飼糧中添加甘露寡糖對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能及組織天然免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響

熊阿玲 包龍飛 許蘭嬌 萬(wàn) 根 龍光蓮 李君惠 黎觀紅

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;江西省營(yíng)養(yǎng)飼料開發(fā)工程研究中心，南昌 330045)

Toll樣受體(Toll-like receptors, TLRs)是表達(dá)于動(dòng)物免疫細(xì)胞和上皮細(xì)胞的一類重要模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors, PRRs)，是機(jī)體最初感知微生物存在的天然免疫識(shí)別受體，是啟動(dòng)哺乳動(dòng)物和家禽腸道天然免疫應(yīng)答的關(guān)鍵PRR，而且還作為天然免疫和獲得性免疫的橋梁而調(diào)節(jié)獲得性免疫應(yīng)答[1-2]。腸道上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞可通過(guò) TLRs區(qū)分病原微生物和共生有益菌產(chǎn)生不同免疫效應(yīng)。TLRs能夠識(shí)別微生物相關(guān)分子模式(microbe-associated molecular patterns, MAMPs)并激活下游信號(hào)通路從而釋放出一系列免疫效應(yīng)分子并產(chǎn)生一系列生理和免疫效應(yīng)，釋放的免疫效應(yīng)分子主要包括抗菌肽(β-防御素和cathelicidins)、細(xì)胞因子和趨化因子等[3-4]。基于TLRs在天然免疫應(yīng)答中的重要作用，近年來(lái)，雞TLRs(chTLRs, chicken TLRs)的研究受到極大關(guān)注。在目前已鑒定的10種禽類chTLRs中，TLR2主要識(shí)別來(lái)自于G+細(xì)菌的細(xì)胞壁組分如肽聚糖、脂蛋白和脂磷壁酸，TLR4識(shí)別G-細(xì)菌的LPS[5]。

抗菌肽(antimicrobial peptides, AMPs)在宿主免疫調(diào)控中起到至關(guān)重要的作用，是雞抗感染天然免疫至關(guān)重要的效應(yīng)分子[6-8]。β-防御素和cathelicidins是雞體內(nèi)的兩個(gè)主要抗菌肽家族。到目前為止，從雞組織中鑒定出14種禽β-防御素(avian β-defensins, AvBDs)，即AvBD1-14[8-9]。在雞組織中發(fā)現(xiàn)的cathelicidins(Cath)有4 種，即Cath-1、Cath-2， Cath-3和Cath-B1[10]。雞體內(nèi)表達(dá)的抗菌肽家族中，AvBD9和Cath-B1是廣泛表達(dá)于雞組織尤其是消化道和免疫組織器官的一種重要抗菌肽，AvBD9和Cath-B1除具有很強(qiáng)的廣譜抗菌活性外，在體內(nèi)還發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)功能，在雞的抗感染免疫中發(fā)揮重要作用[6-7, 11-12]。

國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)甘露寡糖(mannan-oligosaccharides, MOS)在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用進(jìn)行了大量研究。大多數(shù)研究表明，肉雞飼糧中添加MOS可提高日增重、改善飼料利用率、降低死亡率，促進(jìn)腸道發(fā)育，改善腸道微生物區(qū)系，提高肉雞腸道免疫和系統(tǒng)免疫功能[13-15]。但MOS調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用機(jī)制目前還不是十分清楚。MOS是否可通過(guò)影響雞天然免疫相關(guān)基因如TLRs和抗菌肽表達(dá)而發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用？這方面的研究鮮見報(bào)道。本研究旨在探討飼糧中添加MOS對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能以及重要的天然免疫相關(guān)基因TLR2、TLR4、AvBD9和Cath-B1基因表達(dá)的影響，從天然免疫角度初步探討MOS的免疫調(diào)節(jié)作用，為MOS作為抗生素替代品的推廣應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取體重相近的1日齡雄性白羽肉仔雞(科寶500)176只，隨機(jī)分成4個(gè)處理組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)11只雞，試驗(yàn)期為42 d。4個(gè)處理組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0(對(duì)照組)、0.3、0.6、0.9 g/kg MOS的飼糧。各組飼糧不添加任何抗生素，本試驗(yàn)所用的甘露寡糖來(lái)源于食品啤酒酵母細(xì)胞壁，純度≥95%。

