飼用復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及腸道形態(tài)和消化酶活性的影響

劉 偉 ，夏 磊，王江水，蘇長(zhǎng)城，郭秀云，刑新榮，胡衛(wèi)華，占秀安*

（1.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310058；2.舟山農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全管理中心，浙江舟山 316000；3.江蘇悠恒生物技術(shù)有限公司，江蘇海安 226600）

隨著動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究的深入和現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，在配合飼料中使用生物制劑越來(lái)越受到人們重視，其中酶制劑備受關(guān)注。酶是一類具有生物催化活性的蛋白質(zhì)，飼料中所含的多種營(yíng)養(yǎng)成分，除水分、礦物質(zhì)、維生素外，多為機(jī)體難以吸收的大分子形式，必須在消化道內(nèi)經(jīng)過(guò)酶的作用被水解為小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)而被動(dòng)物吸收利用。配合飼料由不同原料組成，其化學(xué)物理結(jié)構(gòu)均不同，而酶具有專一性，因此要獲得最佳效果，必須使用多酶系統(tǒng)，復(fù)合酶制劑應(yīng)運(yùn)而生。復(fù)合酶制劑是由2 種或2種以上的酶復(fù)合而成，包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶等。復(fù)合酶能夠通過(guò)降解飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，如非淀粉多糖（Non-starch Polysaccharides，NSP）、胰蛋白酶抑制因子等，從而促進(jìn)消化道內(nèi)源酶的分泌并提高其活性[1]，改善胃腸道發(fā)育及后腸微生物區(qū)系，進(jìn)而促進(jìn)養(yǎng)分的消化吸收。國(guó)內(nèi)外關(guān)于復(fù)合酶在單胃動(dòng)物飼糧中的添加效果主要表現(xiàn)為提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能和飼料利用、提高養(yǎng)分的消化率和代謝能、促進(jìn)腸道發(fā)育等方面[2-5]。本試驗(yàn)旨在研究玉米-豆粕型日糧中添加復(fù)合酶制劑（低溫淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、α-半乳糖苷酶和果膠酶）對(duì)嶺南黃羽肉雞生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、腸道形態(tài)、消化酶活性以及礦物元素利用的影響，旨在為生產(chǎn)實(shí)踐提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 酶制劑由江蘇悠恒生物技術(shù)有限公司提供，主要包括低溫淀粉酶3 000 U/g，植酸酶10 000 U/g和固態(tài)發(fā)酵的天然復(fù)合酶（商品名為原創(chuàng)TY100），其中原創(chuàng)TY100 成分包括木聚糖酶8 000 U/g、β-葡聚糖酶6 000 U/g、果膠酶1 000 U/g、蛋白酶8 000 U/g、β-甘露聚糖酶150 U/g、纖維素酶180 U/g 和α-半乳糖苷酶200 U/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)日糧 將420 只健康的1 日齡嶺南黃肉雞分為2 個(gè)處理組，每組3 個(gè)重復(fù)，每重復(fù)70 只（公母混合，數(shù)量隨機(jī)）。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，復(fù)合酶組在基礎(chǔ)日糧中添加300 mg/kg 低溫淀粉酶、500 mg/kg原創(chuàng)TY100 和100 mg/kg 植酸酶。試驗(yàn)分前期（1～21 d）和后期（22～50 d）共50 d。試驗(yàn)日糧參考《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY-T33-2004）配制，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在浙江嘉興星健禽業(yè)養(yǎng)殖有限公司進(jìn)行。飼養(yǎng)開(kāi)始前，對(duì)雞舍欄位設(shè)備、地面和料盤料筒飲水器進(jìn)行徹底清洗，用甲醛和高錳酸鉀進(jìn)行熏蒸消毒。雞舍溫度第1 周控制在35℃左右，隨后按每周降2～3℃，逐漸降低至22℃ 左右，并進(jìn)行常規(guī)肉雞免疫程序。肉雞采用木屑?jí)|料地面平養(yǎng)方式進(jìn)行飼養(yǎng)，全期24 h 光照，自由采食和飲水。每天記錄雞舍溫濕度、死亡雞只數(shù)及重量。

1.4 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 生長(zhǎng)性能與飼料利用 按重復(fù)對(duì)各處理組1 日齡雛雞進(jìn)行全群稱重，作為試驗(yàn)初始重，并分別于第22、51 天08:00 按重復(fù)全群空腹稱重，統(tǒng)計(jì)肉雞生長(zhǎng)前期和后期采食量，并計(jì)算各生長(zhǎng)階段的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和耗料增重比（F/G）。

