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    卵巢上皮性癌組織中m iR-338-3p的表達

    2019-09-27 01:07:16張瑞濤史惠蓉劉哲穎張微微姬鵬程王文文
    關(guān)鍵詞:性癌卵巢癌上皮

    張瑞濤,史惠蓉,劉哲穎,張微微,姬鵬程,王文文

    鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科鄭州450052

    微小RNA(microRNAs,miRNAs)突變和異常表達與多種人體腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān),miRNAs可作為癌基因或抑癌基因在腫瘤細胞的惡性生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用[1]。研究[2-3]表明,在胃癌和結(jié)直腸癌組織中miR-338-3p的表達水平明顯低于相應(yīng)的正常組織,miR-338-3p可能與胃癌和結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良相關(guān)。目前,有關(guān)miR-338-3p在卵巢上皮性癌組織中表達的報道較少,本研究采用qRTPCR技術(shù)檢測miR-338-3p在正常卵巢、良性卵巢上皮性腫瘤及卵巢上皮性癌組織中的表達情況,分析其表達與卵巢癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,探討其臨床意義。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來源 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科2012年10月至2015年10月隨訪資料完整的105例手術(shù)新鮮卵巢組織標(biāo)本,其中正常卵巢組織20例,年齡32~69 歲,BMI為20.23 ~31.45 kg/m2;良性卵巢上皮性腫瘤組織20例(漿液性囊腺瘤16例,黏液性囊腺瘤4例),年齡30~72歲,BMI為21.19~32.28 kg/m2;卵巢上皮性癌組織65例,年齡28~76歲,BMI為20.48 ~35.46 kg/m2。3 組患者的年齡、BMI等一般資料均衡。本研究獲得患者或家屬知情同意,并經(jīng)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院道德倫理委員會批準(zhǔn)。入組卵巢上皮性癌患者中位年齡50歲。早期(Ⅰ~Ⅱ期)患者12例,晚期(Ⅲ~Ⅳ期)患者53例;臨床分期(FIGO 2014):Ⅰ期8例,Ⅱ期4例,Ⅲ期48例,Ⅳ期5例;組織分化:高分化38例,低分化27例;組織類型:漿液性癌52例,黏液性癌13例;有腹水49例,無腹水16例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者33例。卵巢上皮性癌患者術(shù)后依據(jù)臨床分期均接受規(guī)范化療(多西他賽聯(lián)合順鉑或卡鉑)3~6個療程,耐藥或復(fù)發(fā)患者采用二線化療藥物(多西他賽、吉西他濱、依托泊苷、脂質(zhì)體、阿霉素、奧沙利鉑等)單藥或聯(lián)合化療。

    1.2 主要試劑 Trizol為美國Invitrogen公司產(chǎn)品,Taqman miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒為美國Applied Biosystems公司產(chǎn)品,Revert aid first strand cDNA合成試劑盒為加拿大Fermentas公司產(chǎn)品,SYBR Green熒光定量PCR試劑盒購自大連TaKaRa公司。

    1.3 m iR-338-3p的qRT-PCR檢測 Trizol提取組織總RNA,純化后以分光光度計定量,取2μg總RNA,參照miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進行反轉(zhuǎn)錄操作,反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物參照SYBR Green熒光定量PCR試劑盒說明進行PCR反應(yīng),以U6為內(nèi)參。PCR所用引物由上海生物工程有限公司合成,引物序列見表1,PCR反應(yīng)體系為:SYBR Premix EX TaqTMⅡ10 μL、上下游引物各 0.8 μL、ROX Reference Dye 0.4 μL、cDNA 模板 2 μL、ddH2O 6 μL,總體積 20 μL。PCR反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性10 min;95℃變性15 s,60℃退火60 s,共40個循環(huán)。實驗重復(fù)3次,相對表達量采用 2-ΔΔCt計算。

