• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    膠孢炭疽菌黑色素合成途徑中漆酶蛋白生物信息學(xué)分析

    2019-09-25 04:23:19祝友朋陳搖韓長(zhǎng)志
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年6期
    關(guān)鍵詞:漆酶生物信息學(xué)黑色素

    祝友朋 陳搖 韓長(zhǎng)志

    摘要:膠孢炭疽菌可以侵染桃、核桃等諸多重要農(nóng)林植物,它可引起生產(chǎn)上諸多經(jīng)濟(jì)樹種的炭疽病,嚴(yán)重威脅著各國(guó)農(nóng)林業(yè)的健康生產(chǎn)。植物病原絲狀真菌中黑色素合成途徑中關(guān)鍵環(huán)節(jié)漆酶已經(jīng)在稻瘟病菌、玉米大斑病菌等進(jìn)行了較為深入的研究,然而尚未見(jiàn)有關(guān)膠孢炭疽菌黑色素合成途徑中關(guān)鍵環(huán)節(jié)漆酶的生物信息學(xué)分析報(bào)道。本研究以膠孢炭疽菌中漆酶Cg14LAC氨基酸序列為基礎(chǔ),通過(guò)TargetP、SignalP、ProtComp、Phyre、big-PI Fungal Predictor、SMART、TMHMM等生物信息學(xué)分析工具對(duì)上述序列開展蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位、細(xì)胞信號(hào)肽、二級(jí)結(jié)構(gòu)、錨定位點(diǎn)、保守結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域等進(jìn)行分析,同時(shí)對(duì)上述序列開展與炭疽菌屬不同真菌遺傳進(jìn)化關(guān)系分析。研究結(jié)果為進(jìn)一步深入開展該蛋白在致病過(guò)程中所具有的功能研究打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞:農(nóng)林植物;膠孢炭疽菌;黑色素;漆酶;生物信息學(xué);遺傳進(jìn)化

    膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporiride)在分類上屬于炭疽菌屬真菌,作為引起多種農(nóng)林業(yè)經(jīng)濟(jì)作物炭疽病的病原菌之一,可以危害芒果、柿樹、草莓、桃樹以及核桃等植物[1]。前人研究較多關(guān)注于該菌的形態(tài)特征、生活史以及遺傳關(guān)系、致病基因等方面[2]。近些年,隨著同屬于炭疽菌屬中的禾谷炭疽菌(Colletotrichum graminicola)、希金斯炭疽菌(Colletotrichum higginsanum)全基因組序列的公布[3],筆者對(duì)上述病菌G蛋白信號(hào)通路相關(guān)蛋白進(jìn)行生物信息分析,同時(shí),也對(duì)該菌中重要的G蛋白信號(hào)通路調(diào)控因子RGS蛋白開展生物信息學(xué)分析[4]。

    植物病原絲狀真菌能否成功侵入寄主植物組織并在其中生長(zhǎng)繁殖,是其能否成功導(dǎo)致植物發(fā)病的基本條件之一。DHN黑色素作為植物病原菌重要的毒力因子之一,其合成途徑包括1個(gè)聚酮體合成酶基因、2個(gè)還原酶基因、2個(gè)脫水酶基因以及1個(gè)漆酶基因[5]。漆酶作為一種廣泛存在于真菌、細(xì)菌、昆蟲和植物中含銅的多酚氧化酶,能夠催化酚類化合物及其衍生物,使之生成相應(yīng)的苯醌和水[6]。目前,學(xué)術(shù)界關(guān)于漆酶在植物病原絲狀真菌中的報(bào)道較多,如稻瘟病菌[7]、灰霉菌[8]、玉米大斑病菌[9]、番茄枯萎病菌[10]等。漆酶基因與真菌的生長(zhǎng)發(fā)育、分生孢子形成、黑色素合成、致病性等相關(guān),但在不同植物病原真菌中的作用差異很大。就炭疽菌屬中真菌漆酶基因的研究而言,在西瓜炭疽病病菌(Colletotrichum orbiculare)中,漆酶基因1ac2調(diào)控附著胞黑色素和分生孢子色素沉著,突變后致病力喪失[11]。然而,漆酶基因lac1在黃瓜炭疽菌(Colletotrichum lagenarium)中并非是黑色素合成和對(duì)寄主致病力的必要因素[12]。芒果膠孢炭疽菌漆酶基因lac1不僅可以調(diào)控降解芒果組織中的酚類物質(zhì)、促進(jìn)病原菌的擴(kuò)展,也可以通過(guò)干擾與致病力相關(guān)的黑色素合成和細(xì)胞壁降解酶的產(chǎn)生來(lái)影響其致病力[13];推測(cè)1ac2可能調(diào)控分生孢子萌發(fā),也可能參與調(diào)控其漆酶活性和抗氧化反應(yīng)等[14]。