1.4.2 血清生化指標(biāo) 分別于第22、51 天從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取8 只（共48 只）肉公雞，提前12 h 禁食但不禁水，采血于真空促凝管中，待血清析出時(shí)，3 000 r/min，離心10 min，吸取上清液分裝于1.5 mL 離心管中，置于-80℃保存待測(cè)；所采集的血清用于鈣（Ca）、磷（P）、鐵（Fe）、銅（Cu）、鋅（Zn）、尿酸（UA）含量的測(cè)定，測(cè)定過(guò)程嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4.3 十二指腸形態(tài)結(jié)構(gòu) 頸部放血致死后，迅速切開(kāi)腹部，分離各腸段，于十二指腸中部取2 cm 左右腸段，用生理鹽水沖洗食糜后，置于4%甲醛溶液固定，保存用于切片制作；取固定于甲醛溶液的十二指腸腸段，分別經(jīng)過(guò)酒精脫水，石蠟包埋，連續(xù)橫斷切片（5 μm）和HE 染色處理后，采用Motic Images 圖像分析系統(tǒng)，每個(gè)樣品觀察3 張不連續(xù)切片，各測(cè)10 個(gè)絨毛高度和隱窩深度，測(cè)量后計(jì)算出平均值。

1.4.4 十二指腸內(nèi)容物消化酶活力 取十二指腸內(nèi)容物，裝入凍存管內(nèi)，置于液氮保存。將凍存的十二指腸內(nèi)容物按重量體積比w:v=1:4 加入4℃生理鹽水，充分混勻后3 000 r/min，4℃離心10 min，取上清液于-20℃保存，用于淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶的測(cè)定，試劑配制和操作步驟均按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)先用Excel 作初步處理，而后采用SPSS 20.0 軟件中獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P＜0.05 表示差異顯著，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響 由表2 可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，飼用復(fù)合酶制劑提高了21 d 末重和前期ADG（P＜0.05），降低了后期和全期的F/G（P＜0.05），但對(duì)各階段ADFI 及后期和全期的ADG 均無(wú)顯著影響。

2.2 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響 由表3 可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，在飼養(yǎng)前期，飼用復(fù)合酶制劑提高了血清P、Fe、Zn 含量（P＜0.05），血清Ca、Cu 含量有所提高，血清UA 含量有所下降，但均未產(chǎn)生顯著差異。在飼養(yǎng)后期，飼用復(fù)合酶制劑提高了血清P 含量（P＜0.05），降低了血清UA 含量（P＜0.05），也一定程度提高了血清Ca、Fe、Cu、Zn 含量（P＞0.05）。

表2 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 %

表3 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

2.3 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞十二指腸消化酶活力的影響 由表4 可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，添加復(fù)合酶制劑提高了前期十二指腸內(nèi)容物中淀粉酶和胰蛋白酶活力及后期淀粉酶的活力（P＜0.05），但對(duì)前期脂肪酶活力、后期胰蛋白酶和脂肪酶活力均無(wú)顯著影響。

表4 復(fù)合酶制劑對(duì)十二指腸內(nèi)容物消化酶活性的影響

2.4 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞十二指腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 由表5 可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，飼用復(fù)合酶制劑提高了50 d 肉雞十二指腸黏膜絨毛高度（P＜0.05），并降低了隱窩深度（P＜0.05），同時(shí)顯著提高了絨毛高度和隱窩深度的比值（V/C）。

表5 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞50 d 十二指腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

3 討 論

3.1 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 關(guān)于復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)和飼料利用影響的結(jié)果不盡相同，總體來(lái)說(shuō)，添加復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞的生長(zhǎng)具有正面效用。呂秋鳳等[6]報(bào)道，日糧中添加335 mg/kg 復(fù)合酶（木聚糖酶、甘露聚糖酶、纖維素酶）提高了肉雞ADG，降低了F/G，提高了肉雞對(duì)養(yǎng)分的利用率。Kaczmarek 等[7]報(bào)道，玉米-豆粕型飼糧中添加NSP 酶顯著提高了肉雞ADG 和飼料轉(zhuǎn)化效率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，玉米-豆粕型飼糧中添加復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和飼料利用具有改善效果，尤其對(duì)飼養(yǎng)前期ADG 和飼養(yǎng)后期及全期的F/G 有顯著效果。

本試驗(yàn)中所用復(fù)合酶制劑的主要成分包括低溫淀粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、果膠酶、蛋白酶、β-甘露聚糖酶、纖維素酶、α-半乳糖苷酶和植酸酶。采用玉米-豆粕型飼糧，復(fù)合酶制劑可將飼料中的NSP 分解為動(dòng)物可吸收利用的還原糖，并可破壞植物細(xì)胞壁，使之包圍的淀粉、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)等養(yǎng)分得以釋放并為動(dòng)物利用，同時(shí)降解飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，增強(qiáng)淀粉和蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高養(yǎng)分利用率，最終提高肉雞的生長(zhǎng)性能和飼料利用。

