新疆榅桲抗動脈粥樣硬化“多成分-多靶點(diǎn)”作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

吉米麗汗·司馬依，艾尼瓦爾·吾買爾，買爾旦·玉蘇甫，阿地力江·薩吾提，買買提明·努爾買買提，周文婷*

1新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院；2新疆醫(yī)科大學(xué)維吾爾醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊 830011

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是眾多心腦血管疾病的共同病理基礎(chǔ)，也是心血管系統(tǒng)中最常見和最具危害性的疾病。預(yù)計(jì)到2020年心血管疾病，尤其是AS將成為世界疾病總負(fù)擔(dān)的主要來源之一[1]。AS的病因及發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，一般認(rèn)為由脂質(zhì)代謝異常、遺傳和環(huán)境等多種因素相關(guān)的血管慢性炎癥引發(fā)的疾病過程[2]。西藥治療AS的作用機(jī)制明確但作用效果單一，其副作用多，需要和其他藥物聯(lián)合使用效果更佳?，F(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究結(jié)果表明，天然藥物通過多種活性成分發(fā)揮調(diào)血脂、影響血液流變動力、抗氧化等不同途徑的作用，在AS治療中可能表現(xiàn)為療效持久且副作用小的特點(diǎn)。

榅桲(CydoniaOblangaMill.COM)，是薔薇科(Rosaceae)榅桲屬(Cydonia)的灌木植物[3]。在我國廣泛分布于新疆南部及陜西、東北等地區(qū)，且產(chǎn)量較大?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)榅桲化學(xué)成分主要包括糖類、黃酮類、生物堿類、氨基酸及多肽、鞣質(zhì)、有機(jī)酸、揮發(fā)油等成分，具有抗氧化、抗炎、抗過敏、免疫抑制、抗腫瘤、抗凝血和抗血栓等作用[4]。本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)新疆榅桲總黃酮對動脈粥樣硬化APOE-/-小鼠的氨基酸代謝，脂代謝，能量代謝和炎癥反應(yīng)相關(guān)通路有一定調(diào)控作用[5]，然而其具體活性物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚不明確。因此，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測及篩選新疆榅桲抗動脈粥樣硬化的活性成分和作用靶點(diǎn)，進(jìn)而初步闡明其多成分-多靶點(diǎn)-多通路協(xié)同的作用機(jī)制，從而為后期進(jìn)行生物學(xué)驗(yàn)證提供理論依據(jù)和研究方向。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 分析平臺和數(shù)據(jù)庫

TCMSP分析平臺(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)為公開的中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺；SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(http://www.swisstargetprediction.ch/)為用于生物活性小分子靶點(diǎn)預(yù)測的數(shù)據(jù)庫；Uniprot數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/)為整合Swiss-Prot、TrEMBL和PIR-PSD 三大數(shù)據(jù)庫的蛋白質(zhì)綜合數(shù)據(jù)庫。PDB數(shù)據(jù)庫(http://www.rcsb.org/)收集了利用核磁共振、X-ray放射、理論模擬分析得到的蛋白和DNA的三維空間立體結(jié)構(gòu)。Systemsdock(http://systemsdock.unit.oist.jp/iddp/home/index)為基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測和分析分子對接的數(shù)據(jù)庫。DiSGeNET數(shù)據(jù)庫(http://www.disgenet.org/)收集了多種疾病相關(guān)的基因。Clue GO為Cytoscape3.6.0軟件的插件，可提供基因功能分析集以及歸納相似的生物學(xué)過程并實(shí)現(xiàn)可視化。

1.1.2 使用軟件

Cytoscape軟件(版本：3.6.0，https://cytoscape.org)。

1.2 方法

1.2.1 成分的收集與活性成分的篩選

通過文獻(xiàn)挖掘進(jìn)行新疆榅桲主要成分的收集[6]。收集所得的所有化學(xué)成分通過TCMSP數(shù)據(jù)庫ADME參數(shù)的類藥性(drug-likeness，DL)進(jìn)行活性化合物的篩選[7]。

