調(diào)亡抑制基因Survivin和乙?；D(zhuǎn)移酶p300在食管癌組織中的表達(dá)以及臨床意義

梁宗英 侯繼申 張樂(lè) 張志民 孫光蕊 辛國(guó)華

[摘要]目的 探討調(diào)亡抑制基因Survivin和乙?；D(zhuǎn)移酶p300在食管癌（EC）組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。方法 用免疫組化法檢測(cè)2016年2月～2018年2月我院胸外科90例EC組織和40例癌旁組織Survivin和p300的蛋白表達(dá)水平;分析Survivin和p300蛋白與臨床病例特征的關(guān)系及兩者的相關(guān)性。結(jié)果 ①癌組織中Survivin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;②癌組織中p300的陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;③Survivin的表達(dá)與EC TNM分期、腫瘤分化程度和淋巴轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。p300的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;④Survivin和p300在EC中的表達(dá)成正相關(guān)（r=0.657，P<0.05）。結(jié)論 Survivin和p300的表達(dá)水平與EC的分化程度及轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，且兩者可能在EC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮協(xié)同作用。

[關(guān)鍵詞]調(diào)亡抑制基因;乙?；D(zhuǎn)移酶p300;食管癌;臨床意義

[中圖分類號(hào)] R735.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）8（b）-0043-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of Survivin and acetyltransferase p300 in esophageal cancer （EC） and its relationship with clinical characteristics. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of Survivin and p300 proteins in 90 EC tissue and 40 para-carcinoma tissue in our Department of Thoracic Surgery， Affiliated Hospital of Chengde Medical College from February 2016 to February 2018. The relationship between Survivin and p300 protein， and clinical characteristics and the correlation were analyzed. Results ①The positive expression rate of Survivin protein in cancer tissues was higher than that in para-carcinoma tissues （P<0.05）. ②The positive expression rate of p300 in cancer tissues was higher than that in para-carcinoma tissues with a statistical difference （P<0.05）. ③The expression of Survivin was associated with TNM stage of EC， tumor differentiation and lymphatic metastasis with statistical significance （P<0.05）. The positive expression of p300 was correlated with tumor differentiation and lymphatic metastasis （P<0.05）. ④The expression of Survivin and p300 was positively correlated in EC and the correlation coefficient （r=0.657， P<0.05）. Conclusion The expression levels of Survivin and p300 are correlated with the degree of differentiation and metastasis of EC， and they may play a synergistic role in the occurrence， development and metastasis of EC.

[Key words] Apoptosis-inhibiting gene; Acetyltransferase p300; Esophageal cancer; Clinical significance

食管癌（EC）是常見(jiàn)的消化系統(tǒng)腫瘤之一，我國(guó)EC發(fā)病率和死亡率均居世界首位[1]。EC的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療是改善預(yù)后最有效的方法，因此尋找早期診斷、病情監(jiān)測(cè)和判斷預(yù)后的敏感有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)成為近年來(lái)研究重點(diǎn)。EC的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多途徑、多種癌基因激活和抑癌基因失活的漸進(jìn)過(guò)程。關(guān)鍵基因及蛋白的異常表達(dá)在EC的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起關(guān)鍵作用。研究表明，調(diào)亡抑制基因Survivin和乙?；D(zhuǎn)移酶p300參與了多種腫瘤的凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移[2-3]。但迄今為止，Survivin和p300在EC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中是否存在協(xié)同作用鮮有文獻(xiàn)闡明。本研究用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)Survivin和p300蛋白在EC癌組織中的表達(dá)，分析其與EC人口學(xué)特征、分化程度、TNM分期、腫瘤侵襲性、淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系及兩者在其中的協(xié)同作用，為EC的早期診斷和臨床制定治療方案提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年2月～2018年2月我院胸外科治療的90例EC手術(shù)患者，其病理類型全部為鱗狀細(xì)胞癌。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者的臨床資料完整;②均為首發(fā)病例;③所有患者術(shù)前無(wú)化療、放療及免疫治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者的臨床資料不完整;②二次復(fù)發(fā)病例;③患者術(shù)前有放、化療及其他藥物治療史。其中男54例，女36例;年齡38～72歲，平均（59.23±3.69）歲;≥60歲59例，<60歲31例;TNM分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，Ⅲ期28例;細(xì)胞分化程度高、中、低分別為34、31、25例;有淋巴轉(zhuǎn)移54例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移36例。另選40例距癌組織>6 cm癌旁正常上皮組織標(biāo)本作為對(duì)照組。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)，所有患者對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2方法

