紫白膏對(duì)大鼠創(chuàng)傷模型創(chuàng)面修復(fù)的影響

蔡而瑋，趙 誠(chéng)，吳燕燕，許圳鵬，林 峰

（福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院，福建 福州 350004）

伴隨著臨床疾病的多樣性，創(chuàng)面的修復(fù)問題逐漸增多，同時(shí)也增加家庭和社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［1］。紫白膏是福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院院內(nèi)制劑，能有效減輕肛腸疾病術(shù)后滲出、水腫等癥狀，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。前期臨床研究也證實(shí)紫白膏可減少滲液、出血，緩解術(shù)后水腫，促進(jìn)創(chuàng)面愈合［2-3］。本研究將通過大鼠創(chuàng)傷模型實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步探討紫白膏對(duì)創(chuàng)面修復(fù)的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠120只，8～10周齡，體質(zhì)量270～310 g，購(gòu)自福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（閩）2012-0001。動(dòng)物自由飲食，飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房?jī)?nèi)。適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 紫白膏（福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院制劑科提供）；紅霉素軟膏（馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司）；凡士林（振德醫(yī)療用品股份有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 金黃色葡萄球菌（上海魯微科技有限公司，批號(hào)：ATCC6538）；蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒（碧云天生物技術(shù)有限公司，編號(hào)：C0105）

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 CX31生物倒置顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；石蠟超薄切片機(jī)（德國(guó)Leica公司）；石蠟包埋機(jī)（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；EP管、槍頭（美國(guó)Axygen公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 創(chuàng)面模型的制作 通過常規(guī)手術(shù)在大鼠背部脊柱兩側(cè)對(duì)稱部位做皮膚全層切口，深達(dá)筋膜，制成直徑約2.5～3.0 cm大小的創(chuàng)面。創(chuàng)面內(nèi)點(diǎn)狀種植金黃色葡萄球菌，總共約0.6 mL，連續(xù)種植2 d，至傷口出現(xiàn)膿性分泌物為止，并在局部取材做病理組織學(xué)檢驗(yàn)證實(shí)感染形成。

2.2 分組處理 創(chuàng)面模型制作成功后將120只SD大鼠稱重后按照隨機(jī)區(qū)組法隨機(jī)分為凡士林對(duì)照組、紅霉素軟膏組、紫白膏組各40只。根據(jù)干預(yù)第3、7、14、21天 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組再分為 4個(gè)亞組，每亞組各10只。造模成功后第3天用藥前3組均正常取材，取材后3組以消毒棉簽將紫白膏、紅霉素、凡士林藥物均勻涂抹于對(duì)應(yīng)大鼠的創(chuàng)面上，厚約1 mm，每日1次。清潔包扎創(chuàng)面，分籠飼養(yǎng)，每日換藥至創(chuàng)面完全愈合為止。

2.3 觀察指標(biāo)及方法 肉眼觀察3組大鼠創(chuàng)面色澤和結(jié)痂情況，對(duì)3組創(chuàng)面愈合情況及愈合時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。應(yīng)用HE染色觀察不同時(shí)間點(diǎn)大鼠創(chuàng)面肉芽生長(zhǎng)情況。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（）表示，采用單因素方差分析。

3 結(jié) 果

3.1 不同時(shí)間點(diǎn)3組大鼠創(chuàng)面愈合情況 第3天換藥時(shí)觀察創(chuàng)面，創(chuàng)面少許滲血，較多組織滲出，創(chuàng)緣組織紅腫，部分痂皮形成。第7天開始3組大鼠創(chuàng)面均見痂皮組織，創(chuàng)緣水腫減輕，但紫白膏組增生肉芽組織明顯并向心性爬行生長(zhǎng)。第14天時(shí)，3組創(chuàng)緣均有上皮組織，紫白膏組與紅霉素軟膏組及凡士林對(duì)照組比較創(chuàng)面明顯縮小。至第 21天，3組創(chuàng)面均明顯縮小，但紫白膏組大鼠創(chuàng)面痂皮基本脫落，大鼠創(chuàng)面基本修復(fù)；紅霉素軟膏組及凡士林對(duì)照組可見部分痂皮，創(chuàng)面未完全修復(fù)。見圖1～4。3.2 不同時(shí)間點(diǎn)3組大鼠創(chuàng)面組織HE染色 第3天，3組大鼠創(chuàng)面組織鏡下可見不同程度的表面壞死組織，炎性細(xì)胞增生。第7天紫白膏組大鼠創(chuàng)面組織表面壞死組織及炎性細(xì)胞較其他兩組減少。術(shù)后第14天，紫白膏組肉芽組織較其他兩組明顯增生，可見少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，3組均有成纖維細(xì)胞增生。術(shù)后第21天，再生上皮基本覆蓋創(chuàng)面，纖維組織增生并炎性細(xì)胞明顯減少。見圖5～8。

