水果蔬菜中7種新型生物農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法研究

徐晶

摘 ?要：為了保證生物農(nóng)藥在使用方面有良好的安全性，應(yīng)認(rèn)識(shí)到生物農(nóng)藥實(shí)際殘留量檢驗(yàn)工作的重要性，并能結(jié)合生物農(nóng)藥特點(diǎn)以及殘留量檢查需要，制定科學(xué)的生物農(nóng)藥殘留量檢查方案。本文就水果蔬菜當(dāng)中7種新出現(xiàn)的生物農(nóng)藥相應(yīng)的殘留量檢測(cè)方法進(jìn)行了分析。

關(guān)鍵詞：蔬菜;水果;生物農(nóng)藥;殘留量;檢測(cè)

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)領(lǐng)域往往會(huì)使用各種農(nóng)來(lái)對(duì)影響水果、蔬菜正常生長(zhǎng)的病害以及蟲(chóng)害進(jìn)行防治，并且在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域不斷發(fā)展中，也出現(xiàn)了大量新型農(nóng)藥，進(jìn)一步推動(dòng)了農(nóng)業(yè)領(lǐng)域水果蔬菜產(chǎn)量的提升。但在這些生物農(nóng)藥使用中是，也會(huì)在水果蔬菜上存在一定的殘留量，需要技術(shù)人員做好相應(yīng)的殘留檢測(cè)工作。

1 生物農(nóng)藥概述

農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域發(fā)展中起到了關(guān)鍵性的作用，有效的促進(jìn)了水果、蔬菜等農(nóng)業(yè)產(chǎn)品在產(chǎn)量方面的提升，并且在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的持續(xù)發(fā)展中也出現(xiàn)了一些新型的生物農(nóng)藥，讓農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展更加的高速化、多元化。比如目前農(nóng)業(yè)領(lǐng)域中出現(xiàn)的生物農(nóng)藥，從生物農(nóng)藥的制造方面來(lái)看，其主要是利用了果實(shí)等生物活體在代謝階段產(chǎn)生的產(chǎn)物，在結(jié)合現(xiàn)代生物科學(xué)技術(shù)完成相應(yīng)的仿生合成，形成批量化、高質(zhì)量化的生物農(nóng)藥生產(chǎn)，在將生物農(nóng)藥運(yùn)用到農(nóng)業(yè)領(lǐng)域當(dāng)中的時(shí)候能有效完成生物殺菌或者是生物抑制，切實(shí)的推動(dòng)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域當(dāng)中產(chǎn)量的提升。而由于生物農(nóng)藥是以生物代謝產(chǎn)物為基礎(chǔ)進(jìn)行的生產(chǎn)，因此這種生物農(nóng)藥在使用中也就表現(xiàn)出了無(wú)公害性、低毒性以及不易出現(xiàn)抗藥性的特點(diǎn)，代表了現(xiàn)代農(nóng)業(yè)領(lǐng)域當(dāng)中的農(nóng)藥生產(chǎn)、制備在朝向綠色化發(fā)展。而從生物農(nóng)藥制備源方面來(lái)看，這種生物農(nóng)藥的可以劃分為微生物源類(lèi)型、動(dòng)物源類(lèi)型以及植物源類(lèi)型三種類(lèi)型，目前生物農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域水果、蔬菜植物病蟲(chóng)害防治方面發(fā)揮了良好作用，并且也在大范圍內(nèi)得到了推廣。

