丁苯酞聯(lián)合依達(dá)拉奉治療急性缺血性腦卒中對細(xì)胞凋亡的影響

陳 盼 張鑫磊 劉震乾 許 靜 張 俊

徐州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，江蘇 徐州 221000

腦血管疾病是嚴(yán)重威脅人類身體健康的常見病，是導(dǎo)致全球人口死亡的三大原因之一，而在腦血管疾病中，急性缺血性腦卒中具有發(fā)病率高、病死率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給社會和患者家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)[1-3]。近年來的流行病學(xué)研究表明，急性缺血性腦卒中的發(fā)病率和病死率均逐年攀升，并呈現(xiàn)年輕化趨勢[4-5]。目前隨著缺血性腦卒中溶栓治療、休克和心肺腦復(fù)蘇后及圍術(shù)期心腦血管等手術(shù)的開展，對臨床可預(yù)見性腦缺血/再灌注損傷的防治已成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。因此，及時清除缺血/再灌注損傷所引起的氧化應(yīng)激損傷，并減少氧化應(yīng)激損傷引起的細(xì)胞凋亡是目前研究的重點(diǎn)。依達(dá)拉奉是一種腦保護(hù)劑，常用于急性缺血性腦卒中患者的治療[6-7]。丁苯酞是一種新型腦保護(hù)藥物，近年來在急性缺血性腦卒中患者中的應(yīng)用逐漸增加[8-10]。本研究將上述兩種藥物聯(lián)合用于急性缺血性腦卒中的治療，觀察療效、氧化應(yīng)激反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的變化。

1 資料與方法

1．1一般資料選擇 2018-09-2019-03徐州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的急性腦梗死患者 136例，男71例，女65例；年齡 38～79( 56.41±2.99) 歲；病程 6～72( 27.83±2.66) h；根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為聯(lián)合用藥組和依達(dá)拉奉組各68例。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會腦血管病學(xué)組《中國急性缺血性腦卒中診治指南2010》診斷標(biāo)準(zhǔn)；頭顱CT或磁共振檢查無顱內(nèi)出血；首次發(fā)??；患者參加本研究前未經(jīng)其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)治療；患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：腦出血患者；合并嚴(yán)重心臟、肝、腎功能不全者；合并腦血管畸形或腦腫瘤患者；對本研究所用藥物過敏者；不愿配合治療者。

1．2方法2組均進(jìn)行基礎(chǔ)治療，包括阿司匹林100 mg/d，瑞舒伐他丁鈣片10 mg/d，血塞通注射液0.4 g/d靜滴。依達(dá)拉奉組加用依達(dá)拉奉30 mg+250 mL生理鹽水靜滴，2次/d。聯(lián)合用藥組除在依達(dá)拉奉組基礎(chǔ)上加用丁苯酞注射液100 mL(25 mg)靜滴，2次/d，共治療14 d。

1．3觀察指標(biāo)

1．3．1 療效標(biāo)準(zhǔn)：采用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評估患者神經(jīng)功能缺損情況[11]，其高低與神經(jīng)功能缺損情況呈正相關(guān)；采用日常生活能力量表(ADL)評價2組日常生活能力[12]，其與日常生活能力呈正相關(guān)。根據(jù)NIHSS評分及ADL評分情況判斷各組臨床療效。

1．3．2 氧化應(yīng)激指標(biāo)：收集病人血液樣本5 mL，放入離心機(jī)中以1 000 r/min的速度離心，取血清，按照MDA及SOD試劑盒說明書操作，應(yīng)用酶標(biāo)儀進(jìn)行測定。

1．3．3 細(xì)胞凋亡指標(biāo)：收集病人血液樣本5 mL，按比例加入蛋白提取液及蛋白酶抑制劑混合，震蕩20 min，在4℃、14 000 r/min條件離心10 min，吸取上清液。經(jīng)電泳轉(zhuǎn)膜后與β-Actin抗體、Bax抗體和Bcl-2抗體反應(yīng)后通過Image Lab顯像。用Image Pro Plus圖像軟件分析各條帶灰度值，以β-Actin為內(nèi)參計算各組相對表達(dá)量。

1．4統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，計數(shù)資料采用卡方檢驗，計量資料采用t檢驗，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．12組治療前后NIHSS、ADL評分比較2組治療后NIHSS評分均低于治療前；2組治療后ADL評分均高于治療前，聯(lián)合用藥組治療后NIHSS評分低于依達(dá)拉奉組，ADL評分高于依達(dá)拉奉組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 2組一般資料比較

表2 2組NIHSS評分和ADL評分比較分)

注：與本組治療前比較，aP<0.05；與依達(dá)拉奉組治療后比較，bP<0.05

2．22組治療前后氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較2組治療后MDA水平均低于治療前，2組治療后SOD水平均高于治療前，說明兩個實(shí)驗組的治療都降低了氧化應(yīng)激水平。通過2組對比結(jié)果顯示，聯(lián)合用藥組治療后MDA水平低于依達(dá)拉奉組，SOD水平高于依達(dá)拉奉組，說明聯(lián)合用藥降低氧化應(yīng)激水平的作用更強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