1.2 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

本試驗(yàn)采用的基礎(chǔ)飼糧為玉米—豆粕型飼糧，按照1～21、22～42日齡齡兩個(gè)階段，根據(jù)NRC(1994)和我國(guó)《雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(2004)推薦的營(yíng)養(yǎng)水平配制?；A(chǔ)飼糧組成及其營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

注： 微量元素預(yù)混料為每千克飼糧提供：鐵(FeSO4·H2O)80 mg，銅(CuSO4·5H2O)8 mg，鋅(ZnSO4·H2O)60 mg，錳(MnSO4·H2O)80 mg，碘(KI)0.35 mg，硒(Na2SeO3)0.15 mg。維生素預(yù)混料為每千克飼糧提供：維生素A 8 000 IU，維生素D33 000 IU，維生素E 10 IU，維生素K32 mg，維生素B11.5 mg，維生素B28.0 mg，維生素B62.5 mg，維生素B120.011 mg，葉酸0.9 mg，煙酸44 mg，D-泛酸鈣11 mg，生物素0.11 mg。營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞采用三層籠籠養(yǎng)。試驗(yàn)前對(duì)雞舍進(jìn)行充分沖洗和嚴(yán)格消毒，入雛前24 h將雞舍升溫至32～35 ℃，此后溫度每周降低2～3 ℃，直至保持在22～24 ℃為止。采用連續(xù)光照、自然通風(fēng)。試驗(yàn)期舍內(nèi)光照、濕度和溫度根據(jù)常規(guī)飼養(yǎng)管理要求進(jìn)行控制，雞只按正常免疫程序進(jìn)行免疫。整個(gè)試驗(yàn)期雞只自由采食和飲水。

1.4 組織樣品的采集與制備

分別在肉仔雞21和42日齡08 ∶00喂料前從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取兩只體重相近的雞空腹稱重，稱重后采用頸動(dòng)脈放血法將肉仔雞致死，冰浴上迅速分離法氏囊、胸腺、脾臟、肝臟、回腸和盲腸，用冰冷的生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干表面水分，用天平稱重法氏囊、胸腺和脾臟，用于計(jì)算器官指數(shù)。液氮速凍肝臟、脾臟、回腸和盲腸，轉(zhuǎn)入-80 ℃低溫冰箱保存?zhèn)溆?，用于基因表達(dá)量的測(cè)定。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能

分別于肉仔雞1、21和42 日齡對(duì)每重復(fù)肉仔雞進(jìn)行空腹稱重，并在試驗(yàn)期間記錄飼料耗料量，計(jì)算肉仔雞各階段的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

1.5.2 免疫器官指數(shù)

根據(jù)所屠宰試驗(yàn)雞體重與免疫器官(法氏囊、胸腺、脾臟)質(zhì)量計(jì)算各免疫器官指數(shù)。計(jì)算公式：免疫器官指數(shù)(g/kg)=免疫器官重(g)/雞活重(kg)。

1.5.3 組織TLR2、TLR4、AvBD9和Cath-B1基因mRNA表達(dá)量

采用Trizol法提取肉仔雞肝臟、脾臟、回腸和盲腸組織總RNA，用超微量紫外分光光度儀測(cè)定其溶度和純度，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)分析其完整性。對(duì)質(zhì)量合格的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，用于后續(xù)試驗(yàn)。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中提供的雞GADPH、TLR2、TLR4、AvBD9和Cath-B1基因序列，用Primer Express 3.0軟件設(shè)計(jì)其引物，引物由ShineGene公司(中國(guó)上海)合成，特異性引物及探針的序列見表2。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書優(yōu)化反應(yīng)體系，對(duì)每個(gè)樣品 cDNA進(jìn)行目的基因和內(nèi)參基因熒光定量PCR反應(yīng)，擴(kuò)增反應(yīng)在FTC2000熒光定量PCR系統(tǒng)(Funglyn Biotech, CA)中進(jìn)行。反應(yīng)總體系為50 μL：25 μL 2 × Hotstart Fluo-PCR mix， 2 × 1 μL Primers (25 pmol/μL)，0.5 μL Probe(25 pmol/μL)，1 μL cDNA，21.5 μL DEPC水。反應(yīng)條件：94 ℃ 4 min，94 ℃ 20 s，60 ℃ 30 s循環(huán)40次。PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，PCR儀自帶的ABI7300 SDS Software分析軟件分析所得結(jié)果Ct值。目的基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量用2-△△Ct法分析，內(nèi)參基因選用GAPDH。