圖1 換藥第3天3組大鼠創(chuàng)面愈合情況

圖2 換藥第7天3組大鼠創(chuàng)面愈合情況

圖3 換藥第14天3組大鼠創(chuàng)面愈合情況

圖4 換藥第21天3組大鼠創(chuàng)面愈合情況

圖5 術(shù)后第3天大鼠創(chuàng)面組織HE染色圖（×100）

圖6 術(shù)后第7天大鼠創(chuàng)面組織HE染色圖（×100）

圖7 術(shù)后第14天大鼠創(chuàng)面組織HE染色圖（×100）

圖8 術(shù)后第21天大鼠創(chuàng)面組織HE染色圖（×100）

3.3 3組大鼠創(chuàng)面愈合時(shí)間比較 見表1。

表1 3組大鼠創(chuàng)面愈合時(shí)間比較（）d

表1 3組大鼠創(chuàng)面愈合時(shí)間比較（）d

注：與紫白膏組比較，1）P＜0.05。

組別凡士林對(duì)照組紅霉素軟膏組紫白膏組n 40 40 40愈合時(shí)間23.50±1.591）23.05±1.661）21.02±1.23

4 討 論

中醫(yī)藥在促進(jìn)創(chuàng)面愈合方面具有良好療效，臨床上采用辨證論治的原則，綜合應(yīng)用多種療法，不同的治則對(duì)應(yīng)不同的“證”。根據(jù)中醫(yī)辨證論治，可分為外治法和內(nèi)治法。外治法是利用中藥以散、膏、熏、敷、貼等多種不同形式作用于病變局部，藥物借助腧穴進(jìn)入皮毛，吸收后再經(jīng)過經(jīng)絡(luò)的作用，使藥物有效成分直達(dá)病灶，以達(dá)到祛除毒邪、消腫止痛、去腐生肌之功效；內(nèi)治法的主要?jiǎng)┬褪菧珓?，常以清熱解毒、涼血止血等藥物為主。不管外治或?nèi)治，最終目的均為充分發(fā)揮中藥的功效，以達(dá)到積極防治并發(fā)癥的作用。利用中藥的清熱解毒作用，局部外用有殺菌、抗炎作用，內(nèi)服又能清除血液中有害物質(zhì)，可通絡(luò)化瘀，修復(fù)血管內(nèi)膜，改善血流狀態(tài)。清熱解毒中藥還能降低創(chuàng)面局部溫度，利于減少創(chuàng)面局部滲出及肉芽水腫，加速肉芽生成，促使創(chuàng)面愈合，與中醫(yī)“化瘀利于生肌”的治療思想一致［4］。

紫白膏是我院肛腸科臨床常用外用膏劑，主要用于治療肛門病術(shù)后，應(yīng)用歷史悠久，臨床療效顯著。紫白膏主要由紫草、大黃、白及、煅石膏等組成，其中是以紫草、大黃為君，煅石膏、白及為臣。紫草取其涼血、活血、清熱解毒之功效，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)紫草具有抗菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等功效［5］；大黃具有清熱瀉火、活血祛瘀之功，藥理研究表明大黃有瀉下、止血、抗病原微生物、抗腫瘤、抗氧化等作用［6］，兩味共為君藥以增強(qiáng)清熱解毒、活血祛瘀之功。石膏有瀉火清熱、斂瘡生肌之功［7］；白及有收斂止血、消腫生肌之功，二味同用，可增加君藥消腫生肌之功，促進(jìn)傷口的愈合。

創(chuàng)面愈合可以分為止血期、炎癥期、增殖期和組織重塑期，是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程［8］。創(chuàng)面愈合又是一個(gè)復(fù)雜、連續(xù)的生物化學(xué)和細(xì)胞活動(dòng)過程［9］。多種細(xì)胞因子參與創(chuàng)口愈合的過程，并彼此之間相互作用，使得創(chuàng)面的愈合順利進(jìn)行［10］。同時(shí)創(chuàng)面愈合過程中，重要的條件是毛細(xì)血管新生［11］。創(chuàng)傷局部的肉芽增生及新生的血管，能夠保證組織修復(fù)過程所需要的營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)促進(jìn)壞死物質(zhì)的運(yùn)輸及吸收［12］。近年來，大量中藥制劑應(yīng)用于臨床治療各種急慢性創(chuàng)面，創(chuàng)面的愈合速度明顯加速，效果明確［13］。研究發(fā)現(xiàn)，外用中藥能促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織相關(guān)生長(zhǎng)因子的釋放，同時(shí)創(chuàng)面氧自由基的量和活性也進(jìn)一步降低，機(jī)體抗感染能力得到提高［14］。課題組成員在前期的臨床研究也進(jìn)一步說明紫白膏能有效控制術(shù)后創(chuàng)面炎癥反應(yīng)，促進(jìn)創(chuàng)面的愈合［15］。本課題研究基于中醫(yī)“化瘀利于生肌”的治療思想及紫白膏的清熱解毒、祛瘀生肌之功效，進(jìn)一步將紫白膏應(yīng)用于大鼠創(chuàng)面模型。研究發(fā)現(xiàn)在創(chuàng)面修復(fù)的不同時(shí)期，紫白膏相對(duì)于紅霉素軟膏和凡士林，表現(xiàn)出對(duì)創(chuàng)面肉芽組織的炎性細(xì)胞調(diào)節(jié)較好，明顯加速創(chuàng)面肉芽組織增生，減低炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，加快創(chuàng)面愈合的速度，提高創(chuàng)面愈合的質(zhì)量。

綜上所述，本課題探討紫白膏在大鼠創(chuàng)面愈合過程中影響，但是其干預(yù)的具體機(jī)制未明，而在創(chuàng)面愈合過程中存在著多種細(xì)胞因子、基因等的不斷作用，是下一步研究重點(diǎn)。