• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討杜仲-續(xù)斷藥對治療腰椎間盤突出癥的作用機(jī)制*

    2019-10-26 03:54:56李志超李丹丹薛海鵬徐展望
    關(guān)鍵詞:網(wǎng)絡(luò)圖杜仲槲皮素

    李志超,李丹丹,薛海鵬,徐展望△

    (1.山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院脊柱骨科,山東 濟(jì)南 250355)

    腰椎間盤突出癥(lumbar disc herniation,LDH),是指腰椎間盤發(fā)生退行性改變以后,在外力作用下,纖維環(huán)部分或全部破裂,單獨或者連同髓核、軟骨終板向外突出,刺激或壓迫竇椎神經(jīng)和神經(jīng)根引起的以腰腿痛為主要癥狀的一種病變[1]。其病程長、易復(fù)發(fā),嚴(yán)重影響患者的正常生活。在中醫(yī)學(xué)中,將腰椎間盤突出癥歸于“腰痛”“腰腿痛”“痹癥”等范疇,病因病機(jī)多為跌仆閃挫,氣血瘀滯,或腎精虛損,筋骨失養(yǎng),或寒濕內(nèi)浸,阻遏經(jīng)脈等[2]。

    臨床上杜仲和續(xù)斷配伍常用于LDH的治療,其中杜仲能夠補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨;續(xù)斷能夠補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、續(xù)折傷。現(xiàn)代研究表明杜仲中的有效成分具有保肝護(hù)腎、提高骨密度、抑制骨吸收、調(diào)節(jié)骨代謝、延緩衰老、抗疲勞等作用[3-4]。續(xù)斷中的有效成分具有保護(hù)骨組織、保肝降脂、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用[5]。由此可見,杜仲-續(xù)斷配伍治療LDH的療效確切。然而由于中藥多成分、多靶點、相互協(xié)同作用的特點,使得中藥治療疾病的作用機(jī)制十分復(fù)雜。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)利用多層次網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建,從整體角度分析藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制,這種整體性、系統(tǒng)性的特點與中藥治療的整體觀念和辨證論治的原則不謀而合。本研究選擇常用藥杜仲-續(xù)斷藥對開展網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究,以期明確杜仲、續(xù)斷有效成分及作用靶點,并進(jìn)一步分析該藥對治療LDH的作用機(jī)制,為LDH治療提供新思路。

    1 資料與方法

    1.1 杜仲、續(xù)斷藥對活性成分的獲取與篩選 在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺數(shù)據(jù)庫(Traditional ChineseMedicineSystemsPharmacologyDatabase and Analysis Platform,TCMSP,http://lsp.nwu.edu.cn/tcm-spsearch.php)中分別錄入杜仲、續(xù)斷進(jìn)行檢索,按口服生物利用度(OB)≥30%,類藥性DL≥0.18條件篩選出有效成分。

    1.2 杜仲、續(xù)斷藥對靶點的整理 通過TCMSP數(shù)據(jù)庫導(dǎo)出杜仲-續(xù)斷藥對有效成分所對應(yīng)的靶點,然后導(dǎo)入 Unitprot數(shù)據(jù)庫(https://www.unitprot.org/),進(jìn)行基因的標(biāo)準(zhǔn)化處理。

    1.3 LDH靶點的獲取與預(yù)測 在GeneCards(https://www.genecards.org/)數(shù)據(jù)庫以及 OMIM(http://www.omim.org/)數(shù)據(jù)庫中,以“l(fā)umbar disc herniation”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索,將檢索到的蛋白名稱復(fù)制到Uniprot數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行基因的標(biāo)準(zhǔn)化處理,得到疾病相關(guān)的靶點信息。

    1.4 杜仲-續(xù)斷活性成分網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 將杜仲、續(xù)斷的活性成分導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件,構(gòu)建有效成分的靶點網(wǎng)絡(luò)圖,并進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?。在網(wǎng)絡(luò)中,節(jié)點代表化合物信息,邊代表有效成分-靶點的相互作用。