公式如下：

式中A是給定草藥成分的分子描述，B代表該性質(zhì)在Drugbank數(shù)據(jù)庫中所有分子的平均值。

1.2.2 活性成分作用靶點(diǎn)的預(yù)測及篩選

首先，通過TCMSP分析平臺和SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫預(yù)測及篩選活性成分對應(yīng)的靶點(diǎn)。然后，將所有靶點(diǎn)通過Uniprot數(shù)據(jù)庫以“Homo sapiens”(人屬)為關(guān)鍵詞進(jìn)行基因-蛋白名稱轉(zhuǎn)換，將全部蛋白名稱轉(zhuǎn)換為基因名稱。之后，將活性成分與基因名稱導(dǎo)入Cytoscape3.6.0軟件，進(jìn)而構(gòu)建成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖(compound-target network)，并進(jìn)一步用網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)中的自由度(degree)的大小來分析活性成分及其作用靶點(diǎn)相互作用的關(guān)聯(lián)度。

1.2.3 AS相關(guān)靶點(diǎn)的檢索及藥物-疾病共有靶點(diǎn)的分析

通過DiSGeNET數(shù)據(jù)庫以“Atherosclerosis， CUI:C0004153”為關(guān)鍵詞檢索AS相關(guān)靶點(diǎn)，并用Bioinformatics & Evolutionary Genomics(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)數(shù)據(jù)庫，將按照2.2.2 所述通過degree大小篩選得到的靶點(diǎn)與AS相關(guān)的靶點(diǎn)映射后得到藥物-疾病共有靶點(diǎn)，并進(jìn)一步構(gòu)建韋恩圖。

1.2.4 活性成分-靶點(diǎn)分子對接

通過systemsdock數(shù)據(jù)庫進(jìn)行活性成分與藥物-疾病共有靶點(diǎn)的分子對接。首先通過PDB數(shù)據(jù)庫檢索藥物-疾病共有靶點(diǎn)的PDB ID，導(dǎo)入systemsdock數(shù)據(jù)庫，然后通過Pubmed數(shù)據(jù)庫下載活性成分的2D結(jié)構(gòu)(SDF格式)，導(dǎo)入systemsdock數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行分子對接。按照對接得分(score)來判斷活性成分與靶點(diǎn)的匹配度，score越大，配體與受體結(jié)合越穩(wěn)定。通常score≥4.25認(rèn)為活性成分與靶點(diǎn)具有一定的結(jié)合活性；score≥5.0說明活性成分與靶點(diǎn)具有較好的結(jié)合活性；score≥7說明活性成分與靶點(diǎn)具有強(qiáng)烈的結(jié)合活性[8]。

1.2.5 通路分析與網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將分子對接Score≥5.0得到的靶點(diǎn)，通過ClueGO插件進(jìn)行分子功能(molecular function) 和生物過程(biological process) 分析以及通路分析(KEGG、Pathways、WikiPathways)。選擇種屬為人屬(Homo sapiens)，本體參考集(ontologies reference set)，kappa評分(kappa score)設(shè)為0.4，其余采用默認(rèn)參數(shù)。利用Cytoscape3.6.0軟件的關(guān)聯(lián)功能(Merge)構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖。

2 結(jié)果

2.1 活性成分的篩選結(jié)果

DL是指具有良好的臨床療效藥物的物理化學(xué)性質(zhì)及生物學(xué)特性(包括 ADME/Tox)。Lipinski指出，類藥化合物系具有在人體藥代藥動學(xué)過程中表現(xiàn)為較好的 ADME 特性和安全性，在I期臨床試驗(yàn)結(jié)束后，待進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)的化合物[9]。從生物學(xué)角度看，DL是綜合了藥代動力學(xué)性質(zhì)與藥物的安全性的指標(biāo)。Swiss ADME 提供了5種不同規(guī)則的藥物相似性指標(biāo)(Lipinski、Ghose、Veber、Egan、Muegge)，本研究選擇了Lipinski五項(xiàng)原則作為活性成分的篩選標(biāo)準(zhǔn)。以系統(tǒng)藥理學(xué)方法來分析傳統(tǒng)中醫(yī)藥時，DL≥0.18為篩選生物活性成分的標(biāo)準(zhǔn)[10]。DL越大，則成藥性越高。研究結(jié)果表明，通過文獻(xiàn)挖掘新疆榅桲共收集到27個化學(xué)成分，通過TCMSP數(shù)據(jù)庫按DL值進(jìn)行篩選得到11個活性成分(表1)。