    表1 引物序列

    1.4 生存分析 隨訪截至2018年2月底。入組65例卵巢癌患者隨訪時間為16~61個月,中位隨訪時間38個月,研究分析的終點事件分別為死亡和無進展生存。死亡時間定義為隨訪開始至因腫瘤原因而引起死亡的時間;無進展生存時間定義為隨訪開始至因腫瘤原因引起的進展或復(fù)發(fā)時間。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 使用 SPSS 21.0和 GraphPad Prism 7軟件進行數(shù)據(jù)分析和繪圖,miR-338-3p在不同卵巢組織中表達的比較采用單因素方差分析和LSD-t檢驗;以卵巢上皮性癌組織中miR-338-3p表達水平的中位數(shù)為依據(jù),高于中位數(shù)的為高表達,低于中位數(shù)的為低表達。miR-338-3p表達與卵巢上皮性癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系采用χ2檢驗或Fisher精確概率法。Kaplan-Meier法繪制生存曲線,采用Log-rank檢驗分析miR-338-3p表達對卵巢癌患者生存的影響,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 不同卵巢組織中m iR-338-3p的表達 卵巢上皮性癌組織中miR-338-3p的表達明顯低于正常卵巢組織和良性卵巢上皮性腫瘤組織,見表2。

    表2 不同卵巢組織中m iR-338-3p的表達

    2.2 卵巢上皮性癌組織中m iR-338-3p表達與病床臨床病理參數(shù)的關(guān)系 臨床分期越晚、組織分化高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢上皮性癌組織中miR-338-3p的表達較低(表3)。

    2.3 Kap lan-M eier生存分析 miR-338-3p低表達卵巢上皮性癌患者的總體生存率、無進展生存期均短于 miR-338-3p高表達患者(χ2=5.348 和 4.347,P=0.021 和0.037),見圖1、2。

    表3 卵巢上皮性癌組織中m iR-338-3p表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 例(%)

    圖2 不同m iR-338-3p表達的卵巢上皮性癌患者無進展生存曲線比較

    3 討論

    卵巢癌是發(fā)病率及病死率較高的婦科惡性腫瘤,是威脅女性生殖健康的重要疾病之一,大部分卵巢癌患者發(fā)現(xiàn)時臨床期別較晚,盆腹腔存在癌灶廣泛侵犯和轉(zhuǎn)移,是導(dǎo)致患者治療效果不佳和預(yù)后較差的重要原因之一。

    miRNAs是一種內(nèi)源性非編碼小RNA,在多種生理和病理過程中發(fā)揮重要作用,與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、血管生成、腫瘤細胞微環(huán)境等惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)過程關(guān)系密切,參與包括卵巢癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性過程,可作為惡性腫瘤治療的潛在靶點[4-7]。研究[8-13]表明,在胃癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌和神經(jīng)母細胞瘤等多種惡性腫瘤細胞中,miR-338-3p可以抑制上述腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移;增加腫瘤細胞中miR-338-3p的表達水平,可逆轉(zhuǎn)上述腫瘤細胞的惡性生物學(xué)行為,提示miR-338-3p在上述惡性腫瘤細胞中扮演抑癌基因的角色。

    本研究結(jié)果顯示與正常卵巢組織和卵巢良性上皮性腫瘤相比,卵巢上皮性癌組織中miR-338-3p表達明顯降低,臨床分期越晚,miR-338-3p表達越低,提示miR-338-3p異常低表達可能與卵巢癌的發(fā)生和進展有關(guān)。進一步分析顯示,miR-338-3p低表達患者的總體生存率和無進展生存期明顯縮短,提示miR-338-3p低表達與卵巢癌患者預(yù)后不良相關(guān),miR-338-3p可作為卵巢癌預(yù)后和復(fù)發(fā)的標(biāo)記物。

    綜上所述,卵巢上皮性癌組織中存在miR-338-3p低表達,且與患者的預(yù)后不良相關(guān),可作為卵巢癌預(yù)后和復(fù)發(fā)的標(biāo)記物。在此基礎(chǔ)上深入研究卵巢癌細胞中miR-338-3p靶向調(diào)控腫瘤相關(guān)基因,參與卵巢癌發(fā)病的分子機制,可為臨床探尋新的有效治療卵巢癌的分子靶點,也可為卵巢癌的精準(zhǔn)治療提供新的方向。

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