    目前,對(duì)于C. gloeosporioides黑色素合成途徑中關(guān)鍵環(huán)節(jié)漆酶的生物信息學(xué)分析尚未見(jiàn)報(bào)道,近些年,隨著云南省各地區(qū)大面積種植核桃[15],各地區(qū)核桃炭疽病發(fā)生較為嚴(yán)重(韓長(zhǎng)志等,未發(fā)表數(shù)據(jù)),因此,深入開展該菌黑色素合成相關(guān)基因的研究,可以更好地明確病原菌的致病機(jī)制[16],對(duì)于進(jìn)一步深入開展該蛋白在致病過(guò)程中所具有的功能具有非常重要的理論指導(dǎo)和生產(chǎn)實(shí)踐意義。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    根據(jù)西瓜炭疽菌中已經(jīng)報(bào)道的漆酶蛋白LAC1、LAC2序列(蛋白編號(hào)為BAB32575、BAN13563.1)[11],在美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(National Center for Biotechnology Information,簡(jiǎn)稱NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLASTp比對(duì),獲得膠孢炭疽菌 Cg-14以及Nara gc5菌株的LAC1、LAC2蛋白序列,分別命名為Cg14LAC1、Cg14LAC2、CgNLAC1、CgNLAC2。

    1.2 方法

    1.2.1 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)肽及信號(hào)肽預(yù)測(cè) 利用TargetP 1.1 Server[17]和SignalP 4.0 Server[18]分別實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)肽的預(yù)測(cè)、信號(hào)肽的預(yù)測(cè)。

    1.2.2 亞細(xì)胞定位及錨定位點(diǎn)分析 利用ProtComp v9.0和big-PI Fungal Predictor分別實(shí)現(xiàn)蛋白的定位[19]、錨定位點(diǎn)情況[20]。

    1.2.3 蛋白質(zhì)疏水性預(yù)測(cè)及理化性質(zhì)分析 利用ExPASy[21]實(shí)現(xiàn)。

    1.2.4 蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域及跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè) 利用SMART[22-23]實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白的保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè);利用TMHMM Server v.2.0[18]和HMMTOP version 2.0[24]、TMpred等跨膜網(wǎng)站對(duì)蛋白質(zhì)的跨膜區(qū)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)。

    1.2.5 二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 采用Phyre2在線分析實(shí)現(xiàn)[25]。

    1.2.6 系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建 在NCBI中找尋Cg14LAC1、Cg14LAC2的同源序列,利用ClustalX[26]進(jìn)行多重比對(duì)分析,隨后利用MEGA 7.0軟件[27]構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 序列分析

    通過(guò)對(duì)膠孢炭疽菌中Cg14LAC1、Cg14LAC2、CgNLAC1、CgNLAC2序列進(jìn)一步分析,結(jié)果表明,Cg14LAC1比CgNLAC1序列多43個(gè)氨基酸,位置為第334~376氨基酸,推測(cè)可能原因在于測(cè)序結(jié)果不準(zhǔn)確或者自然原因丟失,尚不能確定,而Cg14LAC2與CgNLAC2序列相同。為了更好地開展膠孢炭疽菌中漆酶蛋白的生物信息學(xué)分析,因此,本研究選擇Cg14LAC1、Cg14LAC2進(jìn)行后續(xù)分析。