表1 榅桲活性成分的ADME篩選

注：DL(類藥性)篩選標(biāo)準(zhǔn)DL≥0.18，活性成分按照DL的大小來排序。

Note:DL(Drug-like) screening standard DL(≥ 0.18),the active ingredients are sorted according to the size of DL.

2.2 活性成分作用靶點(diǎn)的預(yù)測與篩選結(jié)果

通過TCMSP分析平臺和SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫篩選得到活性成分對應(yīng)的388個相關(guān)靶點(diǎn)，將靶點(diǎn)通過Uniprot數(shù)據(jù)庫進(jìn)行基因名稱-蛋白名稱轉(zhuǎn)換，刪除重復(fù)的靶點(diǎn)名稱后得到255個靶點(diǎn)。將11個活性成分和255個靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape3.6.0軟件，構(gòu)建的活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖(圖1)。在網(wǎng)絡(luò)圖中，一個節(jié)點(diǎn)的自由度表示在相互作用網(wǎng)絡(luò)中與該節(jié)點(diǎn)直接相互作用的節(jié)點(diǎn)數(shù)目，節(jié)點(diǎn)的自由度越大則其參與的生物功能越多，其生物學(xué)重要性就越強(qiáng)[11]。因此，本研究進(jìn)一步用網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)中的自由度(degree)的大小來分析活性成分及其作用靶點(diǎn)相互作用的關(guān)聯(lián)度。按照degree由大到小排列后篩選degree≥3的靶點(diǎn)，可以得到11個活性成分對應(yīng)的24個主要作用靶點(diǎn)(表2)。

續(xù)表2(Continued Tab.2)

分類Sort 活性成分及其靶點(diǎn) Activecompoundortarget自由度Degree谷甾醇Sitosterol3靶點(diǎn)TargetnameNuclearreceptorcoactivator2(NCOA2)7ProstaglandinG/Hsynthase2(PTGS2)6DNAtopoisomeraseII(TOP2A)5ProstaglandinG/Hsynthase1(PTGS1)5HeatshockproteinHSP90(HSP90AA1)5Peroxisomeproliferatoractivatedreceptorgamma(PPARG)4Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate3-kinasecatalyticsubunit,gammaisoform(PIK3CG)4Arachidonate5-lipoxygenase(ALOX5)4Caspase-3(CASP3)4Hyaluronansynthase2(HAS2)4mRNAofPKACatalyticSubunitC-alpha(PRKACA)4Interstitialcollagenase(MMP1)3Trypsin-1(PRSS1)3RetinoicacidreceptorRXR-alpha(RXRA)3Transcriptionfactorp65(RELA)3Tumornecrosisfactor(TNF)3GlutathioneS-transferaseP(GSTP1)3TypeIiodothyroninedeiodinase(DIO1)3RAC-alphaserine/threonine-proteinkinase(AKT1)3ApoptosisregulatorBcl-2(Bcl-2)3TranscriptionfactorAP-1(JUN)3Hemeoxygenase1(HMOX1)3CytochromeP4503A4(CYP3A4)3CytochromeP4501A2(CYP1A2)3

注：篩選標(biāo)準(zhǔn)Degree≥3，共有11個活性成分和24個作用靶點(diǎn)，并按照Degree的大小依次排序。

Note:Screening criteria Degree(≥3) consisted of 11 active ingredients and 24 target sites,which were sorted according to the size of Degree.

圖1 成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig.1 The compound-target network注：紅色圓圈代表活性成分；藍(lán)色楔形代表主要靶點(diǎn)；圖形面積大小由Degree決定，即自由度越大該節(jié)點(diǎn)越明顯，在網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)中關(guān)聯(lián)度越大，生物學(xué)重要性就越強(qiáng)。Note:The red circle represents the active compounds;the blue wedge represents the main target;the size of the graphic area is determined by Degree,that is,the larger the degree of freedom,the more obvious the node is,the greater the degree of association in the network topology,the stronger the biological importance.

