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    兩種分子診斷技術(shù)對(duì)提高結(jié)核病病原學(xué) 檢測(cè)陽性率的評(píng)價(jià)研究

    2019-10-18 05:15:20宋紅煥邵燕李燕李國莉陳誠竺麗梅陸偉
    結(jié)核與肺部疾病雜志 2019年3期
    關(guān)鍵詞:病原學(xué)分子生物學(xué)恒溫

    宋紅煥 邵燕 李燕 李國莉 陳誠 竺麗梅 陸偉

    結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類健康的呼吸道傳染疾病[1],目前結(jié)核病的主要診斷手段有實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、影像學(xué)及免疫學(xué)輔助檢查。萋-尼染色法因操作簡單、成本低、生物安全要求較低等因素,目前仍廣泛應(yīng)用于各級(jí)結(jié)核病定點(diǎn)診療機(jī)構(gòu),但因其敏感度較低,痰標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌只有大于10 000條/ml方可檢出,敏感度僅為30%左右[2-3]。如此,一方面造成漏診誤診,導(dǎo)致患者的病情加重;另一方面患者的傳染期延長,對(duì)人群健康造成了極大的威脅。所以,采用適宜的技術(shù)提高病原學(xué)陽性率對(duì)于患者的早期診斷和治療非常重要。2017年7月,江蘇省在全省范圍內(nèi)推廣分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù),主要是基因芯片、線性探針、半巢式全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)(以下簡稱:GeneXpert技術(shù))、恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸技術(shù)(以下簡稱:恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù))。其中基因芯片與線性探針主要用于市級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行耐藥結(jié)核病篩查;GeneXpert與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)主要用于縣(區(qū))級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),以發(fā)現(xiàn)結(jié)核病患者。因2016—2017年江蘇省部分縣(區(qū))根據(jù)項(xiàng)目要求陸續(xù)開展分子檢測(cè),故本文選取2015年數(shù)據(jù)為基線,與2018年數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,綜合評(píng)價(jià)GeneXpert技術(shù)與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)兩種分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)對(duì)結(jié)核病病原學(xué)陽性率的提高水平及其檢測(cè)效能。

    材料和方法

    一、資料來源

    從《中國疾病預(yù)防控制結(jié)核病專報(bào)系統(tǒng)》常規(guī)監(jiān)測(cè)報(bào)表肺結(jié)核患者登記情況統(tǒng)計(jì)獲取江蘇省23個(gè)使用GeneXpert技術(shù)的縣(區(qū)) [以下簡稱A類縣(區(qū))]和46個(gè)使用恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的縣(區(qū))[以下簡稱B類縣(區(qū))]2018年活動(dòng)性結(jié)核病患者信息(單純結(jié)核性胸膜炎除外),以及全年確診活動(dòng)性肺結(jié)核患者的總例數(shù)。同樣的方法獲取2015年(尚未推廣分子生物學(xué)技術(shù))兩類縣(區(qū))數(shù)據(jù)。

    二、江蘇省縣(區(qū))級(jí)定點(diǎn)醫(yī)院分子檢測(cè)技術(shù)使用情況

    A類縣(區(qū)):江蘇省23個(gè)使用GeneXpert技術(shù)的縣區(qū),該類縣(區(qū))臨床路徑為結(jié)核病疑似患者首先進(jìn)行痰涂片檢測(cè),涂片陰性且綜合影像學(xué)、免疫學(xué)、臨床癥狀等高度疑似結(jié)核病患者采用GeneXpert技術(shù)進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè),同時(shí)進(jìn)行痰培養(yǎng)檢測(cè)。

    B類縣(區(qū)):江蘇省46個(gè)使用恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的縣(區(qū)),該類縣(區(qū))臨床路徑為結(jié)核病疑似患者首先進(jìn)行痰涂片檢測(cè),涂片陰性且綜合影像學(xué)、免疫學(xué)、臨床癥狀等高度疑似結(jié)核病患者采用恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè),同時(shí)進(jìn)行痰培養(yǎng)檢測(cè)。

    兩類縣(區(qū))結(jié)核病疑似患者綜合細(xì)菌性檢測(cè)、影像學(xué)、免疫學(xué)、臨床癥狀等確診是否為結(jié)核病患者;病原學(xué)陽性患者為痰涂片、痰培養(yǎng)或分子生物學(xué)3種技術(shù)聯(lián)合檢測(cè),任何一種技術(shù)陽性者(分子檢測(cè)陽性且培養(yǎng)陽性者計(jì)入分子檢測(cè)陽性數(shù),不重復(fù)記錄在培養(yǎng)陽性患者人數(shù)中)。為方便統(tǒng)一比較,故在2015年和2018年數(shù)據(jù)中均將單純結(jié)核性胸膜炎排除,并剔除病理檢測(cè)陽性患者,分別獲取兩類縣(區(qū))2018年病原學(xué)陽性患者例數(shù),以及3種方法分別檢出陽性患者例數(shù)與陽性率,并與2015年(尚未推廣分子生物學(xué)技術(shù))的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。比較兩類縣(區(qū))2015與2018年病原學(xué)陽性率以及2018年推廣分子生物學(xué)技術(shù)后,兩類縣(區(qū))的病原學(xué)陽性率。

    三、試劑與材料

    痰培養(yǎng)采用L-J羅氏固體培養(yǎng)法,培養(yǎng)基購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司,GeneXpert技術(shù)試劑盒購自美國賽沛公司,恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)試劑盒購自廣州迪澳生物科技有限公司,試劑均由江蘇省疾病預(yù)防控制中心統(tǒng)一招標(biāo)采購下發(fā)至各個(gè)縣(區(qū))。