    2.2 轉(zhuǎn)運(yùn)肽、信號(hào)肽以及亞細(xì)胞定位、錨定位點(diǎn)預(yù)測(cè)

    通過(guò)對(duì)Cg14LAC1與Cg14LAC2的信號(hào)肽分析,上述蛋白均具有明顯的信號(hào)肽序列,位置分別為第22、23位和第23、24位,最大切割率均為0.450,上述蛋白均屬于分泌蛋白;進(jìn)一步對(duì)其轉(zhuǎn)運(yùn)肽、亞細(xì)胞定位以及錨定位點(diǎn)進(jìn)行分析,轉(zhuǎn)運(yùn)肽分析結(jié)果表明,上述蛋白均定位在線粒體上,但其預(yù)測(cè)可靠性概率不同(表1),同時(shí),亞細(xì)胞定位分析結(jié)果表明,上述蛋白定位于胞外,可結(jié)合在膜上(表2);盡管如此,通過(guò)對(duì)上述蛋白進(jìn)行錨定位點(diǎn)的預(yù)測(cè)分析,并未發(fā)現(xiàn)上述蛋白含有錨定位點(diǎn)。

    2.3 疏水性及理化性質(zhì)分析預(yù)測(cè)

    通過(guò)對(duì)Cg14LAC1與Cg14LAC2進(jìn)行疏水性預(yù)測(cè),明確Cg14LAC1中位于第132位的蘇氨酸(T),其親水性最強(qiáng)(-3.267),而位于第16位的亮氨酸(L),疏水性最強(qiáng)(2.044);與Cg14LAC1不同,Cg14LAC2中位于第375位的谷氨酰胺(Q),親水性最強(qiáng)(-2.889);而位于第15位的亮氨酸(L),疏水性最強(qiáng)(2.489)(表3)。

    一般而言,組成蛋白質(zhì)的氨基酸種類可以分為酸性氨基酸、堿性氨基酸、非極性R基氨基酸以及不帶電荷的極性R基氨基酸等4類。對(duì)Cg14LAC1與Cg14LAC2氨基酸組成進(jìn)行分析,明確上述蛋白在氨基酸組成方面,無(wú)論是數(shù)量,還是在所占比例方面均沒(méi)有太大的差別(表5)。

    2.4 保守結(jié)構(gòu)域及跨膜結(jié)構(gòu)域分析

    通過(guò)對(duì)Cg14LAC1與Cg14LAC2進(jìn)行疏水性預(yù)測(cè),明確上述蛋白均不含有保守的結(jié)構(gòu)域;同時(shí),利用HMMTOP以及TMHMM進(jìn)行分析,上述蛋白均不具有跨膜區(qū);進(jìn)一步通過(guò)TMpred分析,發(fā)現(xiàn)Cg14LAC1具有2個(gè)跨膜區(qū),Cg14LAC2具有1個(gè)跨膜區(qū)(表6),推測(cè)上述跨膜結(jié)構(gòu)應(yīng)為前期預(yù)測(cè)的信號(hào)肽更為準(zhǔn)確。因此,膠孢炭疽菌中Cg14LAC1是否具有跨膜區(qū)域有待進(jìn)一步通過(guò)生物學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證,而Cg14LAC2不具有跨膜區(qū)結(jié)構(gòu)。

    2.5 二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)及組成情況分析

    目前,預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的常用方法除Phyre[28]和PSIPRED[29]外,還有PHD等方法。上述方法所得結(jié)果基本相似,本研究以Phyre所分析結(jié)果為例,明確膠孢炭疽菌中Cg14LAC1和Cg14LAC2蛋白含有α螺旋、無(wú)規(guī)則卷曲和β轉(zhuǎn)角、TM螺旋等結(jié)構(gòu)(圖1),各結(jié)構(gòu)所占比例大體相當(dāng)。