    1.5 蛋白(PPI)互作網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建與分析 先將杜仲、續(xù)斷的有效成分作用靶點進(jìn)行去重,再與LDH靶點組建“成分-靶點”數(shù)據(jù)庫,取兩者交集,組成“成分-靶點”映射文件,即尋找成分與疾病共有的靶點,將共有靶點與化合物成分輸入STRING數(shù)據(jù)庫,構(gòu)建“杜仲、續(xù)斷-LDH靶點”的PPI網(wǎng)絡(luò)圖。利用Cytoscape3.7.2軟件中的Network Analyzer進(jìn)行分析,根據(jù)節(jié)點度(degree≥9)值進(jìn)行篩選,得到杜仲-續(xù)斷治療LDH的核心作用靶點。

    1.6 生物通路及富集分析 將1.5篩選出的PPI網(wǎng)絡(luò)核心靶標(biāo)導(dǎo)入 DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)數(shù)據(jù)庫中,進(jìn)行KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路分析以及 GO(Gene Ontology)生物過程的富集分析。以P≤0.05,F(xiàn)DR≤0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn),篩選出符合條件的前20條GO生物過程與23條KEGG通路,并用表格的形式展示。通過通路富集結(jié)果對杜仲-續(xù)斷治療LDH的作用機(jī)制進(jìn)行預(yù)測。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 杜仲-續(xù)斷藥對有效成分的靶點篩選及預(yù)測利用TCMSP數(shù)據(jù)庫,分別將杜仲、續(xù)斷輸入到數(shù)據(jù)庫,進(jìn)行成分搜索,將得到的成分按照口服生物利用度(OB)≥30%、類藥性(DL)≥0.18為條件進(jìn)行篩選,得到有效成分共36個,其中杜仲有效成分28個,續(xù)斷有效成分8個(見表1)。

    2.2 杜仲-續(xù)斷成分靶點的預(yù)測及成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 利用TCMSP網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫,將杜仲-續(xù)斷藥對的36個有效成分進(jìn)行檢索,獲取其有效成分相對應(yīng)的靶點,共1 785個。并將其導(dǎo)入Unitprot數(shù)據(jù)庫進(jìn)行基因名標(biāo)準(zhǔn)化處理,再通過Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建“杜仲-續(xù)斷有效成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖,見圖1。

    表1 杜仲-續(xù)斷有效成分

    圖1 杜仲-續(xù)斷有效成分靶點-網(wǎng)絡(luò)圖

    網(wǎng)絡(luò)圖中共有168節(jié)點組成,“V字形”代表中藥杜仲和續(xù)斷,“藍(lán)色橢圓形”代表杜仲-續(xù)斷中有效成分共36節(jié)點,“紅色橢圓形”代表有效成分所對應(yīng)的靶點共132節(jié)點,節(jié)點與節(jié)點之間的邊表示藥物成分與靶點之間的相互作用關(guān)系,最大自由度104,最小自由度為1,平均自由度為8.84,其中度值排名前五的為β-谷甾醇、槲皮素、Cinchonan-9-al,6'-methoxy-,(9R)-、山柰酚、(-)-Tabernemontanine,節(jié)點的自由度值分別為 104、88、56、56、52,說明這些化合物是杜仲-續(xù)斷治療腰椎間盤突出癥的主要活性成分。

    2.3 LDH相關(guān)靶點蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 通過GeneCards數(shù)據(jù)庫篩選的與LDH相關(guān)的靶點有366個。將這些基因?qū)ytoscape3.7.2軟件,構(gòu)建“疾病-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖(見圖2)。圖中共有366節(jié)點組成,紅色圓形為疾病“腰椎間盤突出癥”,藍(lán)色矩形為疾病對應(yīng)的靶點。節(jié)點與節(jié)點之間的邊表示疾病LDH與靶點蛋白之間的對應(yīng)關(guān)系。

