Vd(cm/s) Pi Ri正常對(duì)照組 26.63±6.80# 15.38±3.46# 9.63±1.77# 0.99±0.09 0.61±0.04模型組 12.25±2.31* 7.25±1.28* 4.75±0.89* 1.20±0.07 0.82±0.07頸復(fù)康治療組 17.75±4.19* 11.00±2.16* 7.75±1.26* 0.92±0.07 0.59±0.03頸椎?、蛱?hào)丸小劑量組 17.50±4.36* 10.50±1.91* 7.25±0.96* 0.94±0.14 0.58±0.06頸椎病Ⅱ號(hào)丸中劑量組 20.00±5.35* 12.25±2.87* 8.25±2.06* 0.96±0.04 0.59±0.01頸椎?、蛱?hào)丸大劑量組 18.25±3.86* 11.25±3.20* 7.25±1.26* 0.96±0.08 0.60±0.03

2.2 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左側(cè)椎動(dòng)脈血流參數(shù)

造模后，模型組LVA的Vp、Vm、Vd與正常對(duì)照組相比均顯著降低，Pi、Ri無(wú)明顯變化，與模型組比較，頸復(fù)康治療組、頸椎?、蛱?hào)丸大、中劑量組均可顯著升高Vm、Vd值，且頸椎?、蛱?hào)丸中劑量組使Vm、Vd值升高恢復(fù)至接近正常。且頸椎病Ⅱ號(hào)丸中劑量組與模型組相比Vp值顯著升高。結(jié)果見(jiàn)表2。

表 2 各組左側(cè)椎動(dòng)脈 Vp、Vm、Vd、Pi、Ri比較（±s）

*與正常對(duì)照組比較P＜0.05，#與模型組比較P＜0.05

分組 Vp(cm/s) Vm(cm/s) Vd(cm/s) Pi Ri正常對(duì)照組 31.38±11.44# 17.75±5.73# 10.25±1.67# 0.87±0.13 0.55±0.05模型組 15.00±4.31* 9.13±2.17* 6.38±1.60* 0.98±0.17 0.59±0.06頸復(fù)康治療組 18.00±3.74* 11.00±2.16*# 7.75±1.26*# 0.97±0.09 0.59±0.04頸椎?、蛱?hào)丸小劑量組 19.25±7.23* 11.75±4.19* 8.00±2.71*# 1.00±0.13 0.61±0.05頸椎?、蛱?hào)丸中劑量組 21.00±6.06*# 12.50±3.11# 8.25±1.89# 1.01±0.07 0.60±0.02頸椎?、蛱?hào)丸大劑量組 19.29±4.11* 12.50±3.42*# 8.00±1.63*# 0.96±0.10 0.59±0.04

2.3 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基底動(dòng)脈血流參數(shù)

由表3可見(jiàn)模型組BA的Vp、Vm、Vd值與正常對(duì)照組相比均顯著降低，但Pi降低，Ri顯著升高。與模型組比較，頸復(fù)康治療組Vm、Vd值明顯升高，但頸椎?、蛱?hào)丸各治療組Vp、Vm、Vd值與模型組相比沒(méi)有顯著性差異，明顯低于正常對(duì)照組。但頸復(fù)康治療組和頸椎病Ⅱ號(hào)丸各治療組較之模型組均能顯著升高Pi，降低Ri指數(shù)。

表 3 各組基底動(dòng)脈 Vp、Vm、Vd、Pi、Ri比較（±s）

表 3 各組基底動(dòng)脈 Vp、Vm、Vd、Pi、Ri比較（±s）

*與正常對(duì)照組比較P＜0.05，#與模型組比較P＜0.05

分組 Vp(cm/s) Vm(cm/s) Vd(cm/s) Pi Ri正常對(duì)照組 33.63±10.73# 19.13±4.88# 11.88±2.30# 1.18±0.11# 0.58±0.05#模型組 16.75±4.13* 9.88±2.36* 6.50±1.51* 0.82±0.16* 0.73±0.08*頸復(fù)康治療組 21.25±3.60* 15.50±4.43# 10.25±3.40# 0.99±0.10*# 0.64±0.06#頸椎病Ⅱ號(hào)丸小劑量組 19.00±7.48* 11.75±4.65* 7.75±3.10* 0.99±0.12*# 0.66±0.05#頸椎?、蛱?hào)丸中劑量組 21.50±1.73* 13.00±0.82* 8.50±0.58* 0.99±0.34*# 0.62±0.04#頸椎?、蛱?hào)丸大劑量組 21.50±4.43* 13.00±3.60* 7.75±0.96* 0.99±0.10*# 0.64±0.06#

