硒酵母中硒含量測定方法的研究

王建榮 馬傳芳

摘 ?要：在進(jìn)行硒酵母中硒含量測定方法研究的過程中，常用的測定方法主要有有機硒、總硒、無機硒等測定方法，在進(jìn)行研究的過程中，相關(guān)人員要建立有機硒和無機硒的測定的方法，并且還要將有機硒和無機硒分離處理，采用透析的方法對其進(jìn)行處理，對五種曬酵母采用不同的培養(yǎng)條件對其進(jìn)行培養(yǎng)，才能為添加劑領(lǐng)域和醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展提供科學(xué)、合理的數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞：酵母;有機硒;無機硒

1 試驗部分

1.1 主要儀器與試劑

Backman公司DU一7分光光度計1、2、3、4、5為5種不同含硒量的硒酵母在培養(yǎng)基中添加不同量的亞硒酸鈉，接種酵母菌，在3O℃下培養(yǎng)48h而得。變色酸：0.03tool·L-1，稱取變色酸1.0930g，定容至100ml。鹽酸苯肼：0.03mol·L-1。稱取0.4400g鹽酸苯肼，定容至100ml。EDTA：0.02tool·L-1，稱取EDTA鈉鹽0.7450g定容至100m|。氯酸鉀：0.6mol·L-1，稱取7.3500g氯酸鉀。

1#、2#、3#、4#、5#為5種不同含硒量的硒酵母：在培養(yǎng)基中添加不同量的亞硒酸鈉.接種酵母菌.在30°C下培養(yǎng)48h而得。

變色酸：0.03mol·L-1，稱取變色酸1.0930g.定容至100ml。

鹽酸苯肼：0.03mol·L-1，稱取0.4400g鹽酸苯肼，定容至100ml。

EDTA：0.02mol·L-1，稱取EDTA鈉鹽0.7450g定容至100ml。

氯酸鉀：0.6mol·L-1，稱取7.3500g氯酸鉀、定容至100ml。

HCI-KC1緩沖液：0.2tool·L，取濃鹽酸2.50ml稀釋至150ml;再取氯化鉀2.2500g，定容至150ml，兩者混勻。

亞硒酸標(biāo)液：稱取亞硒酸0.08167g，定容至500ml，然后再稀釋500倍混合酸：濃硝酸400ml與高氯酸100ml，混勻。

1.2 分析方法

1.2.1 樣品

消化稱取硒酵母樣品0.2g于錐形瓶中，加入混合酸lo～15ml，加熱至發(fā)煙，待溶液變?yōu)榈S色后，再加熱2～3min，此時溶液變?yōu)闊o色，冷卻后，定容，即可進(jìn)行測定。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別取含硒0.2g·ml-1。的亞硒酸標(biāo)準(zhǔn)液，0，l，2，3，4，5ml于比色管中，加入EDTAlm1，緩沖液2m1，氯酸鉀2ml，變色酸2ml，鹽酸苯肼lml，加水至15ml，搖勻，在沸水浴中加熱20rain，于冷水中冷卻后.用lcm比色皿于520nm波長下測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與討論

2.1 消化方法試驗

本文用硝酸一高氯酸、去硒硫酸一高氯酸一鉬酸鋪的方法消化。硝酸一高氯酸方法比較費時一但測定結(jié)果與真實值基本接近.絕對誤差為0.0054g-相對誤差為0.87;去硒硫酸一高氯酸一鋁酸鈉方法比較簡單、快速.但是測定結(jié)果高于真實值.可能是鉬離子對測定結(jié)果有影響，其絕對誤差為0.0293g.相對誤差為6.40。為此采用硝酸一高氯酸的消化方法。

2.2 加熱時間的影響

在試驗過程中發(fā)現(xiàn)加熱時間對刪定結(jié)果影響較大，如果增加加熱時聞，不但空白值增大.測定結(jié)果也偏高;縮短加熱時間.則濃度怫度不明顯一重復(fù)性也不好。分別進(jìn)行了加熱15，20.25rain試驗.結(jié)果表明，加熱20mln時，測定結(jié)果最接近于真實值.重復(fù)性也最好。通過五組試驗，測得其標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.65，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.83。

2.3 可靠性檢驗

將亞硒酸標(biāo)準(zhǔn)樣按測定硒酵母中總硒占量的方法進(jìn)行測定.稚取亞硒酸標(biāo)樣0.2469g.測得其舍硒量為0.6122g，而其理論計算值為0.6176g，誤差為00054g，相對誤差為087，試驗表明，該方法具有高的靈敏度和選擇性，測定下限為0.25rig·m1，回收率為（100±6.5）。