5 μm石蠟塊切片，經(jīng)二甲苯脫蠟水化、枸櫞酸鹽修復(fù)、H2O2浸潤(rùn)、PBS沖洗、山羊血清封閉;Ⅰ抗溫育，Ⅱ抗溫育，中間PBS洗滌，DAB顯色、蘇木素染色;乙醇脫水后二甲苯透明及中性樹(shù)膠封固。兔抗人BIRC5/p300單克隆抗體購(gòu)自上海北諾生物科技有限公司，批號(hào)PA1848;鼠抗人Survivin單克隆抗體購(gòu)自上海煊翎生物科技有限公司，批號(hào)abx038170。免疫組化試劑盒購(gòu)自長(zhǎng)沙達(dá)爾鋒生物科技有限公司，批號(hào)BIH0003。

1.3觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

觀察Survivin和p300在EC和癌旁組織中的表達(dá);分析Survivin和p300的表達(dá)與臨床病例特征的關(guān)系;Survivin和p300在EC中表達(dá)的相關(guān)性。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：400倍光鏡下隨機(jī)選10個(gè)高倍視野，每視野數(shù)100個(gè)細(xì)胞;Survivin陽(yáng)性結(jié)果：胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分比>10%;p300陽(yáng)性結(jié)果：胞質(zhì)和胞核出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分比≥10%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Kappa一致性檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Survivin和p300在EC和癌旁組織中的表達(dá)

Survivin在癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。p300癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2 Survivin和p300的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

Survivin蛋白的表達(dá)與患者性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與TNM分期、腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;p300的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的分化程度和淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

2.3 Survivin和p300在EC中的表達(dá)

Survivin和p300在EC中的表達(dá)成正相關(guān)（r=0.657，P<0.05）（表3）。

3討論

EC是危害人類健康的惡性腫瘤之一。近年來(lái)，我國(guó)EC的發(fā)病率和死亡率雖呈下降趨勢(shì)，但發(fā)病率和死亡率仍處于相當(dāng)高的水平[1]。EC的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多階段的復(fù)雜過(guò)程。失活的抑癌基因通過(guò)參與細(xì)胞的凋亡為異常細(xì)胞提供生存之機(jī)，促使EC的發(fā)生和發(fā)展。