2.4 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物L(fēng)VA、RVA、BA TCD頻譜形態(tài)圖

下列組圖為隨機(jī)選擇各組單個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物TCD頻譜。由下圖可見(jiàn)模型組LVA、RVA、BA頻譜中明顯處于高流速的紅細(xì)胞數(shù)量減少，呈現(xiàn)頻譜紊亂的湍流狀態(tài)，血管狹窄。較之所選擇的該模型組動(dòng)物，經(jīng)頸復(fù)康顆粒和各劑量頸椎?、蛱?hào)丸大、中劑量組所選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物L(fēng)VA血流速度相對(duì)增快。

3 討論

椎動(dòng)脈型頸椎病病因病機(jī)非常復(fù)雜，主要是由于頸椎的退行性改變及頸部生物力學(xué)失衡導(dǎo)致椎動(dòng)脈、頸部交感神經(jīng)受刺激所誘發(fā)，經(jīng)國(guó)內(nèi)外學(xué)者從解剖學(xué)、病理學(xué)、神經(jīng)及臨床多方面研究，對(duì)其病機(jī)形成諸多學(xué)說(shuō)，如壓迫學(xué)說(shuō)、交感神經(jīng)刺學(xué)說(shuō)、牽系學(xué)說(shuō)、體液因子學(xué)說(shuō)、椎動(dòng)脈硬化學(xué)說(shuō)、微循環(huán)學(xué)說(shuō)、頸椎節(jié)段不穩(wěn)學(xué)說(shuō)、應(yīng)力應(yīng)變學(xué)說(shuō)、椎-基底動(dòng)脈環(huán)代償功能學(xué)說(shuō)及血管閉塞、栓塞學(xué)說(shuō)等[5]。因此該病病因病機(jī)復(fù)雜多樣，且該疾病往往并非單一致病，多數(shù)是由多種病因經(jīng)不同發(fā)病機(jī)制最終導(dǎo)致發(fā)病。因此針對(duì)單一靶向的治療手段或藥物并不能滿(mǎn)足該病的治療需求。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)中藥方劑常為諸藥相伍，辨證施治、綜合治療理念對(duì)于本病的治療尤為適宜，也取得了很好療效。祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)椎動(dòng)脈型頸椎病的病機(jī)同現(xiàn)代醫(yī)學(xué)類(lèi)似，歸結(jié)為內(nèi)因和外因共同作用的結(jié)果。外因包括外傷、勞損以及風(fēng)、寒、濕等外邪侵入體內(nèi)，內(nèi)因內(nèi)因可歸結(jié)為氣、血虛瘀，痰瘀。在臟腑則定位于肝、腎。頸椎?、蛱?hào)丸是由葛根、川芎、當(dāng)歸、柴胡、僵蠶、白芷等多味藥據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論和處方設(shè)計(jì)原則配伍而成的驗(yàn)方，已在臨床用于治療頸椎病30多年，得到醫(yī)生和患者的普遍認(rèn)可。頸椎病Ⅱ號(hào)丸復(fù)方中葛根生津液，濡潤(rùn)筋脈，川穹，當(dāng)歸活血行氣、祛風(fēng)止痛，半夏可燥濕化痰，白芷、藁本、桂枝、白芍祛風(fēng)通絡(luò)，柴胡、升麻、僵蠶、升清降濁龍骨、牡蠣平肝熄風(fēng)，甘草調(diào)和諸藥，能針對(duì)椎動(dòng)脈頸椎病病機(jī)辯證施治，發(fā)揮療效。