    圖2 LDH-疾病-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

    圖3 杜仲-續(xù)斷“成分-疾病”靶點PPI圖

    2.4 核心靶點的篩選 通過網(wǎng)絡(luò)合并,獲得杜仲-續(xù)斷和LDH的共有靶點36個(見表2)。將這36個靶點導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫建立杜仲-續(xù)斷“成分-疾病”靶點蛋白互作PPI網(wǎng)絡(luò)圖(圖3),共得到36個節(jié)點,382條邊,平均節(jié)點度為21.2;再將該結(jié)果以TSV格式導(dǎo)出,再通過Cytoscape3.7.2軟件對該網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?,以degree值≥22為篩選標(biāo)準(zhǔn),得到20個核心靶點,環(huán)加氧酶(PTGS2)、基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)、白介素-1B(IL-1B)、C-C 基序趨化因子(2CCL2)、促分裂原活化蛋白激酶 8(MAPK8)、雌激素受體(ESR1)、血管內(nèi)皮生長因子 A(VEGFA)、促分裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素 γ(IFNG)、基質(zhì)金屬蛋白酶 2(MMP2)、一氧化氮合酶(NOS3)、轉(zhuǎn)錄因子(JUN)、表皮細(xì)胞生長因子R(EGFR)、基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)、表皮細(xì)胞生長因子(EGF)、髓過氧化物酶(MPO)、促分裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、白介素-6(IL-6)、腫瘤抑制基因 p53(TP53),一起構(gòu)成核心網(wǎng)絡(luò)圖,見圖4。

    表2 杜仲-續(xù)斷-LDH共有靶點

    圖4“成分-疾病”核心靶點網(wǎng)絡(luò)圖

    表3 杜仲-續(xù)斷調(diào)控治療LDH生物過程分析

    2.5 GO生物過程結(jié)果分析 將2.4項得到的核心靶點錄入David數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行GO生物過程分析,得到分子功能、生物過程和細(xì)胞成分條目315個,以P≤0.05,F(xiàn)DR≤0.05為標(biāo)準(zhǔn),篩選出符合條件的前20個GO條目(見表3)。主要包括一氧化氮生物合成過程的正調(diào)控(positive regulation of nitric oxide biosynthetic process)、細(xì)胞外間隙(extracellular space)、基因表達(dá)的正調(diào)控(positive regulation of gene expres-sion)、細(xì)胞外區(qū)(extracellular region)、脂多糖介導(dǎo)的信號通路(lipopolysaccharide-mediated signaling pathway)、血管生成(angiogenesis)、缺氧反應(yīng)(response to hypoxia)等生物過程。

    2.6 KEGG通路富集分析 將2.4項得到的核心靶點錄入David數(shù)據(jù)庫,得到KEGG通路80條,以P≤0.05,F(xiàn)DR≤0.05為標(biāo)準(zhǔn),篩選出符合條件的23條信號通路(見表4),其中包括美洲錐蟲?。–hagas disease)、HIF-1 信號通路(HIF-1 signaling pathway)、TNF信號通路(TNF signaling pathway)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis)、膀胱癌(Bladder cancer)、利什曼?。↙eishmaniasis)等信號通路,其中,與LDH相關(guān)的通路可能為HIF-1信號通路、TNF信號通路。

    3 討論

    表4 KEGG富集分析表

    中醫(yī)學(xué)中LDH多屬于“腰痛”“腰腿痛”“痹癥”等范疇?!吨嗅t(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》將LDH規(guī)范為血瘀證、寒濕證、濕熱證和肝腎虧虛證四證。歷代醫(yī)家對腰痛病因病機(jī)的認(rèn)識各有不同,對本病的辨證論治有不同的側(cè)重,其中以補(bǔ)益肝腎為基本治法的方藥使用較多。杜仲、續(xù)斷二者味甘性溫,歸肝、腎經(jīng),皆能補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨,是臨床治療肝腎虧虛之腰椎間盤突出癥的常用藥對[6]。《玉楸藥解》中記載:“杜仲,益肝腎,養(yǎng)筋骨,祛關(guān)節(jié)濕淫,治腰膝酸痛,腿足拘攣”;侯士良《中藥八百種詳解》中記載:“杜仲,甘溫補(bǔ)肝腎,壯筋骨,為治腰痛必用之品”?!兜崮媳静荨分杏涊d:“續(xù)斷,補(bǔ)肝,強(qiáng)筋骨。走經(jīng)絡(luò),止經(jīng)中疼痛”,《日華子本草》中記載:“續(xù)斷,助氣,調(diào)血脈,補(bǔ)五勞七傷?!倍胖?續(xù)斷藥對在歷代醫(yī)家的驗方使用中十分常見,《千金要方》丹參丸,《扶壽精方》續(xù)斷丸,《本事方》思仙續(xù)斷丸等,均重視杜仲、續(xù)斷兩藥配伍,效果顯著?,F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)[7],杜仲-續(xù)斷配伍在補(bǔ)腎強(qiáng)骨中存在整體調(diào)節(jié)和綜合治療的優(yōu)勢,具有良好的臨床療效。

