茯苓加工炮制、成分分析及體內(nèi)代謝研究進(jìn)展

顏冬蘭謝 安袁 莉5胡展晴黃 勝?

(1.九芝堂股份有限公司國(guó)家企業(yè)技術(shù)中心,湖南 長(zhǎng)沙410021；2.湖南省中藥固體制劑工程技術(shù)研究中心,湖南 長(zhǎng)沙410021；3.中藥驗(yàn)方湖南省工程研究中心,湖南 長(zhǎng)沙410021；4.中南大學(xué) 湘雅藥學(xué)院,湖南 長(zhǎng)沙410013；5.成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司,四川 成都610051)

炮制工藝是影響中藥飲片質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié),建立規(guī)范合理的炮制工藝,是保證中藥飲片質(zhì)量的基礎(chǔ)。研究中藥炮制規(guī)范的關(guān)鍵控制工藝必須關(guān)注飲片炮制過程對(duì)化學(xué)成分的影響以及活性成分在體內(nèi)的代謝過程。本文通過檢索國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn),簡(jiǎn)要總結(jié)茯苓的加工炮制工藝、化學(xué)成分分析及體內(nèi)代謝的研究進(jìn)展,為茯苓炮制工藝的現(xiàn)代化研究、產(chǎn)業(yè)鏈的開發(fā)提供參考。茯苓為多孔菌科臥孔屬真菌茯苓的菌核,具有滲濕利水、益脾和胃、寧心安神的功效,有“十藥九茯苓”之說[1]。

1 茯苓加工炮制工藝

1.1 茯苓炮制工藝的現(xiàn)代研究

根據(jù)2015版《中國(guó)藥典》記載及多地產(chǎn)地實(shí)際加工經(jīng)驗(yàn),目前茯苓主要的四種加工模式：①鮮茯苓－去皮－切制－干燥；②鮮茯苓－發(fā)汗－去皮－切制－干燥；③鮮茯苓－蒸制－去皮－干燥；④鮮茯苓－發(fā)汗－蒸制－去皮－干燥[2]。許多學(xué)者針對(duì)茯苓飲片炮制工藝的關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)研究,以期確定最佳炮制方式和工藝參數(shù)。許臘英等[3]采用正交設(shè)計(jì)的方法,以茯苓主要有效成分茯苓多糖含量為主要考察指標(biāo),對(duì)茯苓的炮制工藝進(jìn)行比較系統(tǒng)的研究,獲得茯苓的最佳炮制工藝的量化指標(biāo)為發(fā)汗2次,加12倍量水,洗2次,每次洗3 min,蒸20 min,趁熱去皮后用刀切成約為0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的茯苓丁,于60℃烘8 h。王海燕等[4]以茯苓酸和茯苓多糖含量的綜合作用為指標(biāo),對(duì)發(fā)汗次數(shù)、飲片規(guī)格和烘干溫度進(jìn)行正交試驗(yàn)研究,確定茯苓飲片最佳炮制工藝為：趁鮮,去皮,切制成厚片或丁,70℃烘干。賀?；ǖ萚5]以多糖和總糖為指標(biāo),篩選出茯苓的最佳炮制工藝為：發(fā)汗的茯苓個(gè),加水浸泡24 h,取出用濕布潤(rùn)透后于蒸鍋內(nèi)蒸40min,趁熱切制后于60℃烘箱內(nèi)干燥。