    2.6 遺傳關(guān)系分析

    以Cg14LAC1、Cg14LAC2為基礎(chǔ)序列,通過(guò)BLASTp同源性搜索,獲得與膠孢炭疽菌漆酶具有同源性的炭疽菌屬不同真菌的氨基酸序列,根據(jù)其同源關(guān)系數(shù)值,結(jié)合Cg14LAC1、Cg14LAC2序列,利用MEGA 7.0進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,明確膠孢炭疽菌Cg14PLC1與Cg14PLC2分別形成具有不同群體的2類(數(shù)據(jù)未顯示),Cg14PLC1與膠孢炭疽菌中另外一個(gè)菌株Nara gc5中的CgNPLC1(XP_007283028.1)序列相同,與同屬于炭疽菌屬的其他真菌C. orbiculare中的ENH79795.1親緣關(guān)系較近;Cg14PLC2則與膠孢炭疽菌中的AFK76451.1親緣關(guān)系較近,并與菌株Nara gc5中的CgNPLC2(XP_007273654.1)聚為一類。

    3 討論

    前期,利用NCBI蛋白數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)膠孢炭疽菌中漆酶蛋白進(jìn)行“Colletotrichum gloeosporioides AND laccases”關(guān)鍵詞搜索,結(jié)果表明有57個(gè)蛋白,對(duì)上述蛋白逐一查看,去除西瓜炭疽菌中的漆酶蛋白,剩余46個(gè)蛋白,對(duì)這些蛋白開展遺傳關(guān)系分析,可以分為13個(gè)小類,該結(jié)果表明膠孢炭疽菌在不同炭疽菌屬種中的漆酶蛋白并不具有較強(qiáng)的保守性,該結(jié)果為進(jìn)一步解釋膠孢炭疽菌可以侵染諸多農(nóng)林植物提供新的研究思路。

    同時(shí),由于膠孢炭疽菌全基因組序列并未完全釋放,本研究根據(jù)同屬于炭疽菌屬的西瓜炭疽菌中已經(jīng)報(bào)道的LAC1、LAC2進(jìn)行BLASTp比對(duì),從而獲得膠孢炭疽菌Cg-14、Nara gc5菌株中的LAC1、LAC2,并對(duì)其開展包括二級(jí)結(jié)構(gòu)、疏水性、理化性質(zhì)等全面的生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)工作,為進(jìn)一步開展引起核桃炭疽病的炭疽病菌中漆酶的功能研究提供重要的理論參考。

    膠孢炭疽菌是造成多種農(nóng)林業(yè)上植物產(chǎn)生重要損失的病原菌之一[30-31],它主要通過(guò)產(chǎn)生附著胞利用機(jī)械壓力穿透植物侵入寄主。黑色素是否合成直接關(guān)系到病原菌附著胞能夠形成巨大膨壓從而侵入寄主組織,因此,開展該病菌菌黑色素合成相關(guān)基因的研究對(duì)于進(jìn)一步解析病原菌致病機(jī)制具有重要的理論意義,同時(shí),也為進(jìn)一步開發(fā)適合于今后生產(chǎn)上適用的靶標(biāo)殺菌劑具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

    4 結(jié)論

    本研究以膠孢炭疽菌中漆酶Cg14LAC氨基酸序列為基礎(chǔ),通過(guò)TargetP、SignalP、ProtComp、Phyre、big-PI Fungal Predictor、SMART、TMHMM等生物信息學(xué)分析工具對(duì)上述序列開展蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位、細(xì)胞信號(hào)肽、二級(jí)結(jié)構(gòu)、錨定位點(diǎn)、保守結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域等分析,同時(shí),對(duì)上述序列開展了與炭疽菌屬不同真菌遺傳進(jìn)化關(guān)系分析。

    參考文獻(xiàn):

    [1]韓長(zhǎng)志. 膠孢炭疽病菌的研究進(jìn)展[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào),2012,27(增刊1):386-389.

    [2]韓長(zhǎng)志. 膠孢炭疽菌侵染過(guò)程相關(guān)基因研究進(jìn)展[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,41(9):165-169.