    通過TCMSP數(shù)據(jù)庫分析得出,β-谷甾醇、槲皮素和山柰酚可能是杜仲-續(xù)斷藥對治療LDH的關(guān)鍵成分。β-谷甾醇具有抗炎、抗氧化和調(diào)節(jié)人體甾體激素等多種生理作用[8]。β-谷甾醇可以通過減少NO的合成,抑制巨噬細(xì)胞IL-6活性,減少IL-1、TNF等炎性因子的分泌,起到抗炎的作用[9]。有研究證實,β-谷甾醇可顯著降低細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物含量、提高谷胱甘肽水平,減輕脂質(zhì)蓄積造成的肝細(xì)胞的過氧化損傷,從而起到保護(hù)肝臟的作用[10]。槲皮素具有抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫抑制等廣泛的藥理作用[11]。胡慶華等[12]研究表明,槲皮素可明顯緩解高果糖飲食或氧嗪酸鉀鹽誘導(dǎo)的高尿酸血癥,并可通過下調(diào)NLRP3炎癥體各組分和TLRs信號通路中關(guān)鍵分子基因和蛋白水平,緩解腎臟炎癥反應(yīng)及減輕腎損傷,起到改善腎功能的作用。袁小亮等[13]研究表明,槲皮素可顯著降低MMP-13/TIMP-1的比例,促進(jìn)抑制軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的降解,促進(jìn)對關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)。山奈酚具有抗炎、抗氧化、抗菌等藥理作用[14]。研究表明山柰酚可顯著降低IL-1B等因子的表達(dá),抑制大鼠OA軟骨細(xì)胞促炎介質(zhì)的表達(dá)[15]。湯利華等[16]的實驗研究表明,在糖尿病腎病大鼠中,山奈酚能夠降低大鼠蛋白尿、血肌酐和尿素氮含量,同時降低Caspase-3、Caspase-9、NLRP3、ASC和Caspase-1及炎癥因子IL-18和IL-1B的表達(dá)水平,對腎功能和組織病理損傷具有保護(hù)作用。故杜仲-續(xù)斷藥對中的β-谷甾醇、槲皮素和山柰酚等有效成分,表現(xiàn)出抗炎、保護(hù)肝臟、改善腎功能、保護(hù)軟骨等顯著功效,很可能是治療LDH的有效成分。

    杜仲-續(xù)斷治療LDH的多個有效成分對應(yīng)多個靶點,通過對“藥物-疾病”核心靶點網(wǎng)絡(luò)圖分析,結(jié)果顯示 PTGS2、MMP3、TNF、IL-6、IL-1B 等 20 個核心靶點在杜仲-續(xù)斷治療LDH中發(fā)揮了重要作用。目前,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)一致認(rèn)為椎間盤退變是LDH最本質(zhì)的病理變化之一,不僅表現(xiàn)有形態(tài)學(xué)和組織學(xué)的變化,同時也伴隨生化性質(zhì)的一系列改變。其中,IL-6、IL-1B、TNF和MMP3都是重要的細(xì)胞因子,是可能導(dǎo)致椎間盤退變的原因之一[17]。MMP3是細(xì)胞外基質(zhì)降解的重要蛋白之一,能夠改變椎間盤基質(zhì)內(nèi)蛋白多糖、膠原、彈性蛋白等生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能及含量,從而在椎間盤退變和突出中起作用[18-19]。IL-6可刺激炎癥細(xì)胞聚集、促進(jìn)炎癥介質(zhì)合成,誘導(dǎo)MMPS的表達(dá),破壞蛋白聚糖II型膠原的比例,使髓核脫水,加速椎間盤退變[20]。TNF內(nèi)的多種生物學(xué)活性可以促進(jìn)細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的生成,改變內(nèi)皮細(xì)胞的通透性,參與痛覺敏感性的形成;誘導(dǎo)MMPS活性上調(diào),減少膠原和蛋白多糖的合成[21-22]。在一項骨關(guān)節(jié)炎的研究中發(fā)現(xiàn),槲皮素能減少IL-1B、TNF、IL-6等細(xì)胞因子的表達(dá),抑制軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的降解,保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨[23]。PTGS2可參與炎癥、凋亡和免疫反應(yīng),細(xì)胞因子和趨化因子的級聯(lián)反應(yīng),調(diào)控破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞的生成和分化[24-25]。由此可見,杜仲-續(xù)斷可能通過作用于以上 IL-6、IL-1B、MMP3、TNF 和 PTGS2 等靶點,參與治療LDH的消炎鎮(zhèn)痛、抑制椎間盤的退變等過程。