由于生物農(nóng)藥發(fā)展較快，在當(dāng)前的農(nóng)業(yè)領(lǐng)域當(dāng)中出現(xiàn)了多種類(lèi)型的生物農(nóng)藥，這些生物農(nóng)藥雖然能有效的對(duì)水果、蔬菜病蟲(chóng)害進(jìn)行防治，但由于這些生物農(nóng)藥當(dāng)中部分成分較為特殊，因此可能會(huì)對(duì)人體造成影響，需要相應(yīng)部門(mén)做殘留量檢查工作，保證生物農(nóng)藥有良好的使用。但苦參堿、印楝素、魚(yú)藤酮、煙堿等類(lèi)型的生物農(nóng)藥在使用中未能制定出相應(yīng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，影響了相應(yīng)生物農(nóng)藥的檢驗(yàn)工作質(zhì)量，不利于生物農(nóng)藥的發(fā)展。而在部分研究中發(fā)現(xiàn)印楝素這種物質(zhì)帶有一定的遺傳毒性，有可能會(huì)導(dǎo)致人體當(dāng)中精子出現(xiàn)畸形，最終影響到人類(lèi)的生育功能。而苦參堿則帶有一定的神經(jīng)毒性，這種物質(zhì)可能會(huì)對(duì)人體的肝臟系統(tǒng)、造血系統(tǒng)以及腎臟系統(tǒng)造成影響。因此在使用生物農(nóng)藥的階段中，需要相應(yīng)的部門(mén)做好生物農(nóng)藥檢查工作，使用多種方式對(duì)生物農(nóng)藥的殘留量進(jìn)行檢驗(yàn)，并能做好實(shí)際殘留量的檢查工作，讓生物農(nóng)藥的使用以及管理更加的科學(xué)化。當(dāng)前在對(duì)生物農(nóng)藥實(shí)際殘留量進(jìn)行檢驗(yàn)的時(shí)候會(huì)使用多種技術(shù)，比如分光光度技術(shù)、生物電極技術(shù)、液相色譜技術(shù)等眾多技術(shù)。

本文使用全自動(dòng)類(lèi)型固相萃取結(jié)合液相色譜技術(shù)，對(duì)蔬菜水果當(dāng)中的苦參堿物質(zhì)、煙堿物質(zhì)、藜蘆堿物質(zhì)、氧化類(lèi)型苦參堿物質(zhì)以及印楝素、井崗酶這7種生物農(nóng)藥的實(shí)際殘留量檢驗(yàn)方法進(jìn)行了分析，以期讓生物農(nóng)藥實(shí)際殘留量的檢測(cè)以及監(jiān)控工作有更好的質(zhì)量。

2 材料以及方法分析

2.1 儀器以及試劑

儀器：WatersQuattroPremierXEUPLC-MS/MS，北京優(yōu)興全自動(dòng)固相萃取儀;BUCHI平行蒸發(fā)儀;IKA渦旋振蕩器;科導(dǎo)超聲儀;Sigma3-18K高速離心機(jī)。試劑：甲醇（Fisher，色譜純），乙腈（Fisher，色譜純），甲酸（FA）（Fisher，色譜純），氨水（GR），乙酸（HA）（GR）。生物農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（北京壇墨質(zhì)檢）：苦參堿、煙堿、魚(yú)藤酮、氧化苦參堿、印楝素、黎蘆堿、井崗霉素。WatersMCX固相萃取小柱（60mg，3mL）。

2.2 檢測(cè)條件

色譜柱：WatersHILIC1.7μm，2.1×100mm，柱溫：40℃，進(jìn)樣體積：10μL。流動(dòng)相：A5mmol/L乙酸銨（含0.1%甲酸（FA）），B乙腈。毛細(xì)管電壓：1.0kV，源溫：120℃，脫溶劑溫度：350℃，脫溶劑氣流速：800（L/h）。

2.3 測(cè)定方法分析

首先要完成樣品的制備，需要檢驗(yàn)人員準(zhǔn)確稱(chēng)量出5g樣品，將這些樣品加入到總量為20毫升的質(zhì)量分為2%的乙酸溶液當(dāng)中，并使用渦旋技術(shù)進(jìn)行混合，在完成了混合處理之后還要使用超聲技術(shù)進(jìn)行時(shí)長(zhǎng)為10分鐘的提取，之后在進(jìn)行離心操作，將離心處理之后出現(xiàn)的上清液完全轉(zhuǎn)移到容量的為25毫升的比色管當(dāng)中，并使用質(zhì)量分為2%的乙酸溶液將其定容到25毫升，量取出5毫升的樣品溶液。