2.3 AS相關(guān)靶點(diǎn)的檢索及藥物-疾病共有靶點(diǎn)的分析

通過DiSGeNET數(shù)據(jù)庫以“Atherosclerosis， CUI:C0004153”為關(guān)鍵詞檢索AS相關(guān)靶點(diǎn)共1 133個，并用Bioinformatics & Evolutionary Genomics數(shù)據(jù)庫將24個藥物靶點(diǎn)與1 133個AS相關(guān)的靶點(diǎn)映射后，得到藥物-疾病共有靶點(diǎn)10個，包括NCOA2、TOP2A、RXRA、RELA、MMP1、HMOX1、GSTP1、CASP3、AKT1、PPARG并進(jìn)一步構(gòu)建韋恩圖(圖2)。

2.4 活性成分-靶點(diǎn)分子對接結(jié)果

通過systemsdock數(shù)據(jù)庫進(jìn)行11個活性成分與10個藥物-疾病共有靶點(diǎn)的分子對接。研究結(jié)果顯示，11個活性成分中除Beta-carotene以外，其余10個活性成分與10個藥物-疾病共有靶點(diǎn)之間對接得分(Score)≥5.0，即具有較好的結(jié)合活性(表3)。

圖2 藥物與疾病靶點(diǎn)的韋恩圖Fig.2 The venn diagram of drug targets and disease targets注：左邊區(qū)域代表藥物靶點(diǎn)14個；右邊區(qū)域代表AS相關(guān)靶點(diǎn)1 123個；中間重疊區(qū)域代表藥物-疾病共有靶點(diǎn)10個。Note:The left region represents 14 drug targets;the right region represents 1 123 AS-related targets;and the middle overlapping region represents 10 drug-disease targets.

表3 活性成分與主要靶點(diǎn)的分子對接(對接得分≥5.0)

續(xù)表3(Continued Tab.3)

活性成分Activecompund化學(xué)成分號PubChemID靶點(diǎn)Target對接得分Score活性成分Activecompund化學(xué)成分號PubChemID靶點(diǎn)Target對接得分Score槲皮素3-半乳糖苷Quercetin3-galactoside44259092CASP36.678槲皮素Quercetin5280343MMP16.660 RELA6.257 RELA6.651 HMOX16.178 GSTP16.169 MMP16.102 RXRA5.995 RXRA5.889 PPARG5.692 AKT15.398山奈酚Kaempferol5280863HMOX17.098蘆丁Rutin5280805TOP2A8.355 TOP2A7.07 NCOA28.199 NCOA26.916 PPARG8.093 AKT16.687 GSTP16.766 MMP16.633 CASP36.608 GSTP16.457 RELA6.429 RELA6.292 HMOX16.324 PPARG5.478 MMP16.175氯原酸Chlorogenicacid1794427NCOA26.769 RXRA5.450 PPARG6.545 AKT15.314 HMOX16.394異槲皮素Isoquercitrin5280804NCOA27.125 TOP2A6.207 PPARG6.889 GSTP15.848 TOP2A6.812 CASP35.547 GSTP16.385 RELA5.517 CASP36.228 RXRA5.484 HMOX16.124 AKT15.456 RELA5.908 MMP15.417 MMP15.595

注：篩選標(biāo)準(zhǔn)Score≥5.0，共有10個活性成分和10個作用靶點(diǎn)，并在相同活性成分類別下按照Score的大小依次排序。

Note:Screening Score(≥5.0) consisted of 10 active compounds and 10 target sites,which were sorted according to the size of Score under the same category of active compounds.

