抗菌型可溶性止血紗布的制備及性能研究

吳帥 劉哲 鄺榮康 蒲祖楊 劉錦明

摘 要：通過(guò)化學(xué)方法制備出抗菌型可溶性止血紗布，分別測(cè)定其羧甲基取代度、載銀量和抑菌性并進(jìn)行對(duì)比研究。結(jié)果表明：反應(yīng)過(guò)程的酸堿比越低其取羧甲基代度越高溶脹性越好，浸漬液硝酸銀濃度越高其載銀量越高，抗菌性越好，是較為理想的新型止血敷料。

關(guān)鍵詞：可溶性;抗菌;紗布

據(jù)統(tǒng)計(jì)，戰(zhàn)場(chǎng)上導(dǎo)致死亡的主要因素是失血過(guò)多，約占總數(shù)的50%左右，而在和平時(shí)期，因外傷死亡的人中39%死于失血過(guò)多，未得到有效控制的出血已經(jīng)是創(chuàng)傷死亡的第二大主導(dǎo)因素。即使出血可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)逐漸得到控制，過(guò)多的失血也通常會(huì)造成傷者創(chuàng)面感染、體溫過(guò)低、凝血功能障礙或多重器官衰竭等嚴(yán)重后果?？扇苄灾寡啿紝?duì)水和鹽水有較強(qiáng)的親和力，遇到血液時(shí)能快速吸收血液中的水分而溶解，形成的膠體堵塞毛細(xì)血管末端，并促進(jìn)血液濃縮，粘度增大，減慢血流，從而達(dá)到止血目的。[1]

現(xiàn)有止血材料一般很難兼有抗菌功能，大部分止血材料為了具有抗菌功能，一般都會(huì)加入抗菌藥物，但這樣存在抗菌藥物耐受性問(wèn)題。銀及其化合物以其優(yōu)良的抗菌和抑菌性能已經(jīng)在醫(yī)學(xué)、衛(wèi)生等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。[2]載銀抗菌醫(yī)用敷料結(jié)合銀的抗菌性和醫(yī)用敷料的優(yōu)良性能，成為醫(yī)用敷料發(fā)展的一個(gè)重要方向。[3-4]本研究通過(guò)對(duì)醫(yī)用脫脂棉紗布進(jìn)行改性并負(fù)載銀離子從而達(dá)到既可以對(duì)出血?jiǎng)?chuàng)面進(jìn)行止血又可以預(yù)防創(chuàng)面感染并且無(wú)藥物耐受性問(wèn)題。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

試劑：醫(yī)用脫脂棉紗布，無(wú)水乙醇，氯乙酸，鹽酸，氫氧化鈉，硝酸銀。

菌種：EC（大腸桿菌，ATCC25922），SA（金黃色葡萄球菌，ATCC6538），PSA（白色念球菌，ATCC10231），廣東環(huán)凱微生物有限公司。

儀器：SIEMENS冰箱;電熱鼓風(fēng)干燥箱;電熱恒溫培養(yǎng)箱;新穎立式恒溫振蕩器;立式壓力蒸汽滅菌器;單人凈化工作臺(tái)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 可溶性止血紗布制備

①分別配制25wt%的NaOH溶液和95%（V/V）的乙醇溶液備用;

②在常溫常壓環(huán)境下用無(wú)水乙醇對(duì)醫(yī)用脫脂棉紗布預(yù)處理，將3g醫(yī)用紗布加入50mL無(wú)水乙醇中預(yù)處理1小時(shí);

③預(yù)處理結(jié)束后，將醫(yī)用脫脂棉紗布浸泡100ml 95%乙醇水溶液和25wt% NaOH混合溶液中，室溫下反應(yīng)30min;

④向步驟2中的反應(yīng)體系中添加7.38g的氯乙酸（溶于100mL的乙醇中），在30℃，反應(yīng)30min后，升溫至70℃，反應(yīng)2.5h;

