HPLC法同時(shí)測(cè)定陳香露白露片中的6種成分

高宇明 袁文洪 謝 艷 何 琴 吳秀清

四川省資陽市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川 資陽 641300

陳香露白露片處方由甘草、次硝酸鉍、陳皮、碳酸鎂、川木香、氧化、大黃、碳酸氫鈉、石菖蒲等九味藥組成，具有健胃和中，理氣止痛的功效，臨床常用于胃潰瘍，糜爛性胃炎，胃酸過多，急性、慢性胃炎，腸胃神經(jīng)官能癥和十二指腸炎等。目前全國有96家藥品生產(chǎn)企業(yè)取得了陳香露白露片的藥品生產(chǎn)批件。其中執(zhí)行的藥品標(biāo)準(zhǔn)以《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第八冊(cè)(WS3-B-1553-93)為主。另有部分企業(yè)增加薄膜衣規(guī)格后申報(bào)了新的藥品標(biāo)準(zhǔn)，但涉及檢驗(yàn)部分內(nèi)容均較原《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》無實(shí)質(zhì)區(qū)別。檢驗(yàn)項(xiàng)目為性狀、鈉鹽鑒別、檢查(片重、微生物限度、崩解時(shí)限)、次硝酸鉍含量測(cè)定，缺少對(duì)藥材的含量檢測(cè)。

目前，有多種方法用于檢測(cè)處方中各藥材的有效成分，如楊秀梅等用高效液相色譜法測(cè)定陳皮中的橙皮苷、川陳皮素、桔皮素的含量[1]；劉香南等用高效液相色譜法測(cè)定甘草中甘草苷、異甘草苷、甘草次酸、甘草素、異甘草素、甘草查爾酮A的含量[2]。直接測(cè)定陳香露白露片中藥味功效成分的報(bào)道較少，有李應(yīng)芬等用高效液相色譜法測(cè)定陳香露白露片中甘草酸的含量[3]，柳夢(mèng)婷等用高效液相色譜法檢測(cè)石菖蒲中α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚的含量[4]。但未見有同時(shí)測(cè)定陳香露白露片中各藥味有效成分的報(bào)道，無法對(duì)藥品的質(zhì)量進(jìn)行較好的控制。因此，實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定處陳皮、川木香、石菖蒲的主要有效成分，以考察藥品質(zhì)量。陳皮中的主要有效成分為揮發(fā)油和黃酮類，其中橙皮苷、新橙皮苷、川陳皮素在陳皮中含量較高，活性也比較強(qiáng)。川木香的主要活性成分為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯。石菖蒲主要有效成分為揮發(fā)油，包括α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、甲基丁香酚等，其中α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚含量較高。故本實(shí)驗(yàn)選取其中的新橙皮苷、橙皮苷、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、木香烴內(nèi)酯進(jìn)行含量測(cè)定，較具有代表性和可操作性。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20AT液相色譜儀(含SPD-20A檢測(cè)器)；XSE205DU型電子分析天平(梅特勒托利多公司)；SB25-12D型超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 材料 從市場(chǎng)上抽取的陳香露白露片，產(chǎn)自全國6家生產(chǎn)企業(yè)的，共計(jì)6批次，詳見表1。新橙皮苷(批號(hào)：111857-201101)、橙皮苷(批號(hào)：110721-201617)、α-細(xì)辛醚(批號(hào)：100298-201203)、β-細(xì)辛醚(批號(hào)：112018-201601)、木香烴內(nèi)酯(批號(hào)：111524-201710)購自中國食品藥品檢定研究院，川陳皮素對(duì)照品(批號(hào)：ST00691020MG，上海詩丹德生物技術(shù)有限公司)。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 混合對(duì)照品溶液的制備 取對(duì)照品新橙皮苷、橙皮苷、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、木香烴內(nèi)酯適量，精密稱定，加50^%乙醇制成濃度分別為,24.778、16.322、5.574、5.226、9.582、6.359 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制的制備 取研細(xì)的陳香露白露片粉末(過三號(hào)篩)約0.2g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加50%乙醇適量，超聲(40 KHz，500 W)提取30 min，放冷，加50%乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液

2.2 色譜條件 Luna C18色譜柱(250 mm×4.60 mm，5 μm；流動(dòng)相甲醇-水，梯度洗脫(0～10 min，55%～55%；10～60 min，55%～95%；60～65 min，95%～95%)；檢測(cè)波長254 nm；流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量40 μL；柱溫30℃。色譜圖見圖1。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，加50%乙醇溶液稀釋制備成6個(gè)濃度的系列混合對(duì)照品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下的條件進(jìn)行測(cè)定。以對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表2，表明各成分在各自的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得其RSD分別為1.25%、1.66%、1.39%、1.08%、1.43%、0.95%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取研細(xì)的陳香露白露片粉末(過三號(hào)篩)，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。于制備后0、2、4、8、16、32 h在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得其RSD分別為2.08%、1.65%、2.32%、2.20%、2.88%、1.54%。表明供試品溶液在32 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表2 各成分線性關(guān)系

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取研細(xì)的陳香露白露片粉末(過三號(hào)篩)，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，分別在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得其RSD分別為0.99%、1.85%、1.52%、1.78%、2.85%、2.12%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取6份已知含量的陳香露白露片粉末(過三號(hào)篩)約0.2g，精密稱定，分別精密加入“2.1.1”項(xiàng)下各單一對(duì)照品適量后，按按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，以外標(biāo)法分別計(jì)算各成分的量，計(jì)算其加樣回收率，結(jié)果見表3。

表3 各成分加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

續(xù)表3

表3 各成分加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含有量測(cè)定 取4批陳香露白露片供試品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液各2份，在“2.2”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算6中成分的含量，結(jié)果見表4。

表4 各成分含量測(cè)定結(jié)果 (mg/g，n=2)

3 分析與討論

3.1 目標(biāo)成分選擇 實(shí)驗(yàn)最初選擇了陳皮、甘草、大黃、川芎、石菖蒲六味藥材中的新橙皮苷、橙皮苷、甘草苷、甘草素、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、橘皮素、木香烴內(nèi)酯、蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚、甘草次酸等十五種有效成分進(jìn)行含量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)部分成分存在與處方組成中其他組分分離度太低、在254 nm下無吸收，或者在200多批次陳香露白露片中基本無檢出，沒有實(shí)際意義。經(jīng)過反復(fù)考察和篩選以后，選取了陳皮、川木香、石菖蒲中的新橙皮苷、橙皮苷、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、木香烴內(nèi)酯進(jìn)行含量測(cè)定方法建立。

3.2 波長選擇 經(jīng)紫外光譜掃描，6中成分在225、249、254等處均有較強(qiáng)吸收。且254 nm下各成分峰形、分離度較高，檢出強(qiáng)度適中，故選擇254 nm為檢測(cè)波長。

3.3 指標(biāo)成分分析 所檢測(cè)的6個(gè)廠家6批次陳香露白露片中，除橙皮苷外，其余五個(gè)成分均有不同程度的未檢出。其中細(xì)辛的指標(biāo)成分細(xì)辛醚檢出率較低，川木香的指標(biāo)成分木香烴內(nèi)酯次之。表明不同廠家之間陳香露白露片的質(zhì)量差異較大。綜上所述，所建立的高效液相色譜方法操作簡單，重復(fù)性好，可在較短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)陳香露白露片中6中成分含量的同時(shí)測(cè)定。因此，該方法可用于陳香露白露片的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)。