表2 實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增所使用的特異性引物序列、GenBank登入號(hào)及產(chǎn)物大小

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0軟件的One-way ANOVA過(guò)程進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.01表示差異極顯著，P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 甘露寡糖對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，飼糧中添加MOS對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)前期(1～21日齡)平均日采食量無(wú)顯著影響(P>0.05)，但顯著提高肉仔雞生長(zhǎng)前期平均日增重和顯著降低料重比(P<0.05或P<0.01)，MOS不同添加水平組之間平均日增重和料重比無(wú)顯著差異(P>0.05)。與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.6 g/kg MOS顯著提高肉仔雞生長(zhǎng)后期(22～42日齡)平均日采食量(P<0.01)、平均日增重(P<0.05)和料重比(P<0.01)，MOS不同添加水平組之間日增重?zé)o顯著差異。添加0.3～0.9 g/kg MOS顯著提高肉仔雞生長(zhǎng)全期(1～42日齡)的平均日采食量和平均日增重(P<0.05或P<0.01)。

表3 飼糧中添加甘露寡糖對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

注：在同一日齡，同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母相同或無(wú)肩標(biāo)字母表示差異不顯著(P>0.05)，肩標(biāo)小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，大寫字母不同表示差異極顯著(P<0.01)。余同。

2.2 甘露寡糖對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知，飼糧中添加0.6 g/kg和0.9 g/kg MOS顯著提高21日齡肉仔雞的法氏囊指數(shù)(P<0.05)，飼糧中添加0.9 g/kg MOS顯著提高42日齡胸腺指數(shù)(P<0.05)，但MOS不同添加水平組之間差異不顯著(P>0.05)。添加不同水平MOS處理組對(duì)21日齡肉仔雞胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和42日齡的法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表4 甘露寡糖對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響

2.3 甘露寡糖對(duì)肉仔雞組織TLR2 mRNA表達(dá)的影響

由表5可知，飼糧添加MOS對(duì)21日齡肉仔雞肝臟、脾臟、回腸和盲腸以及42日齡肝臟和脾臟TLR2 mRNA表達(dá)無(wú)顯著影響(P>0.05)，但顯著影響42日齡肉仔雞回腸和盲腸TLR2 mRNA表達(dá)(P<0.05或P<0.01)。與對(duì)照組相比，飼糧添加0.3和0.9 g/kg MOS分別極顯著提高42日齡肉仔雞回腸和盲腸TLR2 mRNA表達(dá)(P<0.01)。由表5亦可知，TLR2基因在所測(cè)定的肝臟、脾臟、回腸和盲腸四個(gè)組織中的表達(dá)存在組織差異性，以盲腸TLR2 mRNA表達(dá)水平最高。

表5 飼糧中添加甘露寡糖對(duì)肉仔雞組織TLR2 mRNA表達(dá)的影響

2.4 甘露寡糖對(duì)肉仔雞組織TLR4 mRNA表達(dá)的影響

由表6可知，飼糧中添加MOS對(duì)21日齡肉仔雞脾臟、盲腸和42日齡盲腸TLR4 mRNA表達(dá)無(wú)顯著影響(P>0.05)，但顯著影響21日齡肝臟、回腸和42日齡肉雞肝臟、脾臟、回腸TLR4 mRNA表達(dá)(P<0.05或P<0.01)。在21日齡，飼糧中添加0.6和0.9 g/kg MOS極顯著提高肝臟TLR4 mRNA表達(dá)(P<0.01)，但0.3 g/kg MOS添加組與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；回腸TLR4 mRNA表達(dá)隨MOS添加量的增加而呈上升趨勢(shì)，0.9 g/kg MOS添加組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。在42日齡，三個(gè)MOS添加組均與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。飼糧中添加0.6和0.9 g/kg MOS分別顯著提高42日齡回腸(P<0.01)和脾臟(P<0.05)TLR4 mRNA表達(dá)。由表6亦可知，在所測(cè)定的肝臟、脾臟、回腸和盲腸的四個(gè)組織中，以盲腸TLR4 mRNA表達(dá)水平最高，而肝臟表達(dá)水平最低。