2.4 有機硒-總硒的檢測方法

標(biāo)準(zhǔn)硒的制備 取已知含量的亞硝酸鈉適量，精密稱定，加價硝酸溶液（1-30）制成1ul中含硒1.00ug的溶液或使用國家標(biāo)準(zhǔn)硒溶液。

硒對照紙的準(zhǔn)備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)硒溶液20ul滴加到3x3cm定量色譜濾紙上，吹干，折好后備用或精密量取國家標(biāo)準(zhǔn)硒溶液適量（約相當(dāng)于含硒20ug），滴加到3x3cm定量色譜濾紙上，吹干，折好后備用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液，空白溶液，供試品溶液的制備 取本品粉末適量，精密稱定（約相當(dāng)于含硒20ug），用3x3cm定量色譜濾紙包好，另取硒對照紙和3x3cm的空白定量色譜濾紙，分別用1000mL氧氣燃燒瓶，以硝酸溶液（1-30）25mL為吸收液，按“氧氣燃燒法”進(jìn)行有機破壞，開啟瓶塞后，分別將吸收液移至100mL燒杯中，用水30mL分次洗滌燃燒瓶及鉑絲。洗滌分別并入各燒杯中，既得供試品溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液，空白溶液。

測定法 將上訴三種溶液分別用濃氨溶液調(diào)PH至2.0±0.1值，各加鹽酸羥胺（1-2）1mL，搖勻，精密加2，3-二氨基奈溶液5mL，搖勻，在水浴中加熱5分鐘，冷卻后，分別移至分液漏斗，加少量的水，分次洗滌燒杯，洗滌液并入分液漏斗中，加水使總體積約70mL各加入環(huán)己烷10mL，強力振搖2分鐘，放置，分層后棄去水層，分出環(huán)以烷層，用1g無水硫酸鈉脫水，以《紫外-可見分光光度法》在378nm的波長處分別測定吸光度。

2.5 無機硒檢測方法

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于硒酵母0.5g），置于研體中，加乙醇溶液（乙醇300mL，水150mL，硝酸溶液（1-30）50mL）5mL，研磨，移入離心管中，研體用乙醇溶液15mL分3次洗滌，洗液并入離心管中，離心3分鐘（3500轉(zhuǎn)/分），傾出上清液，置50mL錐形瓶中，加入乙醇溶液20mL，領(lǐng)取乙醇溶液20mL，置50mL燒瓶中作為空白，分別在水浴中加熱蒸發(fā)置近干，防冷，在加入混合酸（無硒硫酸3mL，70～72%高氯酸4mL）7mL，搖勻，加6.6%鉬酸鈉溶液3mL，置沙浴中加熱，溶液變?yōu)榍辶翢o色，繼續(xù)加熱，置濃煙冒出，溶液變?yōu)辄S色，隨后變?yōu)榈S綠色時;停止加熱，冷卻后，移入燒杯中，各加入0.2mol/L乙二胺四醋酸二鈉溶液2mL，用濃氨溶液調(diào)PH值為2.0±0.1，各加鹽酸羥胺（1-2）1mL，搖勻，精密加2，3-二氨基奈溶液5mL，搖勻，在水浴中加熱5分鐘，冷卻后，分別移至分液漏斗，加少量的水，分次洗滌燒杯，洗滌液并入分液漏斗中，加水使總體積約70mL各加入環(huán)己烷10mL，強力振搖2分鐘，放置，分層后棄去水層，分出環(huán)以烷層，用1g無水硫酸鈉脫水，以《紫外-可見分光光度法》在378nm的波長處分別測定吸光度。

3 結(jié)束語

綜合所述，在對硒酵母進(jìn)行測定的過程中，可以利用催化吸光光度法對其進(jìn)行總硒，在對硒的含量進(jìn)行測定的過程中，相關(guān)人員可以采用對有機硒和無機硒含量進(jìn)行測定的方法對其進(jìn)行測定。在對其進(jìn)行測定的過程中，可以采用半胱氡酸定性鑒別的方法對有機硒和無機硒進(jìn)行鑒別，這種方法本身就有著易于操作等的特點，在醫(yī)藥領(lǐng)域硒酵母的應(yīng)用范圍才能得到擴大。

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