液相色譜串聯四級桿質譜聯用測定蘋果中的乙霉威殘留

房崇琴 李紅梅

摘 要：建立了一種液相色譜串聯四級桿質譜聯用測定蘋果中乙霉威殘留的實驗方法。液相色譜儀器上的色譜柱采用安捷倫公司的C18（50mm×2.1mm; 5?m），此方法的流動相是乙腈（A有機相）+甲酸水溶液（0.1%）（B無機相）體積比為60：40作為流動相，磨碎的蘋果樣本經過提取濃縮后，采用液相串聯四級桿質譜檢測器測定蘋果樣本中的乙霉威殘留量，本研究結果表明乙霉威農藥的線性范圍為100～1000ng/mL，在蘋果樣本中乙霉威最低檢出限為0.5?g/kg，平均加標回收率80.2%-85.9%，RSD為3.63%-5.52%。該方法適用于蘋果中乙霉威殘留量的分析。

關鍵詞：乙霉威;液相串聯四級桿質譜;殘留量

乙霉威學名N-3，4-二乙氧苯基氨基甲酸異丙酯是一種效果非常顯著的內吸性殺菌劑，能夠有效殺滅蔬菜水果的等多種病害，乙霉威還有防治作用，防治灰霉病上具有顯著的效果，所以作為一種常用的殺菌劑用在蔬菜水果上面。我國國家標GB 2763-2016《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》里面蘋果沒有限量值，是不允許使用的一種殺菌劑，而在平時的檢測中陽性率比較高，所以本文研究探討液質串聯四級桿聯用儀方法檢測蘋果樣本中乙霉威的殘留量，為日常檢測蘋果中乙霉威殘留量準確快速分析提供了定性定量依據。

一、材料與方法

1.材料和儀器。100μg/mL乙霉威（溶劑：甲醇，北京壇墨質檢科技有限公司）;蘋果（利群超市購買）;乙腈（色譜純）（上海弗霓生物科技有限公司）;甲酸、氯化鈉（分析純）（國藥）;超純水機（Millipore）;高速組織搗碎機OS-1（上海標本模型廠），快速冷凍離心機BIOFUGE（美國熱電）， 帶電噴霧離子源（ESI）的Agilent 6410B 液相色譜-串聯質譜儀 （美國，安捷倫）。

2.實驗方法

（1）液相LC色譜條件。色譜柱：安捷倫公司的C18（50mm×2.1mm; 5?m）柱子，柱溫度35℃;并且設定流動相流速為0.2mL/min;樣品進樣體積：1μL，方法的流動相：乙腈（A有機相）+0.1%甲酸水溶液（B無機相）=60：40，運行時間10min。

（2）MS/MS質譜條件。質譜電噴霧離子源（ESI），掃描方式為正離子模式（+），檢測方式為多反應監(jiān)測MRM模式，乙霉威定量的母離子峰及子離子峰（m/z 268.1和m/z 152.1）。質譜檢測器的毛細管電壓：5000V，干燥氣流速為10L/min，質譜的離子源溫度：700℃。

（3）標準溶液配制。稱取乙霉威標準品0.1mg用色譜純的甲醇溶液分別稀釋為100、200、400、800、1000ng/mL的各個濃度梯度點的標準曲線溶液。

3.樣品制備。準確稱取20g左右磨碎好的蘋果樣本于80mL離心管中，在離心管加入40mL乙腈和5g氯化鈉（分析純），用OS-1高速組織搗碎機勻漿提取1min后放入高速冷凍離心機中離心速率為5000r/min離心5min，離心完畢后取出離心管中上清液20mL，在40℃水浴濃縮至干，殘渣用1mL乙腈溶解，過濾膜供儀器測定。

二、結果與討論

1.LC流動相選擇。實驗中比較了不同流動相對C18色譜柱分離蘋果樣品中乙霉威效果的影響，結果如下：首先乙腈（A有機相）+甲酸水（B無機相）跟甲醇（有機相）+水（無機相）流動相進行了比較，甲醇+水流動相分離乙霉威會出現拖尾現象，分離度達不到實驗要求，乙腈（A有機相）+0.1%甲酸水（B有機相）作為流動相分離度好，達到實驗要求。

2.質譜條件MS-MS的選擇。乙霉威的分子式為C14H21NO4，相對分子質量為267.32，在電噴霧離子源（ESI）中得氫帶正電荷（+）。在質譜中乙霉威容易被轟擊丟失掉氨基甲酸異丙酯碎片（分子量116），所以其子離子檢測為m/z 152.1，乙霉威標準品的ESI（+）質譜圖和MRM圖如下圖1、圖2，因此蘋果樣本中乙霉威殘留量的定性定量采用母離子（m/z 268.1）和子離子（m/z 152.1）。

3.乙霉威檢測方法的線性方程和相關系數

乙霉威按照1.2.3方法配制的五個濃度的標準溶液進行分析檢測，以縱坐標儀器的響應值-橫坐標乙霉威的濃度作回歸曲線。結果顯示：乙霉威標準品濃度在100～1000ng/mL之間標準曲線的線性關系良好，相關系數r2為0.998。

4.乙霉威檢測方法的精密度、回收率和檢測下限。以未檢出乙霉威的蘋果樣本制作本次實驗的空白樣品，在每份空白樣品中分別添加0.5、1、10?g/kg三個水平的加標回收率實驗，每種加標濃度平行試驗進行6次，得到蘋果樣本中乙霉威平均回收率跟相對標準偏差RSD（n=6）見表1，并在實驗中以乙霉威基線的信噪比3為標準，測得樣本中乙霉威標準品的檢出限（LOD）為0.5?g/kg。說明此方法的回收率和精明度能夠達到實驗要求。

5.樣品測定。根據本實驗建立的方法對實際蘋果樣本進行檢測分析，乙霉威標準品色譜圖見下圖3，乙霉威標準品出峰時間在1.65min左右，從圖中可以看出，液質聯用質譜儀分析乙霉威殘留量快速靈敏度高，蘋果樣品的檢測分析在5分鐘之內就能完成。

三、 結語

本文研究建立了蘋果樣本中的乙霉威殘留量的定性定量分析方法。結果如下：樣品經過前處理提取濃縮后，進液相串聯四級桿質譜電噴霧離子源檢測，乙霉威濃度在100～1000ng/mL之間標準曲線的線性關系良好，在蘋果樣本中乙霉威的最低檢出限為0.5?g/kg。本次研究結果能夠為日常檢測蘋果樣本中乙霉威殘留量的定性定量分析提供依據。

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