表6 飼糧中添加甘露寡糖對(duì)肉仔雞組織TLR4 mRNA表達(dá)的影響

2.5 甘露寡糖對(duì)肉仔雞組織AvBD9 mRNA表達(dá)的影響

由表7可知，飼糧中添加MOS顯著影響21日齡肉仔雞脾臟、回腸和盲腸以及42日齡回腸和盲腸AvBD9 mRNA表達(dá)(P<0.05或P<0.01)。在21日齡，與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.3 g/kg MOS顯著提高脾臟(P<0.05)和回腸(P<0.01)AvBD9 mRNA的表達(dá)；飼糧中添加0.6 g/kg MOS極顯著提高回腸和盲腸AvBD9 mRNA表達(dá)(P<0.01)，而飼糧中添加0.9 g/kg MOS顯著提高盲腸AvBD9 mRNA表達(dá)(P<0.05)。在42日齡，與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.9 g/kg MOS顯著提高回腸AvBD9 mRNA的表達(dá)(P<0.05)；飼糧中添加0.3～0.9 g/kg MOS極顯著提高盲腸AvBD9 mRNA表達(dá)(P<0.01)。由表7亦

表7 飼糧中添加甘露寡糖對(duì)肉仔雞組織AvBD9 mRNA表達(dá)的影響

可知，AvBD9 mRNA表達(dá)水平在所測(cè)定的肝臟、脾臟、回腸和盲腸四個(gè)組織中存在差異，肝臟AvBD9 mRNA表達(dá)水平最高，而回腸表達(dá)水平最低。

2.6 甘露寡糖對(duì)肉仔雞組織Cath-B1 mRNA表達(dá)的影響

由表8可知，飼糧中添加MOS對(duì)21日齡肉仔雞肝臟和42日齡回腸Cath-B1 mRNA表達(dá)無(wú)顯著影響(P>0.05)，但顯著影響21日齡肉仔雞脾臟、回腸和盲腸以及42日齡肝臟、脾臟和盲腸Cath-B1 mRNA表達(dá)(P<0.05或P<0.01)。在21日齡，與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.3 g/kg MOS顯著提高脾臟(P<0.05)以及極顯著提高回腸和盲腸Cath-B1 mRNA表達(dá)(P<0.01)；添加0.9 g/kgMOS極顯著提高盲腸Cath-B1 mRNA表達(dá)(P<0.01)，但顯著降低脾臟Cath-B1 mRNA表達(dá)(P<0.05)。在42日齡，與對(duì)照組相比，飼糧中添加0.6 g/kg MOS極顯著提高肝臟Cath-B1 mRNA表達(dá)(P<0.01)，而飼糧中添加0.9 g/kg MOS顯著提高肝臟和脾臟(P<0.05)以及極顯著提高盲腸(P<0.01)Cath-B1 mRNA表達(dá)。由表8亦可知，Cath-B1 mRNA表達(dá)水平在所測(cè)定的肝臟、脾臟、回腸和盲腸四個(gè)組織中存在差異，Cath-B1 mRNA高表達(dá)于脾臟和盲腸，而在肝臟中表達(dá)水平最低。