3.2 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響 植酸是飼料中廣泛存在的一種抗?fàn)I養(yǎng)因子，除了自身不能被分解利用外，植酸還可以通過(guò)螯合作用降低動(dòng)物對(duì)Zn、Mn、Fe、Ca 等礦物元素和蛋白質(zhì)的利用率。添加植酸酶可以降低植酸與礦物元素的螯合作用，使礦物元素得以釋放，從而提高礦物元素的消化吸收。本試驗(yàn)中復(fù)合酶制劑顯著提高了前期血清Fe、Zn 和后期P、Cu 含量，血清Ca 和P 含量也有所提高，這可能與植酸酶的添加有關(guān)。有研究表明，在低磷飼糧中添加植酸酶可顯著提高動(dòng)物血清中微量元素含量，且血漿中無(wú)機(jī)磷含量隨日糧植酸酶的添加而增加[8-9]。

UA 是家禽蛋白質(zhì)代謝的主要終產(chǎn)物，血清中UA水平可以反映蛋白質(zhì)的代謝水平。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加復(fù)合酶制劑顯著降低了后期血清UA 含量，可能是由于蛋白酶增強(qiáng)了小腸對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收，從而提高了蛋白質(zhì)的利用率，增加了蛋白質(zhì)沉積。Hajati 等[10]報(bào)道，日糧中添加500 mg/kg 復(fù)合酶（阿拉伯木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶、半纖維素酶、α-淀粉酶、α-半乳糖苷酶）顯著降低了肉雞血清中UA 水平。

3.3 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞十二指腸消化酶活力的影響 有報(bào)道指出，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加α-淀粉酶飼喂至7日齡后，改飼基礎(chǔ)日糧，發(fā)現(xiàn)14 日齡小腸內(nèi)容物中淀粉酶活性顯著下降[11]，提示外源淀粉酶對(duì)內(nèi)源酶活性影響有后續(xù)效應(yīng)。進(jìn)一步研究表明，飼糧中添加淀粉酶提高了肉雞前腸內(nèi)容物淀粉酶、總蛋白酶和胰蛋白酶活性，但未影響脂肪酶活性[11]。本試驗(yàn)中，添加復(fù)合酶顯著提高了十二指腸內(nèi)容物中淀粉酶和前期胰蛋白酶活性，而對(duì)脂肪酶活性無(wú)影響。其原因可能是添加外源淀粉酶減輕了淀粉大分子空間占位對(duì)蛋白質(zhì)消化的阻隔作用，從而增加了蛋白質(zhì)水解酶的分泌。而脂肪消化是在水脂界面上進(jìn)行的，需要膽鹽和輔脂酶的參與，可能受淀粉空間位阻作用較小，所以添加外源淀粉酶不影響脂肪酶活性。

3.4 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞十二指腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 小腸是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所，小腸的絨毛高度和隱窩深度是衡量其消化吸收功能的主要指標(biāo)，而小腸的正常結(jié)構(gòu)和功能是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被充分吸收的基本保證。小腸絨毛是小腸吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要部位；腸道的隱窩是腸道絨毛基部上皮下陷至固有層內(nèi)形成的管狀結(jié)構(gòu)，組成細(xì)胞多為未分化細(xì)胞，可不斷分化補(bǔ)充脫落或受損的腸道絨毛細(xì)胞，因此隱窩深度的變化能夠反映出腸上皮細(xì)胞的增殖率和成熟情況，通常隱窩深度降低表明腸道分泌功能提高，吸收能力增強(qiáng)[5]。

王冬群等[12]報(bào)道，與正常能量值的小麥飼糧相比，低能量日糧十二指腸絨毛高度降低，添加NSP 復(fù)合酶（木聚糖酶、葡聚糖酶）后，十二指腸絨毛高度有增加趨勢(shì)；低能量小麥飼糧空腸隱窩深度顯著提高，添加NSP 復(fù)合酶后空腸隱窩深度顯著降低。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，復(fù)合酶組絨毛高度顯著提高，隱窩深度顯著降低，V/C 值顯著升高，其原因可能是復(fù)合酶的添加增強(qiáng)了養(yǎng)分的消化吸收，從而促進(jìn)腸道生長(zhǎng)發(fā)育，改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，飼用復(fù)合酶制劑促進(jìn)了肉雞的腸道絨毛發(fā)育，增強(qiáng)了消化酶活性，提高了飼料養(yǎng)分利用率，而達(dá)到降低F/G 的效果。