1.2 不同炮制方法對(duì)茯苓化學(xué)成分的影響

雷高明等[6]從浸出物、多糖和總糖含量、HPLC色譜等方面來考察趁鮮加工和發(fā)汗后加工對(duì)茯苓飲片化學(xué)成分的影響,研究表明趁鮮處理的飲片水溶性浸出物含量大于發(fā)汗后處理的飲片,不同炮制加工方法對(duì)堿溶性成分的含量影響較??；趁鮮處理的茯苓片總糖和多糖含量均高于發(fā)汗后處理的茯苓片,茯苓丁相反；炮制加工方法的不同對(duì)茯苓飲片中化學(xué)成分的含量有一定的影響。徐雷等[7]以茯苓為試材,采用分光光度法測(cè)定茯苓多糖和三萜類化合物含量,研究傳統(tǒng)發(fā)汗切制和趁鮮切制2種初加工方法,研究結(jié)果表明茯苓采用不同初加工方法對(duì)多糖含量有極顯著影響,發(fā)汗切制法高于趁鮮切制法,對(duì)三萜類成分無顯著影響。李習(xí)平等[8]采用高效液相色譜法測(cè)定各種不同茯苓加工品中茯苓酸的含量,發(fā)現(xiàn)茯苓皮中茯苓酸的含量大于茯苓,且經(jīng)蒸制后兩者的含量均明顯降低,其中生切品＞傳統(tǒng)法蒸品＞高壓蒸品。張平等[9]以傳統(tǒng)“發(fā)汗”、水蒸氣蒸制、鮮茯苓直接切制處理的茯苓為研究對(duì)象,對(duì)不同預(yù)處理方式下的茯苓品質(zhì)、干燥動(dòng)力學(xué)展開系統(tǒng)研究。結(jié)果表明：①傳統(tǒng)“發(fā)汗”處理茯苓的水溶性多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)是鮮茯苓直接切制的1.5倍、水蒸氣蒸制的1.7倍,水蒸氣蒸制處理的水溶性多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著低于鮮茯苓直接切制；②傳統(tǒng)“發(fā)汗”處理茯苓的三萜質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著低于鮮茯苓直接切制及水蒸氣蒸制,水蒸氣蒸制與鮮茯苓直接切制間無顯著差異；通過適當(dāng)控制“發(fā)汗”時(shí)間、“發(fā)汗”溫度,可保持茯苓三萜含量不發(fā)生顯著降低；③傳統(tǒng)“發(fā)汗”處理茯苓的成品顯著變白,色澤改善；水蒸氣蒸制處理茯苓的成品顯著變黃、變紅,色澤變差。張衛(wèi)鵬[10]在統(tǒng)一茯苓丁外形、含水率等初始狀態(tài)參數(shù)下,對(duì)自然晾曬、微波干燥、熱風(fēng)干燥、氣體射流干燥、控溫控濕干燥、紅外熱風(fēng)干燥、真空脈動(dòng)等7種干燥技術(shù)21個(gè)干燥條件進(jìn)行評(píng)價(jià),綜合對(duì)比干燥效率、破碎率、醇溶性浸出物含量、能耗系數(shù)指標(biāo)。結(jié)果表明,紅外干燥醇溶性浸出物含量較高,約為3.69～4.07 mg/g,真空脈動(dòng)干燥茯苓破碎率低,約為3.28%～3.51%。楊武德等[11]采用苯酚－硫酸法測(cè)定不同炮制方法制成的茯苓總糖及多糖的含量,結(jié)果表明,炮制方法不同茯苓中總糖及多糖的含量有明顯差異,含量從高到低依次為米湯制＞明礬米湯制＞土炒＞朱砂制2＞朱砂制1＞生品。與生品相比較,炮制后茯苓的總糖及多糖含量顯著性增加。

2 成分分析法

茯苓中的化學(xué)成分主要包括三萜類、多糖和其他成分如甾體類、氨基酸、揮發(fā)油、膽堿、鉀鹽等微量元素[12],目前多以茯苓多糖、茯苓酸含量的高低作為評(píng)價(jià)茯苓質(zhì)量的指標(biāo)。

2.1 三萜類

目前從茯苓中提取分離的三萜類化合物將近80種,主要是羊毛甾型三萜化合物,包括羊毛甾-8-烯型三萜、羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜、3,4-開環(huán)－羊毛甾-7,9(11)－二烯型三萜、3,4-開環(huán)－羊毛甾-8-烯型三萜等四類[13]。目前研究人員多采用HPLC、RP-HPLC等方法分析茯苓中的三萜類成分。具體分析方法見表1。

表1 三萜成分的分析方法

續(xù)表1 三萜成分的分析方法

2.2 多糖類成分分析方法

茯苓多糖類成分主要為β-茯苓聚糖(占93%左右)以及羧甲基茯苓多糖、木聚糖、茯苓次聚糖、μ-茯苓多糖、f-茯苓多糖、(1,3)-(1,6)-β-D-葡聚糖、纖維素等[23]。多糖成分分析方法見表2。