表8 飼糧中添加甘露寡糖對(duì)肉仔雞組織Cath-B1 mRNA表達(dá)的影響

3 討論

國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)飼糧添加MOS對(duì)畜禽生長(zhǎng)性能的影響進(jìn)行了大量的研究，但不同研究者所得結(jié)果不盡一致。Pelicano等[16]報(bào)道，飼糧添加MOS可顯著提高1～21日齡肉仔雞日增重和飼料轉(zhuǎn)化率，MOS對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的改善效應(yīng)并不能持續(xù)至42日齡。Hooge 等[17]、Kumprecht等[18]和武威等[19]試驗(yàn)結(jié)果均表明，MOS可顯著提高肉仔雞的生長(zhǎng)性能。本研究發(fā)現(xiàn)飼糧中添加MOS能顯著改善肉仔雞生長(zhǎng)性能，添加0.3～0.9 g/kg MOS顯著提高肉仔雞生長(zhǎng)前期(1～21日齡)的平均日增重和降低料重比，且添加0.9 g/kg MOS的可取得最佳的料重比；添加0.6 g/kg MOS對(duì)提高肉仔雞生長(zhǎng)后期(22～42日齡)平均日采食量和平均日增重的效果最明顯。本試驗(yàn)結(jié)果與上述報(bào)道的研究結(jié)果類似。然而，Biggs等[20]和Baurhoo等[21]均報(bào)道，飼糧添加MOS對(duì)生長(zhǎng)前期肉雞的生產(chǎn)性能沒有改善作用。Yang等[22]研究報(bào)道，MOS對(duì)肉雞生長(zhǎng)后期(22～42日齡)的生產(chǎn)性能沒有改善作用。相反，Sohail等[23]和Cheng等[24]分別發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加MOS可顯著改善熱應(yīng)激條件下肉雞日增重、采食量和飼料轉(zhuǎn)化率。有關(guān)MOS對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的改善作用，不同學(xué)者的研究結(jié)果不盡一致，其原因可能與MOS的來(lái)源、添加量、飼糧組成、雞的生長(zhǎng)階段及飼養(yǎng)環(huán)境等因素有關(guān)。

禽類的免疫器官主要包括法氏囊、胸腺和脾臟，其中，法氏囊和胸腺為禽類的中樞免疫器官，脾臟為禽類的次級(jí)免疫器官。免疫器官指數(shù)的大小常用來(lái)反映或評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能狀態(tài)[25]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.6 g/kg可分別提高21日齡肉仔雞法氏囊指數(shù)和42日齡胸腺指數(shù)，由此說(shuō)明，飼糧添加適量的MOS可提高肉雞免疫功能。同樣地， Sohail等[26]和Attia等[27]均報(bào)道，飼糧添加MOS可顯著提高肉仔雞法氏囊和胸腺指數(shù)，但對(duì)脾臟指數(shù)無(wú)影響，這與本研究結(jié)果相一致。

TLRs是啟動(dòng)哺乳動(dòng)物和家禽天然免疫應(yīng)答的關(guān)鍵模式識(shí)別受體，并可調(diào)節(jié)獲得性免疫應(yīng)答，在機(jī)體的抗感染免疫中發(fā)揮重要作用。研究表明，TLR2可識(shí)別酵母細(xì)胞壁甘露聚糖，介導(dǎo)宿主相關(guān)免疫效應(yīng)分子的分泌和天然免疫應(yīng)答的產(chǎn)生[28]。TLR4亦可識(shí)別葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖(glucuronoxylomannan)、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和假絲酵母(Candidaalbicans)來(lái)源的甘露聚糖[29]。TLR2和TLR4表達(dá)的提高及其介導(dǎo)的下游信號(hào)通路的激活與胃腸道屏障功能的改善密切相關(guān)，由此提高腸道對(duì)病原菌入侵和對(duì)感染的抵抗力[30-31]。來(lái)源于酵母細(xì)胞壁MOS作為甘露聚糖大分子的一部分，亦可能作為MAMP而被TLRs識(shí)別而啟動(dòng)機(jī)體天然免疫應(yīng)答。本研究發(fā)現(xiàn)，在本試驗(yàn)添加水平范圍內(nèi)(0.3～0.9 g/kg)，飼糧添加MOS可不同程度地提高肉雞回腸和盲腸中TLR2和TLR4 mRNA的表達(dá)。Yitbarek等[32]報(bào)道，產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)感染對(duì)肉雞回腸TLR2和TLR4以及盲腸扁桃體TLR4基因表達(dá)無(wú)影響，但飼糧中添加MOS顯著提高感染產(chǎn)氣莢膜梭菌肉雞回腸TLR2和TLR4以及盲腸扁桃體TLR4基因表達(dá)，但感染產(chǎn)氣莢膜梭菌的肉雞其盲腸扁桃體TLR2基因表達(dá)顯著升高，而飼糧中添加MOS對(duì)感染產(chǎn)氣莢膜梭菌肉雞盲腸扁桃體TLR2的表達(dá)無(wú)影響。Cheled-Shoval等[33]研究發(fā)現(xiàn)，出殼前3d給肉雞胚胎注射MOS可提高小腸TLR4基因表達(dá)，但對(duì)小腸TLR2基因表達(dá)無(wú)影響。本研究結(jié)果與Yitbarek等[32]報(bào)道的研究結(jié)果相一致，但與Cheled-Shoval等[33]報(bào)道的TLR2基因表達(dá)結(jié)果不一致。同樣地，Munyaka等[34]報(bào)道，飼糧添加MOS對(duì)42日齡肉仔雞回腸和盲腸扁桃體TLR2 mRNA的表達(dá)無(wú)影響，但顯著降低TLR4 mRNA的表達(dá)，而本研究發(fā)現(xiàn)飼糧添加MOS對(duì)盲腸TLR4 mRNA無(wú)顯著影響。功能性寡糖如菊粉和低聚果糖除直接與腸道上皮細(xì)胞和腸道免疫細(xì)胞上的碳水化合物識(shí)別受體如某些TLRs、甘露糖受體、C型凝集素受體等受體結(jié)合以啟動(dòng)免疫應(yīng)答而提高機(jī)體對(duì)病原菌的清除能力和保護(hù)腸道健康等作用外，部分被吸收的寡糖可引起局部如脾臟、肝臟和胸腺或系統(tǒng)免疫應(yīng)答反應(yīng)[35-36]。本研究發(fā)現(xiàn)，MOS除不同程度提高腸道TLR2和TLR4表達(dá)外，MOS還可不同程度地提高肝臟和脾臟TLR2和TLR4 mRNA的表達(dá)。由此表明，MOS除直接在腸道發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用外，部分MOS被完整吸收后或其被腸道微生物作用后的代謝產(chǎn)物被吸收后調(diào)節(jié)機(jī)體其他組織尤其是免疫器官組織細(xì)胞TLRs表達(dá)并由此調(diào)節(jié)機(jī)體局部和系統(tǒng)免疫功能，但這需進(jìn)一步的試驗(yàn)證明。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，TLR2和TLR4 mRNA的表達(dá)存在組織差異性，在所測(cè)的四個(gè)組織中，以盲腸TLR2和TLR4 mRNA表達(dá)量最高。