⑤然后用乙酸乙醇的混合溶液將pH調(diào)節(jié)至7，然后用80%的乙醇水溶液洗滌2～3次，通過(guò)冷凍干燥，即得可溶性止血紗布。

1.2.2 抗菌型可溶性止血紗布制備

①制備不同濃度的硝酸銀溶液：稱取0.1g硝酸銀加入100ml純化水中，配制成1000ppm的硝酸銀溶液，再用無(wú)水乙醇稀釋，配制成200ppm、100ppm、50ppm和25ppm的硝酸銀溶液;

②將制得的200ppm、100ppm、50ppm和25ppm的硝酸銀溶液用于抗菌處理，記為樣品1、2、3和4。各稱取一定量的可溶性止血紗布，浸泡在50ml上述不同濃度的硝酸銀溶液中，于50℃，120rad/min恒溫振蕩器中振蕩2h。然后取出可溶性止血紗布放入60℃、80℃和100℃烘箱，烘干1h后取出紗布，備用。

1.2.3 取代度測(cè)試

稱取約1.5g抗菌型可溶性止血紗布樣品，精確至0.0002g，置于玻璃砂坩堝中，用預(yù)先加熱至50℃～70℃的乙醇溶液洗滌多次（每次加滿玻璃砂坩堝），直到加1滴锘酸鉀溶液和1滴硝酸銀溶液的慮液呈磚紅色，為洗滌完成，反之應(yīng)繼續(xù)洗滌，一般洗滌五次。最后一次用無(wú)水乙醇洗滌，將洗滌后的試樣移入扁型稱量瓶，于120℃±2℃干燥2h（1h左右時(shí)，將稱量瓶?jī)?nèi)試樣輕輕敲松）。加蓋移入干燥器內(nèi)，冷卻至室溫。稱取約1g試樣，精確至0.2mg，置于蒸發(fā)皿中，在電爐上炭化至不冒煙，放入300℃高溫爐，升溫至700℃±25℃，保溫15min，關(guān)閉電源，冷卻至200℃以下，移入250ml燒杯內(nèi)，加100ml水和50ml±0.05ml硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，將燒杯置于電爐上加熱，緩緩沸騰10min，加2～3滴甲基紅指示液，冷卻，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至紅色恰褪。

1.2.4 載銀量測(cè)定

1.2.4.1 銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

①稱取10mg硝酸銀溶解在100ml純化水中，制得100mg/L的硝酸銀溶液，記為溶液A;

②通過(guò)稀釋制備不同梯度（10mg/L、8mg/L、6mg/L、4mg/L、2mg/L、1mg/L）的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.4.2 試驗(yàn)液的制備

精確稱取不同濃度的載銀可溶性止血紗布0.2g于25ml燒杯中，加入混合酸消化液（硝酸：高氯酸=4：1）10ml，封口，置于電熱板上加熱消化，直至無(wú)色或淡黃色為止，加2ml去離子，加熱以除去多余的硝酸，待燒杯中的液體接近1～2ml時(shí)，取下冷卻，用去離子水洗并轉(zhuǎn)移于50ml容量瓶中，加2ml 2mol/L硝酸，用去離子水定容至刻度。再按上述操作做空白試驗(yàn)溶液。

1.2.4.3 載銀含量測(cè)試

調(diào)節(jié)原子吸收儀至銀測(cè)定狀態(tài)。同時(shí)測(cè)定銀標(biāo)準(zhǔn)液及樣品消化液（火焰法）。

1.2.5 抗菌率測(cè)試

按照GB/T 20944.3-2008[5]進(jìn)行抑菌率實(shí)驗(yàn)，將可溶性止血紗布以及不同濃度的抗菌型可溶性止血紗布分別裁剪成1cm×1cm大小，稱取磷酸氫二鈉2.83g、磷酸二氫鉀1.36g，加入燒瓶中，添加蒸餾水定容至1000mL，制成PBS緩沖液1000mL。將裁剪好的纖維敷料樣品放入250mL三角燒瓶中，分別加人已滅菌的70mL PBS緩沖液和5mL菌懸液，使菌懸液的最終濃度為1×104cfu/mL。然后用硬皮紙將三角燒瓶封口，固定于振蕩搖床上，以300r/min振蕩lh。取0.5mL振搖后的樣液，或用PBS做適當(dāng)稀釋后的樣液，以瓊脂傾注法接種平皿，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～24小時(shí)，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 取代度