2.5 通路分析與網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建結(jié)果

通過 ClueGO 插件進(jìn)行分子功能、生物過程以及通路分析(圖3和圖4)。以不同顏色區(qū)分不同生物過程，相關(guān)分子功能以線段相互連接。研究結(jié)果顯示(圖3)，主要作用靶點(diǎn)的基因功能主要集中在血管平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)控(PPARG、HMOX1、GSTP1)和煙堿反應(yīng)的影響(CASP3、HMOX1、RELA)。研究結(jié)果還顯示(圖4)，主要作用靶點(diǎn)調(diào)控的通路包括PPAR信號通路(MMP1、PPARG、RXRA)、白脂肪細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控(NCOA2、PPARG、RELA、RXRA)以及腫瘤抑制素M信號通路(AKT1、CASP3、MMP1、RELA)。最后，利用Cytoscape3.6.0軟件的關(guān)聯(lián)功能(Merge)構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖(圖5)。

圖3 主要靶點(diǎn)的基因功能網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 Functional grouped network for the main targets

3 結(jié)論

本課題組前期研究結(jié)果顯示，新疆榅桲總黃酮對動脈粥樣硬化APOE-/-小鼠具有一定抗AS作用，并可調(diào)控氨基酸代謝，脂代謝，能量代謝和炎癥反應(yīng)相關(guān)通路。研究還發(fā)現(xiàn)，新疆榅桲總黃酮對自發(fā)性高血壓大鼠心肌肥厚具有抑制作用，可抑制H2O2誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，減輕H2O2對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用[12]。此外，新疆榅桲多糖和總黃酮具有抗血栓以及抗凝血酶誘導(dǎo)血小板聚集作用[13]，推測新疆榅桲作用于心血管疾病的活性成分主要為黃酮類和多糖類化合物。然而，具體活性物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚不明確。本研究結(jié)果表明，新疆榅桲10個活性成分中quercetin、kaempferol、rutin和isoquercitrin屬于黃酮類化合物，amygdalin和quercetin3-galactoside屬于糖類成分，這與前期研究結(jié)果符合。

圖4 主要靶點(diǎn)的通路分析網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 Pathway grouped network for the main targets

圖5 活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖Fig.5 The active compound-target-pathway network注：圓圈代表活性成分；楔形代表靶點(diǎn)；六角形代表通路。Note:circles represent active compounds;wedges represent targets;hexagons represent pathways.

由ClueGO靶點(diǎn)功能分析結(jié)果可知，10個主要作用靶點(diǎn)中PPARG、HMOX1和GSTP1主要與血管平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)控。血管平滑肌細(xì)胞增殖是高血壓、動脈粥樣硬化、冠心病血管成形術(shù)后再狹窄等疾病的重要病理改變，動脈壁中膜血管平滑肌細(xì)胞的增殖或肥大是高血壓血管壁增厚的主要原因。因此， 根據(jù)靶點(diǎn)功能分析推測新疆榅桲可能主要通過調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖抑制其病理改變，影響動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。此外，CASP3、HMOX1、RELA等靶點(diǎn)與煙堿反應(yīng)相關(guān)，而煙堿又稱為尼古丁，由吡啶和吡咯烷構(gòu)成，具有極大的毒性。研究證明，尼古丁能夠促進(jìn)體外大鼠動脈血管平滑肌細(xì)胞有絲分裂以及引起血管平滑肌細(xì)胞的表型變化，從收縮表型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣杀硇?，從而進(jìn)行增殖和合成細(xì)胞外基質(zhì)等一系列活動[14]。說明新疆榅桲活性成分可能通過調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖，影響血管平滑肌表型及細(xì)胞外基質(zhì)合成而作用于AS。