    四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    使用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料的組間比較采用卡方檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、兩類縣(區(qū))不同年份臨床確診肺結(jié)核患者的病原學(xué)陽性率比較

    比較兩類縣(區(qū))2015年與2018年病原學(xué)陽性率,發(fā)現(xiàn)兩種分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)肺結(jié)核診斷病原學(xué)陽性率均有明顯的提高,其中A類縣(區(qū))病原學(xué)陽性率從27.8%提高至52.9%,B類縣(區(qū))陽性率從33.0%提高至50.6%。兩類縣(區(qū))2015年與2018年病原學(xué)陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1270.00,P=0.000;χ2=860.00,P=0.000);分別比較2015年和2018年兩類縣(區(qū))的病原學(xué)陽性率, 2015年B類縣(區(qū))病原學(xué)陽性率高于A類縣(區(qū)),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=80.10,P=0.000);2018年推廣分子生物學(xué)技術(shù)后, A類縣(區(qū))病原學(xué)陽性率高于B類縣(區(qū)),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.60,P=0.001)。

    二、2018年兩類縣(區(qū))活動(dòng)性肺結(jié)核患者不同檢測(cè)技術(shù)病原學(xué)檢測(cè)陽性率

    2018年A類縣(區(qū))確診活動(dòng)性肺結(jié)核患者8176例,其中病原學(xué)陽性患者4327例(包括涂片3117例,痰培養(yǎng)116例,GeneXpert技術(shù)1094例),病原學(xué)陽性率為52.9%(涂片38.1%,痰培養(yǎng)1.4%,GeneXpert 13.4%),GeneXpert技術(shù)檢測(cè)陽性占總病原學(xué)陽性的比率為25.3%(1094/4327);B類縣(區(qū))確診活動(dòng)性肺結(jié)核患者12 196例,其中病原學(xué)陽性患者6171例(包括涂片4823例,痰培養(yǎng)461例,恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)887例)病原學(xué)陽性率分別為50.6%(涂片39.5%,痰培養(yǎng)3.8%,恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)7.3%),恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)陽性占總病原學(xué)陽性的比率為14.4%(887/6171),見表2。

    討 論

    近些年恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和GeneXpert兩種分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)在基層實(shí)驗(yàn)室得到了普遍推廣[4],恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)通過聚合酶及特異性引物在恒溫條件下對(duì)標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸片段進(jìn)行特異性擴(kuò)增, 擴(kuò)增產(chǎn)物與核酸染料結(jié)合后發(fā)出檢測(cè)信號(hào)由此判斷標(biāo)本中是否存在病原體,該技術(shù)具有較高的敏感度和特異度[5-6]。GeneXpert技術(shù)使用全自動(dòng)半巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR,該技術(shù)針對(duì)結(jié)核分枝桿菌利福平耐藥基因rpoB基因區(qū)設(shè)定引物、探針,擴(kuò)增熒光檢測(cè)其是否發(fā)生基因突變,檢測(cè)標(biāo)本中是否含有結(jié)核分枝桿菌及是否對(duì)利福平耐藥[7]。近年來國內(nèi)多中心試驗(yàn)驗(yàn)證評(píng)估結(jié)果顯示,GeneXpert技術(shù)檢測(cè)結(jié)核病的敏感度為96%~99%,特異度為86%~90%[8],恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)結(jié)核病的敏感度為83%~89%,特異度為92%~94%[5]。

    表1 兩類縣(區(qū))不同年份臨床確診肺結(jié)核患者的病原學(xué)陽性率統(tǒng)計(jì)

    表2 2018年兩類縣(區(qū))活動(dòng)性肺結(jié)核患者不同檢測(cè)技術(shù)病原學(xué)檢測(cè)陽性率統(tǒng)計(jì)

    本研究中主要關(guān)注兩種技術(shù)在臨床診斷中病原學(xué)陽性率的提高,使用恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的縣(區(qū))陽性率從33.0%提高至50.6%,使用GeneXpert技術(shù)的縣區(qū)病原學(xué)陽性率從27.8%提高至52.9%,分析2018年兩類縣區(qū)病原學(xué)陽性率發(fā)現(xiàn)兩種技術(shù)對(duì)當(dāng)?shù)氐牟≡瓕W(xué)陽性率均有一定程度提高,GeneXpert技術(shù)與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)占總病原學(xué)陽性比率分別為25.3%與14.4%,其次2018年相比于2015年,兩類縣(區(qū))的痰涂片陽性率也有一定程度的提高,A類縣區(qū)由27.8%提高至38.1%,B類縣區(qū)由33.0%提高至39.5%,另外涂陰患者的痰培養(yǎng)對(duì)病原學(xué)陽性率也有部分貢獻(xiàn),故痰涂片、痰培養(yǎng)、分子檢測(cè)三種檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)兩類縣區(qū)病原學(xué)陽性率的明顯提高有重要意義。

    總之,兩種分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)具有安全、高效、準(zhǔn)確的特點(diǎn),為結(jié)核病的早診斷、早治療提供了新依據(jù)[9],各級(jí)實(shí)驗(yàn)室可因地制宜選取適宜的技術(shù)開展結(jié)核病分子生物學(xué)檢測(cè)。

    另外,分子生物學(xué)可檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌核酸,但是不能區(qū)別死菌和活菌,故建議在實(shí)際工作中同步開展痰培養(yǎng),一方面提高結(jié)核病診斷能力,另一方面也為后期菌種鑒定與藥物敏感性試驗(yàn)做準(zhǔn)備。細(xì)菌學(xué)方法與分子生物學(xué)技術(shù)聯(lián)合診斷、相互補(bǔ)充,可以為臨床診斷獲得較高的病原學(xué)陽性率,有利于對(duì)患者順利開展進(jìn)一步診療。

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