陰道念珠菌幾種常用檢驗方法

【中圖分類號】R197 ? ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A ? ? ?【文章編號】1004-7484（2019）03-0072-01

念珠菌陰道炎是常見的陰道內(nèi)感染炎癥，患者多以排尿不適、外陰或陰道燒灼感、疼痛、奇癢難忍等癥狀，病菌侵襲尿道時還可導(dǎo)致尿頻、尿急、尿痛，患者陰道分泌物雖然無異味，但外陰充血紅腫，搔抓過度可導(dǎo)致外陰皮膚破潰，白帶為凝乳或豆渣樣，顯微鏡下可觀察到白帶存在芽孢或菌絲。

陰道念珠菌的發(fā)病原因為：女性生殖系統(tǒng)特殊的生理結(jié)構(gòu)決定了這一部位多事地帶的性質(zhì)，陰道結(jié)構(gòu)中陰道口與外界相通，周圍鄰近外陰區(qū)，外陰區(qū)容易被尿液、腺體分泌物、肛門排泄物污染。陰道平時又有經(jīng)血和白帶流出，且陰道口溫暖潮濕的環(huán)境為真菌感染提供了條件。大部分陰道真菌為白色假絲酵母菌，放線菌和陰道纖毛菌則十分罕見，能導(dǎo)致陰道感染炎癥的病菌85%為白色念珠菌，這種細(xì)菌多分布在正常人的消化道、陰道、皮膚和口腔中，因此陰道念珠菌感染多為內(nèi)源性條件致病菌感染，雖然大部分時間白色念珠菌在陰道中并不會產(chǎn)生危害，但在陰道微生態(tài)系統(tǒng)平衡被破壞后則容易感染陰道念珠菌病。目前診斷陰道念珠菌感染時多依靠患者典型體征和真菌檢驗，以確定真菌作為診斷依據(jù)。

1 標(biāo)本采集

采集陰道分泌物標(biāo)本前24小時禁止陰道灌洗、局部用藥、盆浴、房事，以免生理變化對檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性造成影響，操作時所用的棉拭子、消毒刮板、吸管不能粘有任何潤滑劑和化學(xué)試劑，并保持干燥清潔;使用窺陰器前可使用少量生理鹽水對表面進(jìn)行濕潤，根據(jù)檢驗?zāi)康倪x擇合適的標(biāo)本取材部位，例如陰道深處、宮頸管口、陰道后穹窿等部位多使用棉拭子取材，操作前先以鹽水浸濕，隨后制備生理鹽水涂片進(jìn)行陰道分泌物檢驗，將其涂制成薄片后以95%乙醇固定，采取革蘭染色、巴氏染色、姬姆薩染色檢驗可篩查出病原微生物。

2 濃集法檢驗

將標(biāo)本放置在清潔的干燥試管內(nèi)，加入氫氧化鈉溶液1mL后混勻，水浴3～5min，溫度為37%，隨后取出標(biāo)本以1500轉(zhuǎn)/min的速度離心5min，將濃集的沉淀物取出制作成涂片，顯微鏡下觀察，可對不同種類的真菌進(jìn)行觀察，并能提高陰道念珠菌的檢出率。

3 濕片檢驗

與生理鹽水懸滴法滴蟲檢查方法相同，若有必要，可在涂片上滴1滴氫氧化鉀溶液，混勻后加上蓋玻片，低倍鏡下通?？捎^察到假絲酵母菌的假菌絲和卵圓形孢子，隨后以高倍顯微鏡再次確認(rèn)，高倍鏡視野下通?？捎^察到無色透明、卵圓形的單個或成群的分枝狀、鏈條狀、芽生孢子，此時即為檢出真菌。若將陰道分泌物取出并對其進(jìn)行革蘭染色，隨后鏡下觀察，則能觀察到呈分支狀或鏈條狀的假菌絲以及卵圓形的革蘭陽性孢子，形態(tài)同樣為分枝狀或鏈條狀。

4 培養(yǎng)鑒定

培養(yǎng)法是鑒定真菌的常用檢驗方法，將陰道分泌物接種到真菌培養(yǎng)基上，根據(jù)分離培養(yǎng)的形態(tài)特征以及菌落涂片鏡檢觀察到的芽生孢子和假菌絲進(jìn)行判斷。（1）將溫度設(shè)置為25～37℃，接種到沙氏培養(yǎng)基中，菌落都能生長成高出培養(yǎng)基表面、閃光、質(zhì)地軟而平滑、奶油色的酵母樣菌落，而陳舊的菌落則出現(xiàn)皺褶，顏色逐漸變深且質(zhì)地變硬，培養(yǎng)基中央有氣泡出現(xiàn)，氣泡中不存在菌絲但營養(yǎng)菌絲豐富，鏡下觀察可發(fā)現(xiàn)大量的芽生孢子和假菌絲;（2）而接種到葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基中在37℃環(huán)境下持續(xù)培養(yǎng)48小時，可發(fā)現(xiàn)白色念珠菌管底生長，且無菌膜。將0.005%濃度的氯化三苯基四氮唑加入到葡萄糖蛋白胨瓊脂后，白色念珠菌會變?yōu)榈t色或無色變，而其他酵母菌或念珠菌則會出現(xiàn)紅色，熱帶念珠菌色變最為明顯，呈深紅色甚至紫色;（3）接種到玉米吐溫-80瓊脂培養(yǎng)基中在25℃的條件下培育24小時，可發(fā)現(xiàn)白色念珠菌頂端后厚壁孢子形成，且存在大量樹枝狀菌絲：（4）在0.5mL～1.0mL正常人血清中接種純培養(yǎng)的念珠菌，37℃環(huán)境下培育30分鐘～3小時，可觀察到念珠菌有芽管產(chǎn)生，且芽管長于細(xì)胞3倍以上，末端寬度僅為細(xì)胞的一半。

陰道念珠菌檢查能為女性泌尿生殖系統(tǒng)疾病提供重要依據(jù)，濃集法檢驗、濕片檢驗和培養(yǎng)鑒定是常用的三種陰道分泌物念珠菌檢驗方法，檢驗時首先要注意標(biāo)本采集和制備質(zhì)量，做好取材統(tǒng)一、檢驗及時，靈活選擇檢驗方法，提高檢出率和準(zhǔn)確度。

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作者簡介：

王春容，檢驗科，主管技師，畢業(yè)于川北醫(yī)學(xué)院，大學(xué)本科學(xué)歷，擅長臨床基礎(chǔ)檢驗，致力于檢驗醫(yī)學(xué)相關(guān)科普