Survivin是功能最強(qiáng)的細(xì)胞凋亡抑制因子，它的表達(dá)與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4-10]。Survivin可干擾細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂和血管形成。Survivin的高表達(dá)可提高腫瘤細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)能力，對(duì)腫瘤的診治及預(yù)后有深遠(yuǎn)的意義[11]。本研究結(jié)果顯示，在EC組織中Survivin陽(yáng)性表達(dá)明顯高于癌旁癌旁組織（P<0.05），Survivin蛋白在正常組織中基本不表達(dá)，在EC組織過(guò)度表達(dá)。提示Survivin可能通過(guò)直接或間接作用抑制EC細(xì)胞的凋亡從而促進(jìn)EC的發(fā)展。Survivin可能通過(guò)調(diào)控有絲分裂促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖并抑制凋亡而參與EC的侵襲與轉(zhuǎn)移[12]。研究者通過(guò)RNA干擾技術(shù)開(kāi)展EC與Survivin關(guān)系的研究，發(fā)現(xiàn)沉默Survivin基因能抑制EC109細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)Caspases的活性，阻滯細(xì)胞周期的進(jìn)展，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[13]。Survivin在EC的增殖和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到了重要的作用，是預(yù)測(cè)EC預(yù)后的重要分子標(biāo)志物。同時(shí)本研究結(jié)果顯示，Survivin的表達(dá)與癌組織分化程度、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P<0.05），Survivin陽(yáng)性表達(dá)率隨著EC的惡性程度和TNM分期的增加而逐漸增加，在腫瘤浸潤(rùn)程度和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移兩組間亦有顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與柴小軍等[14]的研究結(jié)果一致。EC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Survivin蛋白表達(dá)升高，提示其可抑制癌細(xì)胞的凋亡， 促使腫瘤惡性程度增強(qiáng)，導(dǎo)致EC容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。牛朝霞等[15]證實(shí)靶向抑制Survivin 基因的表達(dá)能顯著降低干擾組Eca-109細(xì)胞的體外侵襲與遷移能力。因而Survivin表達(dá)與EC侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系意義重大。Survivin 蛋白表達(dá)聯(lián)合ECTNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移及分化程度等臨床病理特征評(píng)估后發(fā)現(xiàn)，Survivin蛋白陰性，TNMⅠ期、腫瘤分化程度高、無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者，患者預(yù)后較好，可能與Survivin 蛋白表達(dá)缺失，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的功能喪失有關(guān)，細(xì)胞增殖與凋亡保持平衡，提高了早期患者的生存期。當(dāng)Survivin蛋白陽(yáng)性時(shí)，細(xì)胞惡性程度高、TNMⅡ、Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，預(yù)后較差?？赡芘cSurvivin過(guò)表達(dá)后正常的凋亡減緩，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞無(wú)限制生長(zhǎng)有關(guān)。同時(shí)Survivin過(guò)表達(dá)可能促進(jìn)細(xì)胞的有絲分裂和血管的生成以及腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致了腫瘤的局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處遷移。

p300是乙?；D(zhuǎn)移酶中重要的成員，可通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白乙?；蕉鴧⑴c腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。p300在多種腫瘤組織中的高表達(dá)與腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)[16-18]。陸平等[19]通過(guò)分析肺癌組織發(fā)現(xiàn)，p300在肺鱗癌和腺癌中高表達(dá)，與腫瘤的分化、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)外對(duì)p300與腫瘤的發(fā)生進(jìn)行了許多研究，但聯(lián)合Survivin和p300與EC發(fā)生關(guān)系的報(bào)道鮮見(jiàn)。本研究結(jié)果顯示，p300在癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為68.89%，癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為22.50%。p300的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（P<0.05），提示 p300可能參與并促進(jìn)了EC的發(fā)生和發(fā)展。

本研究結(jié)果顯示，Survivin和p300在EC中表達(dá)成正相關(guān)（r=0.657）。提示Survivin和p300可能共同參與了EC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，并在腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。盡管在胃癌和子宮頸癌中均可見(jiàn)Survivin和p300的表達(dá)報(bào)道[20]，但兩者聯(lián)合在EC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用報(bào)道較少。p300是腫瘤抑制基因p53的共激活子，調(diào)節(jié)p53的活性及蛋白的穩(wěn)定性使細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡達(dá)到一個(gè)平衡狀態(tài)。研究顯示，EC中p53與Survivin 的表達(dá)成顯著正相關(guān)，且兩者與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[21]。Survivin和p300是通過(guò)p53還是其他基因在EC中發(fā)揮協(xié)同作用仍有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，Survivin和p300在EC組織中的高表達(dá)與EC密切相關(guān)，且Survivin和p300在EC的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中有共同促進(jìn)作用，可能是EC發(fā)生的重要機(jī)制。今后可以將Survivin和p300作為切入點(diǎn)，深入研究其機(jī)制，為EC的基因靶向治療提供新的理論依據(jù)。

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（收稿日期：2018-12-24? 本文編輯：崔建中）