而在后續(xù)的程序凈化的時(shí)候，需要遵守全自動(dòng)類(lèi)型固相萃取操作的要。

活化1：甲醇→3mL→4mL/min;

活化2：純水→3mL→6mL/min;

上樣：不收集過(guò)柱液→5mL→3mL/min;

淋洗1：純水→3mL→6mL/min;

淋洗2：甲醇→3mL→4mL/min;

柱干燥：3mL→6mL/min;

洗脫：5%氨化甲醇→6mL→3mL/min;

柱干燥：3mL→6mL/min。

收集洗脫液，蒸干，用流動(dòng)相初始梯度定容至1mL，過(guò)0.20μm微孔濾膜后上機(jī)測(cè)試。

3 結(jié)果以及數(shù)據(jù)分析

3.1 色譜柱組件選擇

在本次試驗(yàn)分析中目標(biāo)生物農(nóng)藥中存在有叔胺基、仲胺以及醇羥基等極性類(lèi)型的基團(tuán)。

項(xiàng)目組比較了非極性柱（WatersBEHC18）、中等極性柱（WatersBEHT3）和強(qiáng)極性柱（WatersBEHHILIC）3種色譜柱對(duì)7種新型生物農(nóng)藥的分離效果。發(fā)現(xiàn)在C18柱上除魚(yú)藤酮和印楝素有保留外，其他5種物質(zhì)均沒(méi)有保留;在T3柱上除井崗霉素沒(méi)有保留外，其他6種物質(zhì)均有保留，但個(gè)別組分峰形較胖;在HILIC柱上7種物質(zhì)均有保留，且有比較好的峰形。所以最終選擇HILIC柱作為分析柱組件。

3.2 固相萃取機(jī)理及小柱的選擇

在反相萃取模式下，我們選擇了Waters的HLB，Agilent的Plexa、PPL、Focus、ENV和DIKMA的C86種非極性固相萃取小柱作為吸附柱，用濃度為50ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品考察了7種生物農(nóng)藥在酸性、中性和堿性條件下6種小柱對(duì)7種生物農(nóng)藥的保留情況（洗脫液為甲醇）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在3種條件下6種小柱對(duì)井崗霉素都沒(méi)有保留，不能滿(mǎn)足方法的要求，但除井崗霉素外，在中性或堿性條件下HLB、Plexa、Focus和ENV這4種小柱對(duì)其他物質(zhì)均有不錯(cuò)的保留。

3.3 正相萃取模式分析

在正相模式下，我們選擇了NH4、PSA、FLORISI、PrimeHLB、NH4/Carb、Carb等6種極性吸附小柱，用濃度為50ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品考察了80%乙腈-水和乙腈兩種溶液體系中7種生物農(nóng)藥在6種小柱中的保留情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除PrimeHLB在80%乙腈-水體系中對(duì)7種生物農(nóng)藥有比較好的保留外，其他柱子和體系對(duì)井崗霉素都沒(méi)有保留。這可能與井崗霉素的結(jié)構(gòu)含有大量的醇羥基，極性極大無(wú)法洗脫有關(guān)。

3.4 樣品檢測(cè)結(jié)果分析

自該方法建立以來(lái)，成功應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部300多批各種水果、蔬菜樣品的檢測(cè)，并多次檢出生物農(nóng)藥煙堿殘留，檢測(cè)結(jié)果介于0.062～1.41mg/kg間。

4 結(jié)束語(yǔ)

本項(xiàng)目研究建立的水果蔬菜中7種新型生物農(nóng)藥殘留全自動(dòng)固相萃取-液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法為果蔬中生物農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供了重要支持，為保證食品安全提供了重要保障，值得推廣和應(yīng)用。本檢測(cè)方法可以配合國(guó)家相關(guān)部門(mén)開(kāi)展生物農(nóng)藥殘留監(jiān)測(cè)的研究并制定相關(guān)生物農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)。

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