本采用實(shí)驗(yàn)性誘發(fā)的方法在健康動(dòng)物身上復(fù)制頸椎病模型，實(shí)現(xiàn)頸椎病Ⅱ號(hào)丸對(duì)該病治療作用的研究。本研究采用頸部注射硬化劑方法制作兔頸椎病動(dòng)物模型。硬化劑可完全浸潤(rùn)注射部位周?chē)∪饨M織，導(dǎo)致注射區(qū)域組織廣泛癱痕化及攣縮，打破頸椎的生物力學(xué)平衡[6]；同時(shí)無(wú)菌性炎癥刺激周?chē)桓猩窠?jīng)纖維，進(jìn)而活化交感神經(jīng)系統(tǒng)，反射性引起其它未受刺激的神經(jīng)末梢釋放神經(jīng)遞質(zhì)，導(dǎo)致椎基底動(dòng)脈的強(qiáng)烈收縮[7]，共同引起椎基底動(dòng)脈供血不足。其誘導(dǎo)發(fā)病過(guò)程與椎動(dòng)脈型頸椎病慢性起病的臨床實(shí)際相符，適宜用于此類(lèi)研究。研究過(guò)程通過(guò)TCD檢查檢測(cè)模型和追蹤治療情況。TCD能二維動(dòng)態(tài)顯示椎動(dòng)脈血管形態(tài)變化情況，對(duì)椎動(dòng)脈狹窄程度及范圍判斷準(zhǔn)確性較高[8]，重復(fù)性好,無(wú)創(chuàng)傷,是臨床常用于診斷CSA的一種較理想的檢測(cè)方法。

在本研究中發(fā)現(xiàn)頸椎病Ⅱ號(hào)丸大、中劑量組能顯著改善椎動(dòng)脈型頸椎病動(dòng)物模型LVA的Vm、Vd值，但對(duì)RVA和BA的血流速度無(wú)明顯影響；Vm是血流速度積分與心動(dòng)周期時(shí)間之比。該指標(biāo)可綜合反映收縮期、舒張期內(nèi)各點(diǎn)的血流速度，是血液流速的真實(shí)體現(xiàn)，平均血流速度的減少反映了供血不足。舒張Vd是指心動(dòng)周期末的最高血流速度該結(jié)果提示頸椎?、蛱?hào)丸大、中劑量組能明顯加快椎-基底動(dòng)脈缺血?jiǎng)游锬Ｐ蚅VA的的血流速度，有效改善LVA缺血狀況。同時(shí)，頸椎?、蛱?hào)丸大、中、小劑量組均可降低BA的Pi值。Pi是收縮期峰值血流速度和舒張期血流速度之差與血流平均速度之比反映了動(dòng)脈血管順應(yīng)性，同時(shí)也反映了血管阻力和血管擴(kuò)張程度。Ri是收縮期峰值血流速度和舒張期血流速度之差與收縮期峰值血流速度之比是血管收縮能力和阻力狀況的反映。當(dāng)搏動(dòng)指數(shù)、阻力指數(shù)增加時(shí)，說(shuō)明周?chē)茏枇υ黾?，可?dǎo)致血流量減少，以致影響所供應(yīng)區(qū)域的供血量。降低Pi提示該藥物能降低擴(kuò)張BA顱內(nèi)血管遠(yuǎn)端血管阻力，改善血管順應(yīng)性，改善血流。其抑制降低BA收縮，降低血管阻力作用也通過(guò)降低Ri反應(yīng)出來(lái)。雖在本研究中未見(jiàn)頸椎?、蛱?hào)丸對(duì)RV血流的影響，但動(dòng)物模型LVA、RVA血流均明顯減慢，BA的Pi、Ri升高。RVA的血流速度減慢是硬化劑直接作用導(dǎo)致動(dòng)脈順應(yīng)性和彈性降低、血流阻力升高的結(jié)果，LVA的血流速度減慢則與力學(xué)機(jī)制改變等間接因素有關(guān)，硬化劑注射側(cè)頸椎肌肉痙攣，破壞頸椎平衡，使RVA受到機(jī)械牽張，刺激交感神經(jīng)，引起改變其血流動(dòng)力學(xué)改變。同時(shí)硬化劑作用及組織纖維化刺激頸神經(jīng)節(jié)，導(dǎo)致支配腦血管的內(nèi)臟神經(jīng)功能紊亂，使BA遠(yuǎn)端血管阻力增高[6]。本研究結(jié)果的出現(xiàn)可能提示頸椎?、蛱?hào)丸對(duì)緩解左側(cè)機(jī)械牽張、交感神經(jīng)刺激引起的血流速度減慢的效果較好，難以對(duì)抗右側(cè)癱痕化及攣縮組織對(duì)椎動(dòng)脈的直接壓迫。同時(shí)該藥物還能有效緩解神經(jīng)節(jié)刺激引起的顱內(nèi)血管阻力增加。