通路分析結(jié)果顯示(圖5)，新疆榅桲活性成分的主要作用靶點(diǎn)參與的通路主要包括PPAR信號通路、白脂肪細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控、腫瘤抑制素M信號通路等。其中參加PPAR信號通路的靶點(diǎn)有MMP1、PPARG、RXRA，PPARG是過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARG)是目前發(fā)現(xiàn)在脂肪組織中調(diào)控脂肪酸代謝的核心轉(zhuǎn)錄因子，主要分布于脂肪細(xì)胞，在血管內(nèi)皮細(xì)胞 、血管平滑肌細(xì)胞和單核細(xì)胞上也有表達(dá)，可促進(jìn)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)， 抑制血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，從而抑制泡沫細(xì)胞的形成[15]。因此，可以推測新疆榅桲可能通過不同活性成分如熊果酸(ursolicacid)、槲皮素3-半乳糖苷(quercetin 3-galactoside )、谷甾醇(sitosterol)、蘆丁(rutin)(對接得分高于7的活性成分)與PPARG結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖，從而發(fā)揮抗AS的作用。有研究報道[16]，PPARG配體能夠抑制MMP-9表達(dá)及活性，從而作用于AS。MMP是基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase， MMP)，參與血管平滑肌細(xì)胞通過基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)遷入內(nèi)膜的過程。而MMP1能特異降解細(xì)胞外成分Zn+2依賴的酶家族，可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致纖維帽變薄，斑塊不穩(wěn)定[17]。本研究結(jié)果可以推測，新疆榅桲活性成分可能通過作用于PPARG和MMP1調(diào)控PPAR信號通路，從而發(fā)揮抗AS的作用。還有研究報道，槲皮素可抑制血管平滑肌細(xì)胞中MMP-1表達(dá)，有助于增加斑塊的穩(wěn)定性，從而預(yù)防動脈粥樣硬化斑塊的破裂[18,19]。本研究結(jié)果與文獻(xiàn)所報道的槲皮素抑制平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符合，結(jié)果還顯示MMP-1與PPARG 之間存在聯(lián)系，然而尚未有二者相關(guān)性的研究報道。我們還推測槲皮素可能通過抑制MMP1表達(dá)，影響PPAR信號通路，從而調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖，然而上述假設(shè)需要一系列生物學(xué)驗(yàn)證進(jìn)行研究。另外，參與白脂肪細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控的靶點(diǎn)有NCOA2、PPARG、RELA和RXRA，其中RELA同時參與煙堿(尼古丁)反應(yīng)過程。RELA是轉(zhuǎn)錄因子p65(transcription factor p65，RELA或NF-κB P65)，是一類重要的細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子，能調(diào)控許多下游基因的表達(dá)，涉及到細(xì)胞的粘附、浸潤、轉(zhuǎn)移等諸多過程，其表達(dá)增強(qiáng)可促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。研究證明[20]，一定濃度的尼古丁通過激活NF-κB信號通路，促進(jìn)NF-κB的磷酸化，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的過度凋亡和成熟脂肪細(xì)胞過度凋亡甚至壞死。脂肪細(xì)胞經(jīng)尼古丁作用后能夠進(jìn)一步激活內(nèi)皮細(xì)胞中RELA蛋白，進(jìn)而加重尼古丁對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用，最終導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變，加速動脈粥樣硬化疾病的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果可推測，新疆榅桲多種活性成分可通過與NCOA2、PPARG、RELA和RXRA結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控白脂肪細(xì)胞分化，特別是如熊果酸和谷甾醇(對接得分高于7的活性成分)可通過與RELA相結(jié)合，抑制RELA的激活，一方面影響白脂肪細(xì)胞分化，另一方面，減輕尼古丁對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，保護(hù)內(nèi)皮功能，抑制AS的病程發(fā)展，這也是本課題組下一步需要研究和驗(yàn)證的問題。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)系統(tǒng)地闡述了新疆榅桲活性成分，主要作用靶點(diǎn)以及相互作用途徑，通過作用網(wǎng)絡(luò)圖初步闡釋了新疆榅桲多成分-多-靶點(diǎn)-多途徑的特點(diǎn)。本研究預(yù)測靶點(diǎn)與本課題組前期研究以及已知文獻(xiàn)報道的藥理作用相符合，說明靶點(diǎn)預(yù)測具有一定準(zhǔn)確性。此外，除上述兩個信號通路以外，本研究還發(fā)現(xiàn)新疆榅桲活性成分還可能參與癌癥相關(guān)信號通路，對于該類潛在靶點(diǎn)，相關(guān)文獻(xiàn)研究報道較少，因此為今后新疆榅桲活性成分及其作用機(jī)制的研究提供了新的線索和研究方向。