動(dòng)物體內(nèi)源表達(dá)的抗菌肽如β-防御素和cathelicidins是TLRs激活后產(chǎn)生的關(guān)鍵免疫效應(yīng)分子之一[3-4]。研究表明，表達(dá)于腸道上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞的重要模式識(shí)別受體TLR2可識(shí)別酵母細(xì)胞壁甘露聚糖，甘露聚糖與TLR2結(jié)合后激活信號(hào)通路分子而產(chǎn)生免疫效應(yīng)分子介導(dǎo)天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答反應(yīng)。禽AvBD9和是Cath-B1廣泛表達(dá)于雞各種組織尤其是消化道和免疫器官的一種重要抗菌肽，具有很強(qiáng)的殺滅致病細(xì)菌和真菌活性，同時(shí)，在雞的天然免疫和獲得性免疫中亦發(fā)揮重要作用[6-9,12]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加適宜水平的MOS可不同程度地提高肉仔雞回腸、盲腸、肝臟和脾臟AvBD9及Cath-B1基因的表達(dá)，與相應(yīng)組織中TLRs尤其是TLR2表達(dá)結(jié)果呈現(xiàn)相似的變化。綜上結(jié)果可知，MOS可能夠通過(guò)提高肉雞組織TLRs表達(dá)并由TLRs介導(dǎo)上調(diào)β-防御素和cathelicidins等抗菌肽表達(dá)而提高肉雞天然免疫防御功能。

4 結(jié)論

綜合本試驗(yàn)結(jié)果，飼糧中添加適宜水平的MOS可顯著提高肉仔雞生長(zhǎng)性能，且不同程度地提高肉雞肝臟、脾臟、回腸和盲腸中TLR2、TLR4、AvBD9和Cath-B1的表達(dá)。MOS可能通過(guò)調(diào)控肉雞組織TLRs表達(dá)并由TLRs介導(dǎo)上調(diào)β-防御素和cathelicidins等抗菌肽的表達(dá)而提高肉雞天然免疫防御功能。綜合生長(zhǎng)性能、免疫器官指數(shù)和天然免疫相關(guān)基因表達(dá)指標(biāo)，日糧添加0.6 g/kg MOS可取得較佳效果。