肺癌診斷中血漿中多基因聯(lián)合甲基化檢測(cè)的價(jià)值

黨紅　楊金宇　郭炫

【摘 要】 目的：探討肺癌診斷中血漿中多基因聯(lián)合甲基化檢測(cè)的價(jià)值。方法：選取80例肺癌患者的資料作為研究組，選取80例健康體檢者為對(duì)照組，比較兩組多基因檢測(cè)及甲基化狀態(tài)。結(jié)果：肺癌組織的CDH13、RASSF1A、RUN3基因甲基化率高于癌旁組織甲基化率（P<0.05）。研究組患者的CpG島甲基化表型陽(yáng)性率高于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論：血漿中多基因聯(lián)合甲基化檢測(cè)在肺癌早期診斷中有重要意義。

【關(guān)鍵詞】 多基因;甲基化;肺癌;聯(lián)合檢測(cè);臨床價(jià)值

肺癌是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤，有著較高發(fā)病率及死亡率，肺癌患者來(lái)院就診時(shí)，大多是中晚期;若取患者的肺癌組織標(biāo)本，會(huì)對(duì)患者的身體造成一定的影響[1]。因此，臨床急需一種有效且無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)手段，提高對(duì)于該疾病的診斷率。有臨床研究表明：肺癌發(fā)生與抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化相關(guān)。因此，本文為了分析血漿中多基因聯(lián)合甲基化檢測(cè)在肺癌診斷中的價(jià)值，選取本院收治的80例肺癌患者進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

80例肺癌患者來(lái)源于本院2015年3月至2018年3月收治，男57例，女23例;年齡40～86歲，平均年齡（58.42±2.45）歲;根據(jù)WHO肺癌組織學(xué)分類(lèi)，鱗癌45例，腺癌20例，小細(xì)胞癌15例。選取同期來(lái)院體檢的80例健康者為對(duì)照組，男56例，女24例;年齡40～84歲，平均年齡（59.23±1.56）歲。兩組性別、年齡無(wú)顯著差異（P>0.05），可比較。

1.2 方法

1）采集血液標(biāo)本。兩組受試者均于治療前清晨空腹抽取2mL靜脈血，EDTA抗凝，按照500r/min離心血清10min，獲得無(wú)血細(xì)胞成分的血漿，置于-80℃溫度下待測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)來(lái)操作。2）血漿DNA的提取。采用QIAamp DNA Mini Kit提取，嚴(yán)格按照說(shuō)明操作。采用Epi Tect Whole Bisulfitome Kit 擴(kuò)增試劑盒對(duì)修飾過(guò)后的血漿DNA進(jìn)行基因組擴(kuò)增。3）甲基化特異性PCR及電泳檢測(cè)。采用EZ DNA MethylationGold Kit對(duì)提取的血漿DNA進(jìn)行亞硫酸氫鈉修飾，將DNA序列中未甲基化的胞嘧啶（C）轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ║），以20μL AE緩沖液洗脫DNA，置于-20℃保存。在重亞硫酸鹽測(cè)序下設(shè)計(jì)外側(cè)引物，在甲基化特異性PCR條件下設(shè)計(jì)甲基化（M）與非甲基化（U）引物。4）判斷甲基化結(jié)果。甲基化：第一輪PCR出現(xiàn)條帶，第二輪PCR甲基化引物出現(xiàn)條帶，非甲基化引物未出現(xiàn)條帶，甲基化引物、非甲基化引物PCR均出現(xiàn)條帶，可判斷甲基化。未甲基化：甲基化引物未出現(xiàn)條帶，非甲基化引物出現(xiàn)條帶。

2 結(jié)果

2.1 引物序列、產(chǎn)物大小及退火溫度

以CDH13、RASSF1A、RUN3基因?yàn)槔湟镄蛄?、產(chǎn)物大小及退火溫度詳細(xì)見(jiàn)下表1所示。

2.2 肺癌及癌旁組織中的基因甲基化情況

肺癌組織的CDH13、RASSF1A、RUN3基因甲基化率明顯高于癌旁組織甲基化率（P<0.05）。如下表2所示。

2.3 肺癌與正常健康體檢者的CpG島甲基化表型比較

肺癌患者的CpG島甲基化表型陽(yáng)性率高于正常健康體檢者（P<0.05）。如下表3所示。

3 討論

肺癌的發(fā)生及發(fā)展是由多種因素促進(jìn)的，通過(guò)原癌基因高表達(dá)、抑癌基因的低表達(dá)兩大途徑可產(chǎn)生癌癥。臨床多種癌癥疾病中可檢測(cè)到CDH13、RUNX3、DLEC1、RASSF1A、SEPT9基因高甲基化，但以上基因均未有在同一種癌癥標(biāo)本中檢測(cè)。經(jīng)聯(lián)合檢測(cè)多種基因可提高標(biāo)志物的特異度及靈敏度[2]。在本次研究中，通過(guò)檢測(cè)CDH13、RASSF1A、RUN3基因聯(lián)合甲基化，可提高肺癌診斷價(jià)值。CDH13是一種編碼黏附分子，在細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移中有著重要作用。當(dāng)CDH13表達(dá)下調(diào)時(shí)，可降低癌細(xì)胞粘附力，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。RASSF1A是臨床疾病較常見(jiàn)的抑癌基因，經(jīng)阻斷細(xì)胞周期蛋白D1的積累，使得蛋白激酶失活，組織細(xì)胞分裂周期的進(jìn)展，從而調(diào)控細(xì)胞周期。RUN3蛋白是TGF-β信號(hào)通路的重要參與者，其水平下調(diào)可影響該細(xì)胞信號(hào)通路的失調(diào)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)展[3]。

綜上所述，血漿中多基因檢測(cè)聯(lián)合甲基化檢測(cè)可提高肺癌診斷率。

參考文獻(xiàn)

[1] 駱江龍，李鯤，馮旭.p16、DAPK和APC基因甲基化在肺癌早期診斷中的價(jià)值[J].微創(chuàng)醫(yī)學(xué)，2018，（01）：12-16.

[2] 朱宇敏，李堅(jiān)，俞立超，等.血漿APC和DCC基因啟動(dòng)子甲基化測(cè)定在肺癌早期診斷中的應(yīng)用[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2015，25（01）：62-67.

[3] 解楨，李天月，劉洪建，等.聯(lián)合RASSF1A與FHIT基因甲基化檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌診斷中的應(yīng)用[J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，40（04）：249-251.