龍眼葉乙酸乙酯提取物抗氧化活性研究

鄢宏俊，覃 茜，韋 瑋，陳俊平，李培源

(廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧 530001)

龍眼俗名“桂圓”，別名益智、羊眼、龍目等，它作為我國長期栽培植物，多種植于廣西、廣東和福建，不僅有較高的經(jīng)濟(jì)效益，還具有良好的藥用價(jià)值[1]。龍眼多以葉入藥，性平味微苦，有清熱解毒，解表利濕之效，內(nèi)用可治感冒、腸炎等疾病，外用治陰囊濕疹[2]。黃酮類化合物多存在于自然植物的根、莖、葉等中，是重要的一類天然有機(jī)化合物[3]。研究表明，黃酮類化合物具有抗炎抑菌,抗氧化 抗輻射,抗癌,抗腫瘤等藥理作用，其中抗氧化成為近年研究的主要內(nèi)容之一[4]。黃酮類化合物多溶于強(qiáng)極性溶劑中，例如丙酮、乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。在往年龍眼葉的研究中，以確定丙酮或乙醇為溶劑提取的龍眼葉總黃酮對自由基均具有較強(qiáng)的清除能力[5-6]。但關(guān)于乙酸乙酯為溶劑的龍眼葉提取物僅停留于降血糖實(shí)驗(yàn)，并未對乙酸乙酯龍眼葉提取物進(jìn)行自由基清除能力評定[7-8]。因此，本實(shí)驗(yàn)通過以乙酸乙酯為溶劑提取龍眼葉中的總黃酮類化合物，考察龍眼葉乙酸乙酯提取物的抗氧化活性和對自由基的清除能力，從而為今后龍眼葉的開發(fā)與應(yīng)用提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與儀器

UV1901型紫外可見分光光度計(jì)(北京普析電子科技有限公司)。

2 方法

2.1 龍眼葉乙酸乙酯提取物制備

稱取20 g龍眼葉粉末，加入200 mL乙酸乙酯(95%)，冷浸72 h。重復(fù)上述操作3次，合并提取液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得到龍眼葉乙酸乙酯提取物。

2.2 二苯基苦味肼基自由基(DPPH)體系[9]

取不同濃度龍眼葉乙酸乙酯提取物提取物溶液(0.2、0.5、0.8、1.2、1.5、1.8和2.0 mg/mL)加入8 mL DPPH(0.004%)溶液中。在最大波長處(517 nm)測吸光度，直到平衡為止。清除率計(jì)算公式如下：S % = (1-A樣品)/ A空白 × 100%。其中，A空白為未加藥液的DPPH溶液的吸光度，A樣品為加入藥液的DPPH溶液的吸光度。

2.3 還原能力測定[10]

在錐形瓶中加入0.2 mL龍眼葉乙酸乙酯提取物提取物溶液，2.5 mL pH值=7.4的PBS溶液以及2.5 mL濃度為1% 的KFe(CN)4溶液，混合均勻后放于50℃水浴20 min，加入2.5 mL濃度為10%的三氯乙酸溶液，離心10 min。取上清液和蒸餾水各2.5 mL，加入0.5 mL濃度為1%的FeCl3，將溶液混合后在700 nm處測定吸光度。

3 結(jié)果

3.1 龍眼葉乙酸乙酯提取物對DPPH自由基的清除能力

3.1.1 不同濃度提取物對DPPH自由基的清除能力

圖1考察了龍眼葉乙酸乙酯提取物在不同藥液溶度下對DPPH自由基清除能力的影響。如圖1所示，龍眼葉乙酸乙酯提取物藥液溶度為0.2 mg/mL，所測得的DPPH自由基抑制率為13.66%，當(dāng)藥液濃度逐漸提高為1.8 mg/mL，其對DPPH自由基抑制率增加至1.92倍，表明龍眼葉乙酸乙酯提取物濃度在0.2～1.8 mg/mL范圍內(nèi)，對DPPH自由基清除率隨藥液濃度的提高而增大緩慢。當(dāng)藥液濃度加至為2.0 mg/mL，其對DPPH自由基抑制率分別增加至1.8 mg/mL的1.76倍、0.2 mg/mL的27.78倍，表明龍眼葉乙酸乙酯提取物濃度在1.8～2.0 mg/mL范圍內(nèi)，對DPPH自由基清除率迅速增大，其清除率最高可達(dá)46.14%。

圖1 不同濃度龍眼葉乙酸乙酯提取物對DPPH自由基的 清除能力

3.1.2 不同時間提取物對DPPH自由基的清除能力

圖2考察了同濃度龍眼葉乙酸乙酯提取物在不同提取時間下對DPPH自由基清除能力的影響。如圖2所示，藥液濃度為1.5 mg/mL的龍眼葉乙酸乙酯提取物，在10 min時，測得DPPH自由基清除率為19.67%；在20 min時，測得DPPH自由基清除率為23.01%，相對10 min的清除率增加至1.17倍；在30min時，測得DPPH自由基清除率為24.13%，相對20 min與10 min的清除率分別增加至1.05倍與1.22倍。表明同濃度的龍眼葉乙酸乙酯提取物，在提取時間10～30 min條件下，DPPH自由基清除率隨提取時間的增長而增高緩慢。

圖2 不同時間龍眼葉乙酸乙酯提取物對DPPH自由基的 清除能力(濃度=1.5 mg/mL)

3.2 龍眼葉乙酸乙酯提取物的還原能力

圖3考察了龍眼葉乙酸乙酯提取物在不同藥液溶度下對羥基自由基還原能力的影響。如圖3所示，隨著龍眼葉乙酸乙酯提取物藥液溶度從0.2 mg/mL增加至1.0 mg/mL，吸光度處于迅速上升趨勢；藥液濃度從1.0 mg/mL增加至1.5 mg/mL時，吸光度增加緩慢；藥液濃度達(dá)到2.0 mg/mL時，測得最大吸光度為0.19272，分別為1.0 mg/mL的13.34倍和0.2 mg/mL的3.23倍。吸光度越大，還原能力越強(qiáng)，表明吸光度隨龍眼葉乙酸乙酯提取物藥液濃度的增大而增大，其藥液濃度與還原能力兩者間具有一定量效關(guān)聯(lián)，且對羥自由基具有較強(qiáng)的還原能力。

圖3 龍眼葉乙酸乙酯提取物對羥基自由基的還原能力

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以乙酸乙酯為溶劑，通過冷侵提取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到龍眼葉乙酸乙酯提取物，并采采用苯基苦味肼基自由基(DPPH)法與還原能力測定法評測其對自由基的清除能力。當(dāng)藥液濃度較低時，其對DPPH自由基具有一定的清除能力；隨藥液濃度逐漸增大，其對DPPH自由基也逐漸表現(xiàn)出更強(qiáng)的清除能力，并且與提取時間無關(guān)。在還原能力實(shí)驗(yàn)中，藥液濃度與還原能力兩者間具有一定量效關(guān)聯(lián)，且對羥自由基具有較強(qiáng)的還原能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，龍眼葉乙酸乙酯提取物不僅具有一定的抗氧化活性和優(yōu)異的自由基清除能力，其還原能力與乙酸乙酯提取濃度還存在一定量效關(guān)聯(lián)。