2．32組治療前后血清bax，bcl-2的蛋白水平比較2組治療后bax蛋白水平均低于治療前；2組治療后bcl-2蛋白水平均高于治療前，說明兩個實(shí)驗組的治療都起到了抗細(xì)胞凋亡的作用。通過2組對比結(jié)果顯示，聯(lián)合用藥組治療后bax蛋白水平低于依達(dá)拉奉組，bcl-2蛋白水平高于依達(dá)拉奉組，說明聯(lián)合用藥的抗細(xì)胞凋亡的作用優(yōu)于單獨(dú)用藥。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖2。

3 討論

急性缺血性腦卒中發(fā)病過程中腦血流中斷和再灌注使腦細(xì)胞產(chǎn)生損傷的過程是一個快速的“瀑布式”級聯(lián)反應(yīng)，其中包括能量障礙、免疫及炎癥反應(yīng)、活性氧等自由基的大量生成及釋放、興奮性氨基酸釋放增加、線粒體功能障礙、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、 膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)細(xì)胞間的相互作用以及凋亡基因的激活等[13-17]。這些環(huán)節(jié)互為因果，彼此重疊，并相互聯(lián)系，形成惡性循環(huán)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[18-19]。有研究表明，氧化應(yīng)激是腦 I/R 損傷的重要機(jī)制之一[20-22]。氧化應(yīng)激反應(yīng)中產(chǎn)生的活性氧自由基在腦 I/R 損傷的發(fā)生、發(fā)展過程中起關(guān)鍵性作用[23-24]。

圖1 2組治療前后氧化應(yīng)激指標(biāo)水平Figure 1 Levels of oxidative stress before and after treatment in two groups

圖22組治療前后血清bax，bcl-2的蛋白水平比較

Figure2Comparison of serum bax and bcl-2protein levels before and after treatment in two groups

MDA和SOD是目前公認(rèn)的腦I/R損傷后能反映氧自由基水平的可靠指標(biāo)[25]MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，會引起核酸、蛋白質(zhì)等生命大分子的交聯(lián)聚合，具有細(xì)胞毒作用[26-28]。SOD是超氧自由基的特異性清除酶，能夠明顯減少自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化損傷，穩(wěn)定溶酶體膜，對細(xì)胞起到保護(hù)作用[29-30]。因此腦I/R損傷時盡早清除氧自由基，提高SOD活性，減少M(fèi)DA生成，是減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)減輕腦I/R損傷的關(guān)鍵。當(dāng)氧化應(yīng)激反應(yīng)過強(qiáng)時能通過脂質(zhì)過氧化作用造成生物膜損傷，使細(xì)胞代謝發(fā)生障礙、能量耗竭及影響細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，并最終導(dǎo)致細(xì)胞損傷、凋亡。細(xì)胞凋亡過程受到一系列相關(guān)基因的調(diào)節(jié)和控制，其中Bcl-2與Bax基因在凋亡過程中發(fā)揮重要作用。通過動物和細(xì)胞實(shí)驗研究發(fā)現(xiàn)[31-35]，Bc1-2對細(xì)胞凋亡具有明顯的抑制作用，而Bax可拮抗Bc1-2的作用，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，因此Bcl-2與Bax的比例決定著細(xì)胞受凋亡的進(jìn)程。

丁苯酞為人工合成的消旋正丁基苯酞，與天然的左旋芹菜甲素的結(jié)構(gòu)相同。臨床研究顯示[36-40]，丁苯酞對急性缺血性腦卒中患者中樞神經(jīng)功能的損傷有改善作用，可促進(jìn)患者神經(jīng)功能缺損的改善。動物實(shí)驗也顯示[41-46]，丁苯酞可阻斷缺血性腦卒中所致腦損傷的多個病理環(huán)節(jié)，具有較強(qiáng)的抗腦缺血作用。依達(dá)拉奉是一種腦保護(hù)劑可清除氧自由基，動物研究顯示[47-48]，大鼠在缺血/缺血再灌注后靜脈給予依達(dá)拉奉，可阻止腦水腫和腦梗死的進(jìn)展，并緩解所伴隨的神經(jīng)癥狀，抑制遲發(fā)性神經(jīng)元死亡。

本文結(jié)果顯示，聯(lián)合用藥組治療后功能評分優(yōu)于依達(dá)拉奉組，證實(shí)聯(lián)合用藥的臨床療效更好；聯(lián)合用藥組MDA水平低于依達(dá)拉奉組，SOD水平高于依達(dá)拉奉組進(jìn)一步證實(shí)了兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用可提高抗氧化應(yīng)激的能力；本文對藥物腦保護(hù)作用機(jī)制的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥組治療后血清Bax含量低于依達(dá)拉奉組，血清Bcl-2含量高于依達(dá)拉奉組，結(jié)果說明兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用可通過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)并抑制Bax蛋白表達(dá)，從而達(dá)到減輕急性缺血性腦卒中后腦缺血再灌注所引起的腦損傷的效果。