    通過KEGG通路富集分析,HIF-1信號通路、TNF信號通路等可能是治療LDH的關(guān)鍵通路。張丹等[26]認(rèn)為,HIF-1在成血管-成骨耦連反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,作為上游基因調(diào)控著體內(nèi)多種成血管、成骨基因的表達(dá),促進(jìn)血管形成的同時,協(xié)同促進(jìn)骨的再生。TNF信號通路中的TNF-α不僅可以使其信號通路發(fā)生異常,還可以和其他促炎性細(xì)胞因子刺激破骨細(xì)胞分化和活化,而引起骨丟失,刺激滑膜成纖維細(xì)胞和軟骨細(xì)胞產(chǎn)生降解軟骨的蛋白酶,最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)和軟骨的破壞[27]。故杜仲-續(xù)斷中的β-谷甾醇、槲皮素和山奈酚等很可能通過 IL-6、IL-1B、TNF、MMP3、PTGS2等靶點作用于HIF-1信號通路、TNF信號通路,參與各細(xì)胞因子的調(diào)控,抑制炎性因子表達(dá),促進(jìn)骨的生成,減少軟骨和關(guān)節(jié)的破壞,從而發(fā)揮治療LDH的作用。

    綜上所述,杜仲-續(xù)斷在治療LDH上具有多成分、多靶點、多通路的特點,因數(shù)據(jù)有限,存在一定的局限性,從整體層面分析藥物與疾病間的作用機(jī)制,初步預(yù)測了杜仲-續(xù)斷藥對參與治療LDH的核心靶標(biāo),為治療LDH提供了一些新的思路,也為今后進(jìn)一步的分子生物學(xué)驗證提供了理論基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    網(wǎng)絡(luò)圖杜仲槲皮素
    網(wǎng)絡(luò)圖中的45°角
    網(wǎng)絡(luò)圖在汽修業(yè)中應(yīng)用
    活力(2019年21期)2019-04-01 12:17:00
    HPLC法同時測定杜仲-當(dāng)歸藥對中5種成分
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:14
    槲皮素改善大鼠銅綠假單胞菌肺感染
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:21
    略陽杜仲
    陜西畫報(2016年1期)2016-12-01 05:35:28
    槲皮素通過抑制蛋白酶體活性減輕心肌細(xì)胞肥大
    殃及池魚
    周末
    以知識網(wǎng)絡(luò)圖為主導(dǎo)的教學(xué)模式淺探
    槲皮素金屬螯合物的研究與應(yīng)用
    日本黄大片高清| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产在视频线精品| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久久久久人妻| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 免费观看av网站的网址| 人人妻人人看人人澡| 99热这里只有精品一区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品视频人人做人人爽| 嘟嘟电影网在线观看| 欧美一区二区亚洲| 亚洲av男天堂| av免费在线看不卡| 亚洲av.av天堂| 日本爱情动作片www.在线观看| 水蜜桃什么品种好| 午夜视频国产福利| freevideosex欧美| 亚洲国产精品一区三区| 国产精品一二三区在线看| 免费人成在线观看视频色| 一个人看的www免费观看视频| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品女同一区二区软件| 最后的刺客免费高清国语| 秋霞在线观看毛片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美精品一区二区免费开放| 久久97久久精品| 99热6这里只有精品| 精品一区二区三卡| 男女边摸边吃奶| 一级片'在线观看视频| 一区二区三区乱码不卡18| 国产爽快片一区二区三区| 一个人看视频在线观看www免费| 免费高清在线观看视频在线观看| 欧美性感艳星| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 男女边摸边吃奶| 国精品久久久久久国模美| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| tube8黄色片| 精品人妻熟女av久视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久6这里有精品| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产人妻一区二区三区在| 日本欧美视频一区| 亚洲第一区二区三区不卡| 99热网站在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 少妇 在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久久久久久久大av| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美日韩精品成人综合77777| 七月丁香在线播放| 精品久久国产蜜桃| 天美传媒精品一区二区| 性色avwww在线观看| 国产 精品1| 在线 av 中文字幕| 亚洲经典国产精华液单| 国产高潮美女av| 又大又黄又爽视频免费| 91久久精品国产一区二区三区| 欧美成人a在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 黄色日韩在线| 久久精品人妻少妇| 少妇人妻 视频| 精品一区二区三区视频在线| 嫩草影院新地址| 日日撸夜夜添| 精品熟女少妇av免费看| 男女免费视频国产| 91aial.com中文字幕在线观看| 日韩伦理黄色片| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲欧美成人精品一区二区| 嫩草影院入口| videossex国产| 国产精品一二三区在线看| 国产爽快片一区二区三区| 另类亚洲欧美激情| 日本黄大片高清| 26uuu在线亚洲综合色| 一级二级三级毛片免费看| 久久精品久久精品一区二区三区| 99久国产av精品国产电影| 中文字幕制服av| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品.