按照1.2.3的方法對(duì)不同酸堿比制備的可溶性止血紗布進(jìn)行羧甲基取代度測(cè)試，結(jié)果見表1。

由表1可以看出，隨著酸堿比越來(lái)越大即氯乙酸添加量越大，可溶性止血紗布的羧甲基取代度越小，隨著氫氧化鈉添加量增加，可溶性止血紗布的取代度越大，取代度越大，其止血紗布越易溶解。

2.2 載銀量

按照1.2.4的方法對(duì)浸泡不同濃度硝酸銀的可溶性止血紗布進(jìn)行載銀量測(cè)試，結(jié)果見圖1和圖2。

由圖1可以看出，硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值為0.9993，符合要求。圖2表明浸漬硝酸銀溶液濃度越高，可溶性止血紗布載銀量越高，即可溶性止血紗布表面物理吸附的銀離子含量越高。

2.3 抑菌率

按照1.2.5的方法對(duì)可溶性止血紗布和不同濃度的抗菌型可溶性止血紗布進(jìn)行抗菌性測(cè)試，結(jié)果見表2。

由表2可以看出，未載銀可溶性止血紗布對(duì)白色念球菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌率分別為0%、5%和8%，基本無(wú)抗菌性。浸泡不同濃度硝酸銀溶液的可溶性止血紗布隨著硝酸銀溶液濃度的增加其對(duì)白色念球菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌率均呈現(xiàn)明顯的提高，并且抗菌率均高于50%，具有優(yōu)異的抗菌性。

3 討論

可溶性止血紗布在出血?jiǎng)?chuàng)面護(hù)理中使用比較廣泛，但其在抑菌性方面無(wú)法滿足臨床需要，載銀抗菌可溶性止血紗布則不僅具有止血性還具有優(yōu)良的抗菌性。從羧甲基取代度結(jié)果可以看出，反應(yīng)過(guò)程中的酸堿比越低可溶性止血紗布的羧甲基取代度越高，從而導(dǎo)致止血紗布越易溶脹，吸收更多的血液起到更好的壓迫止血作用。通過(guò)對(duì)比不同抗菌型可溶性止血紗布的載銀量以及抗菌率的結(jié)果，可以看出，浸漬液硝酸銀濃度越高抗菌型可溶性止血紗布載銀量越高，其抗菌率越高，從而彌補(bǔ)了可溶性止血紗布在臨床應(yīng)用上無(wú)防感染的缺點(diǎn)。

4 結(jié)論

自制的抗菌型可溶性止血紗布，具有較高的溶脹性從而更多的吸收滲液，可以更好的起到壓迫止血的目的并且可以長(zhǎng)久保持創(chuàng)面濕潤(rùn)環(huán)境從而更好促進(jìn)傷口愈合并且;同時(shí)有效的解決了可溶性止血紗布在臨床應(yīng)用中存在的無(wú)抗感染能力缺陷，是取代目前市場(chǎng)上止血敷料的最佳新型敷料產(chǎn)品。

參考文獻(xiàn)：

[1]鄭穎，鄭明義，吳遷，劉抒江，殷旭東，范泉水.羥乙基可溶性止血紗布的止血性能及安全性實(shí)驗(yàn)研究[J].西南國(guó)防醫(yī)藥，2009，19（1）：13-15.

[2]Kuroyanagi Y，Kim E，Shioya N.J.EVALUATION OF SYNTHETIC WOUND DRESSING CAPABLE OF RELEASING SILVER SULFADIAZINE[J].Burn Care Rehabil.，1990，11：106-115.

[3]Simon S，Le T，Phung G S.Silver as biocides in burn and wound dressings and bacterial resistance to silver compounds[J].J.Ind.Microbiol.Biotechnol.，2006，33：627-634.

[4]Damm C，Munstedt H.Kinetic aspects of the silver ion release from antimicrobial polyamide/silver nanocomposites[J].Appl.Phys.，2008，91：479-486.

[5]GB/T 20944.3-2008 紡織品 抗菌性能的評(píng)價(jià) 第3部分：振蕩法.