高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞肉中四環(huán)素類抗生素殘留

劉培勇 張惠

雞肉是人們?nèi)粘?yōu)質(zhì)蛋白攝入的重要來源，對于人體健康有重要意義。但在雞養(yǎng)殖過程中，部分養(yǎng)殖人員因為缺乏專業(yè)知識，對于獸藥的使用不太規(guī)范，獸藥濫用，誤用及不遵守休藥期等現(xiàn)象普遍存在，導(dǎo)致雞肉中獸藥殘留過多，帶來較大的健康威脅。四環(huán)素類抗生素對于新生兒骨骼、牙齒的生長有很大影響。因此，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對雞肉中四環(huán)素類抗生素的檢測具有重要意義。

試驗材料與方法

儀器設(shè)備。高相液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫6410A），色譜柱Acquity Uplc Beh C18（1.7 μm，2.1 mm x100 mm），冷凍離心機(jī)，旋渦振蕩器，氮吹儀、純水凈化機(jī)。

材料與試劑。標(biāo)準(zhǔn)品：四環(huán)素、土霉素、金霉素（美國Sigma公司）；乙腈和甲醇，色譜純（德國Merck公司）；EDTA- 2Na、檸檬酸、Na2HPO4，分析純（成都市科隆化學(xué)有限公司）；去離子水（實驗室一級用水）；固相萃取小柱，Oasis HLB，60 mg/3mL。

試驗方法。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱取三種抗生素51.0mg放到50mL容量瓶，用甲醇溶液溶解定容，配制成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

儀器條件控制：流動相：A- 0.1%甲酸水；B- 0.1%甲酸乙腈。在0- 7 min，90% A線性變化至70%A；7- 8min，70%A線性變化至90%A；8- 10 min，90%A；流速：0.3 mL/ min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：5 μL。質(zhì)譜條件：ESI離子源，正離子掃描；離子源溫度：150 ℃；脫溶劑氣溫度：350 ℃；脫溶劑氣流速：10 L/min；碰撞氣：高純氮氣。

樣品提?。悍Q取雞肉樣品2g（1000 r/min均質(zhì)1min）到50 mL容量瓶中，加入EDCAMcllvainc緩沖溶液8 mL，旋渦振蕩2min，4000 r/min離心10 min（溫度在10 ℃以下）。取出上清液，將剩余溶液重復(fù)提取一次并取出上清液，最后合并兩次提取的上清液。

樣品凈化：取固相萃取柱，依次使用3mL甲醇、3 mL去離子水活化，加入8 mL提取液過柱，先后使用3mL去離子水和3 mL 5%甲醇淋洗，減壓抽干。用5 mL甲醇洗脫，洗脫液于40℃下氮吹至近干，用甲醇定容至1 mL，過0.22μm濾膜上機(jī)測定。

實驗結(jié)果與討論

檢出限。配制濃度為20、50、100、200、400 μg/L的混合空白基質(zhì)加標(biāo)溶液進(jìn)行上機(jī)檢測，通過線性分析，得出回歸方程。使用空白樣品進(jìn)行對照，得出三種抗生素的檢出限：四環(huán)素20 μg/kg，土霉素為30μg/kg，金霉素為10μg/kg。

精密度與回收率。在2.0g雞肉樣品中添加50、100、200μg/L三個濃度水平的抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液，同時進(jìn)行6次平行試驗，計算平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。其結(jié)果見表1。

討論

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞肉中四環(huán)素類抗生素的方法操作簡單，靈敏度高，對儀器設(shè)備的污染較小、基質(zhì)干擾少、適用性強，是一種有效檢測手段。