久久久| 久久久久久九九精品二区国产| 最黄视频免费看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 观看免费一级毛片| h日本视频在线播放| av在线蜜桃| 国产精品成人在线| 亚洲国产欧美在线一区| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲人成网站在线观看播放| 在线播放无遮挡| 亚洲色图av天堂| 男人舔奶头视频| 国产真实伦视频高清在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品精品国产色婷婷| 免费看av在线观看网站| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品欧美亚洲77777| 黄色视频在线播放观看不卡| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久韩国三级中文字幕| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 男女免费视频国产| 日韩强制内射视频| 成年av动漫网址| 久久久久久久久久人人人人人人| 97在线视频观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 国产乱人偷精品视频| 99视频精品全部免费 在线| 久久久成人免费电影| 亚洲四区av| 国产在线男女| 又大又黄又爽视频免费| 黄色视频在线播放观看不卡| 精品酒店卫生间| 精品久久久久久电影网| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产毛片在线视频| 少妇人妻 视频| 国内精品宾馆在线| 国产成人一区二区在线| 高清日韩中文字幕在线| 国产亚洲一区二区精品| 精品一区二区三区视频在线| 国产伦理片在线播放av一区| 国产 一区精品| xxx大片免费视频| 国产精品熟女久久久久浪| 中文在线观看免费www的网站| 黑丝袜美女国产一区| 777米奇影视久久| 国产中年淑女户外野战色| 99国产精品免费福利视频| 亚洲国产av新网站| 在线免费十八禁| 欧美+日韩+精品| 亚洲怡红院男人天堂| 久久久久网色| 国产欧美亚洲国产| 有码 亚洲区| 久久精品久久久久久久性| 国产精品.久久久| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲国产成人一精品久久久| 大话2 男鬼变身卡| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 新久久久久国产一级毛片| 91久久精品电影网| av卡一久久| 欧美97在线视频| 亚洲精品,欧美精品| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲精品一二三| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国内精品宾馆在线| 国产成人精品福利久久| 男女国产视频网站| 国产色爽女视频免费观看| freevideosex欧美| 日本一二三区视频观看| 欧美高清成人免费视频www| 国内揄拍国产精品人妻在线| 下体分泌物呈黄色| 亚洲av二区三区四区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 日日啪夜夜爽| 久久99精品国语久久久| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 久久久久久久精品精品| 少妇精品久久久久久久| 婷婷色综合大香蕉| 国产成人aa在线观看| 色综合色国产| 伦理电影免费视频| 成人二区视频| 制服丝袜香蕉在线| 天天躁日日操中文字幕| 91精品一卡2卡3卡4卡| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲,欧美,日韩| 一级毛片 在线播放| 久久久久性生活片| 在线看a的网站| 丰满迷人的少妇在线观看| 免费看日本二区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 精品久久久久久久久av| 高清在线视频一区二区三区| av免费观看日本| 99久国产av精品国产电影| 99国产精品免费福利视频| 一本色道久久久久久精品综合| 99热全是精品| 永久免费av网站大全| 久久青草综合色| 国产成人精品一,二区| 一区在线观看完整版| 日韩亚洲欧美综合| 老司机影院毛片| 搡老乐熟女国产| 又爽又黄a免费视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久久色成人| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产视频首页在线观看| 观看免费一级毛片| 精品国产三级普通话版| 妹子高潮喷水视频| 亚洲精品自拍成人| 国产精品久久久久成人av| 久久精品国产亚洲av涩爱| 日韩三级伦理在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 妹子高潮喷水视频| 国产精品一区二区性色av| 久久6这里有精品| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 一级二级三级毛片免费看| 嫩草影院入口| 亚洲精品第二区| 人人妻人人看人人澡| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日韩强制内射视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 免费人成在线观看视频色| 身体一侧抽搐| 久久久久视频综合| 成年人午夜在线观看视频| 成人综合一区亚洲| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲av福利一区| 久久久久精品性色| 成人一区二区视频在线观看| 九九在线视频观看精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 丰满少妇做爰视频| 精品视频人人做人人爽| 日本与韩国留学比较| 超碰av人人做人人爽久久| 国产成人a区在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产黄色视频一区二区在线观看| 老司机影院毛片| 观看美女的网站| 久热这里只有精品99| 亚洲综合色惰| 国产精品伦人一区二区| 久久久亚洲精品成人影院| 成人无遮挡网站| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产真实伦视频高清在线观看| 