表2 多糖成分的分析方法

2.3 其他成分分析法

表3 其他成分的分析方法

3 茯苓化學(xué)成分體內(nèi)代謝研究

3.1 藥物動(dòng)力學(xué)研究

中藥藥代動(dòng)力學(xué)是定量研究中藥及復(fù)方在體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄的過程,運(yùn)用數(shù)學(xué)原理和方法闡述中藥及復(fù)方在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)規(guī)律的學(xué)科。宋宗華等[29]采用HPCL方法測(cè)定大鼠灌胃給予茯苓素混合提取物后,血漿中去氫土莫酸的達(dá)峰時(shí)間約為2 h,峰濃度為(10.4±1.4)μg/mL,藥時(shí)曲線下面積為32.6μg·mL-1·h-1。尹連紅[30]通過大鼠灌胃和靜脈注射給予茯苓新酸A后,采用LC-MS/MS法建立血漿中茯苓新酸A的測(cè)定方法,并對(duì)不同劑量的茯苓新酸A進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究。沈嬋娟[31]采用2種動(dòng)物模型對(duì)茯苓乙醇提取物主要有效成分進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究,比較茯苓三萜主要有效成分在正常大鼠與腎病綜合征模型大鼠體內(nèi)代謝過程,結(jié)果表明正常大鼠體內(nèi)茯苓酸和去氫土莫酸吸收、分布較快,吸收量較大,消除較快,去氫茯苓酸較難檢出。Feng Xiao等[32]通過LC-MS方法比較大鼠灌胃給予茯苓提取物和桂枝茯苓膠囊后,3種茯苓三萜類化合物的藥物動(dòng)力學(xué)特征的差異。錢琪等[33]采用大鼠灌胃給予茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮提取物,利用 UHPLC-Q-TOFMS/MS技術(shù)測(cè)定大鼠血漿中茯苓新酸B、去氫土莫酸、茯苓新酸A、豬苓酸C、茯苓新酸AM、去氫茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸的濃度,結(jié)果表明茯苓新酸AM在各組中均無吸收,茯苓新酸B、去氫土莫酸、茯苓新酸A、豬苓酸C、去氫茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸在茯苓皮組中吸收量最大。

3.2 血清藥物化學(xué)研究

中藥血清藥物化學(xué)依據(jù)中藥經(jīng)口給藥的特點(diǎn),以口服給藥后血清為樣品,從入血成分角度對(duì)中藥進(jìn)行研究,是近年來發(fā)展迅速、科學(xué)性和系統(tǒng)性很強(qiáng)的一種研究方法[34]。錢琪[35]采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù),分析茯苓皮在大鼠血漿、膽汁和尿液中的吸收組分和代謝物,共鑒定出15種主要吸收組分,按結(jié)構(gòu)分為4類,其中3類分別以茯苓酸、茯苓新酸A和去氫土莫酸為母藥；初步鑒定102種代謝物成分,主要代謝類型為甲基化、氧化、水解、氫化和葡萄糖醛酸結(jié)合等,為茯苓皮體內(nèi)代謝過程的闡明奠定了基礎(chǔ)。沈嬋娟[31]建立茯苓乙醇提取物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物含藥血清和空白血清的指紋圖譜,通過對(duì)比分析,發(fā)現(xiàn)雄性大鼠的含藥血清中有12種移行成分,其中7種為茯苓三萜原型,5種為代謝產(chǎn)物；雌性大鼠中有10種移行成分,其中6種為茯苓三萜的原型,4種為代謝產(chǎn)物。

4 結(jié)語(yǔ)

目前,茯苓的加工炮制工藝主要以傳統(tǒng)加工模式為主,現(xiàn)有研究主要集中在具體加工環(huán)節(jié)技術(shù)工藝探索改良,產(chǎn)地加工技術(shù)操作規(guī)范。茯苓炮制工藝的發(fā)汗環(huán)節(jié)缺乏科學(xué)、系統(tǒng)的評(píng)價(jià)指標(biāo),新技術(shù)應(yīng)用也欠佳,因此,有必要對(duì)茯苓進(jìn)行全面系統(tǒng)研究,揭示炮制原理和規(guī)律,采用新技術(shù)、新設(shè)備系統(tǒng)研究發(fā)汗、蒸煮、干燥等加工環(huán)節(jié)對(duì)茯苓品質(zhì)的影響,考察傳統(tǒng)炮制工藝與現(xiàn)代化加工技術(shù)對(duì)藥效的影響,建立茯苓炮制技術(shù)規(guī)范和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

在成分分析方面,研究主要集中在三萜類的茯苓酸、去氫茯苓酸等,對(duì)茯苓多糖成分的研究較少?，F(xiàn)代藥理研究表明,茯苓多糖具有抗衰老、抗腫瘤等[36]作用,因此,深入加強(qiáng)茯苓多糖化學(xué)成分的技術(shù)分析,建立更高的茯苓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在體內(nèi)代謝方面,目前報(bào)道的針對(duì)茯苓藥材的體內(nèi)代謝研究較少,主要集中在三萜類化學(xué)成分的動(dòng)力學(xué)研究,其研究方法主要有HPLC法、LC-MS/MS法等。

中藥炮制是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵所在,也是影響產(chǎn)品質(zhì)量、藥效的重要因素。本文對(duì)目前茯苓加工炮制現(xiàn)狀、主要化學(xué)成分分析方法和體內(nèi)代謝的研究情況進(jìn)行了初步整理,以期為茯苓炮制的現(xiàn)代化研究、產(chǎn)業(yè)鏈的開發(fā)提供參考。