日本欧美视频一区| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲精品日韩av片在线观看| 一级毛片我不卡| 国产又色又爽无遮挡免| 久久99精品国语久久久| 能在线免费看毛片的网站| av视频免费观看在线观看| 美女主播在线视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲欧美成人精品一区二区| 精品人妻视频免费看| 国产免费福利视频在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 国产一级毛片在线| 永久网站在线| 一级二级三级毛片免费看| 国产久久久一区二区三区| 日本免费在线观看一区| 国产亚洲欧美精品永久| 99久久精品国产国产毛片| 国产日韩欧美在线精品| 女人久久www免费人成看片| 日日撸夜夜添| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产欧美日韩精品一区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 免费大片18禁| 特大巨黑吊av在线直播| 最近中文字幕2019免费版| xxx大片免费视频| 国产中年淑女户外野战色| 尾随美女入室| 一区二区av电影网| 一本一本综合久久| 久久久久久久久久久丰满| 久久久久久久久久久免费av| 在线观看一区二区三区| 天天躁日日操中文字幕| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜福利在线在线| a 毛片基地| 久久人妻熟女aⅴ| av国产精品久久久久影院| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲av二区三区四区| 国产色爽女视频免费观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 夫妻午夜视频| 久久久久性生活片| 黄色一级大片看看| 亚洲欧美精品专区久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲精品色激情综合| 国产精品一二三区在线看| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品久久久久久av不卡| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 天美传媒精品一区二区| 人妻一区二区av| 久久影院123| 人人妻人人看人人澡| 多毛熟女@视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 老女人水多毛片| 少妇人妻久久综合中文| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲天堂av无毛| 国产69精品久久久久777片| 国产黄色免费在线视频| 欧美精品亚洲一区二区| 男的添女的下面高潮视频| 精品一区二区三区视频在线| 我的老师免费观看完整版| 大香蕉97超碰在线| 欧美三级亚洲精品| 午夜老司机福利剧场| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲成人手机| 女人久久www免费人成看片| 免费观看无遮挡的男女| 久久久久国产网址| 日本av手机在线免费观看| 亚洲性久久影院| 久久综合国产亚洲精品| 国产毛片在线视频| 免费大片18禁| 久久久久久久久久成人| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久精品国产亚洲av天美| 日韩一区二区三区影片| 成年女人在线观看亚洲视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 美女福利国产在线 | 在线观看人妻少妇| 国产亚洲5aaaaa淫片| av卡一久久| 免费少妇av软件| 欧美日韩在线观看h| 99热6这里只有精品| 久久久午夜欧美精品| 99热6这里只有精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 国模一区二区三区四区视频| 色综合色国产| 国产精品久久久久久av不卡| 波野结衣二区三区在线| videossex国产| 黄色配什么色好看| 在线观看免费高清a一片| 国产 一区 欧美 日韩| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲伊人久久精品综合| 国产成人精品婷婷| 亚洲精品456在线播放app| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 美女福利国产在线 | 国产在线男女| 一区二区三区精品91| 一级毛片我不卡| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲国产欧美在线一区| 高清毛片免费看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 免费av不卡在线播放| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产欧美亚洲国产| 六月丁香七月| 九九在线视频观看精品| 一本一本综合久久| 国产永久视频网站| 青春草国产在线视频| 国产一区二区三区av在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲国产精品国产精品| 97超视频在线观看视频| 国产成人a区在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 欧美区成人在线视频| 成人无遮挡网站| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲精品乱久久久久久| av在线播放精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久午夜福利片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久久久伊人网av| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲欧美清纯卡通| av天堂中文字幕网| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产午夜精品一二区理论片| 日日撸夜夜添| 一级黄片播放器| 日韩国内少妇激情av| 尾随美女入室| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精品视频女| 久久国内精品自在自线图片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美性感艳星| 国产在线男女| 色哟哟·www| 又爽又黄a免费视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 精品视频人人做人人爽| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产精品久久久久久精品古装| 搡女人真爽免费视频火全软件| 观看免费一级毛片| 国国产精品蜜臀av免费| av视频免费观看在线观看| 一级a做视频免费观看| 久久青草综合色| 精品一区二区三区视频在线| 大香蕉久久网| 日本wwww免费看| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 熟妇人妻不卡中文字幕| 日本av免费视频播放| 乱系列少妇在线播放| a级毛色黄片| 亚洲av成人精品一二三区| 2021少妇久久久久久久久久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲av综合色区一区| 97超碰精品成人国产| 美女国产视频在线观看| 亚洲av综合色区一区| 国产黄频视频在线观看| 久久人人爽人人片av| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久精品性色| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 一本一本综合久久| av.在线天堂| 热99国产精品久久久久久7| 男女啪啪激烈高潮av片| 免费黄色在线免费观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产免费一区二区三区四区乱码| 午夜老司机福利剧场| 十八禁网站网址无遮挡 | freevideosex欧美| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 免费观看在线日韩| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产精品无大码| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日韩不卡一区二区三区视频在线| 嘟嘟电影网在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久久久性生活片| av播播在线观看一区| 最近的中文字幕免费完整| 永久免费av网站大全| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 男女国产视频网站| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 成人国产av品久久久| 高清av免费在线| 国产精品国产三级国产专区5o| 中文字幕制服av| 久久久久久久久久人人人人人人| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲人成网站在线观看播放| 夫妻午夜视频| 赤兔流量卡办理| 大码成人一级视频| av在线老鸭窝| 搡女人真爽免费视频火全软件| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲真实伦在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 午夜日本视频在线| 97精品久久久久久久久久精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 在线免费十八禁| 蜜臀久久99精品久久宅男| 日日啪夜夜爽| 亚洲国产精品一区三区| h日本视频在线播放| 国产精品嫩草影院av在线观看| 深夜a级毛片| 国产大屁股一区二区在线视频| av一本久久久久| 三级经典国产精品| 在线免费观看不下载黄p国产| 草草在线视频免费看| 亚洲人成网站在线观看播放| 一区二区三区免费毛片| 在线看a的网站| 特大巨黑吊av在线直播| 一级a做视频免费观看| 成人免费观看视频高清| 丝袜脚勾引网站| 99热国产这里只有精品6| 中文字幕久久专区| 高清不卡的av网站| 国产免费一级a男人的天堂| 中文字幕亚洲精品专区| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产精品国产三级国产专区5o| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产伦在线观看视频一区| 国产亚洲精品久久久com| 欧美精品一区二区免费开放| 国产免费又黄又爽又色| 欧美性感艳星| 久久久久久久久久久免费av| 午夜福利影视在线免费观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 一级毛片我不卡| 久久久久久久久久人人人人人人| 国模一区二区三区四区视频| 久久国产精品大桥未久av | 偷拍熟女少妇极品色| 看十八女毛片水多多多| 国产av国产精品国产| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 日韩av免费高清视频| 丝袜喷水一区| 777米奇影视久久| 午夜视频国产福利| 亚洲av成人精品一二三区| 香蕉精品网在线| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲成人一二三区av| 一区二区av电影网| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲国产欧美在线一区| 午夜免费观看性视频| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 好男人视频免费观看在线| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久久性生活片| 永久网站在线| a 毛片基地| 精品人妻视频免费看| 亚洲精品一区蜜桃| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产免费又黄又爽又色| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 国产成人精品婷婷| 欧美日本视频| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲精品日本国产第一区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 五月天丁香电影| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲人成网站在线播| 久久人人爽人人爽人人片va|