    [3]OConnell R J,Thon M R,Hacquard S,et al. Lifestyle transitions in plant pathogenic Colletotrichum fungi deciphered by genome and transcriptome analyses[J]. Nature Genetics,2012,44(9):1060-1065.

    [4]韓長(zhǎng)志. 膠孢炭疽菌RGS蛋白生物信息學(xué)分析[J]. 河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2015(1):116-122.

    [5]賈 慧,孟慶江,李志勇,等. 玉米大斑病菌黑色素合成酶基因的全基因組定位及表達(dá)模式分析[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,48(14):2767-2776.

    [6]Widsten P,Kandelbauer A. Laccase applications in the forest products industry:a review[J]. Enzyme and Microbial Technology,2008,42(4):293-307.

    [7]陳 新. 稻瘟病菌兩個(gè)漆酶基因功能分析[D]. 福州:福建農(nóng)林大學(xué),2008.

    [8]Sbaghi M,Jeandet P,Bessis R,et al. Degradation of stilbene‐type phytoalexins in relation to the pathogenicity of Botrytis cinerea to grapevines[J]. Plant Pathology,2010,45(1):139-144.

    [9]孟 川. 玉米大斑病菌StLAC2基因與黑色素合成及致病性關(guān)系研究[D]. 保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

    [10]Caero D C,Roncero M I. Functional analyses of laccase genes from Fusarium oxysporum[J]. Phytopathology,2008,98(5):509-518.

    [11]Lin S Y,Okuda S,Ikeda K,et al. LAC2 encoding a secreted laccase is involved in appressorial melanization and conidial pigmentation in Colletotrichum orbiculare[J]. Molecular Plant-Microbe Interactions,2012,25(12):1552-1561.

    [12]Tsuji G,F(xiàn)ujikawa J,Ishida H,et al. Laccase gene LAC1 of colletotrichum lagenarium is not essential for melanin biosynthesis and pathogenicity[J]. Journal of General Plant Pathology,2001,67(3):182-190.

    [13]韋運(yùn)謝,張 賀,劉曉妹,等. 芒果膠孢炭疽菌漆酶lac1與致病力的相關(guān)性分析[J]. 中國(guó)植保導(dǎo)刊,2016,36(11):5-10.

    [14]韋運(yùn)謝,蒲金基,張 賀,等. 膠孢炭疽菌漆酶基因Lac2的序列特征與表達(dá)分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(9):35-38.

    [15]李 婭,韓長(zhǎng)志. 云南省核桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及對(duì)策分析[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究,2012,30(4):162-167.

    [16]曹志艷. 玉米大斑病菌黑色素合成途徑相關(guān)基因的克隆及功能分析[D]. 保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

    [17]Emanuelsson O,Brunak S,von Heijne G,et al. Locating proteins in the cell using TargetP,SignalP and related tools[J]. Nature Protocols,2007,2(4):953-971.

    [18]Dyrlv-Bendtsen J,Nielsen H,von Heijne G,et al. Improved prediction of signal peptides:SignalP 3.0[J]. Journal of Molecular Biology,2004,340(4):783-795.

    [19]Emanuelsson O,Nielsen H,Brunak S,et al. Predicting subcellular localization of proteins based on their N-terminal amino acid sequence[J]. Journal of Molecular Biology,2000,300(4):1005-1016.

    [20]Eisenhaber B,Schneider G,Wildpaner M,et al. A sensitive predictor for potential GPI lipid modification sites in fungal protein sequences and its application to genome-wide studies for Aspergillus nidulans,Candida albicans,Neurospora crassa,Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe[J]. Journal of Molecular Biology,2004,337(2):243-253.

    [21]Gasteiger E,Hoogland C,Gattiker A,et al. Protein identification and analysis tools on the ExPASy server[J]. The proteomics protocols handbook:Springer,2005:571-607.

    [22]Schultz J,Milpetz F,Bork P,et al. SMART,a simple modular architecture research tool:identification of signaling domains[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,1998,95(11):5857-5864.

    [23]Letunic I,Doerks T,Bork P. SMART 7:recent updates to the protein domain annotation resource[J]. Nucleic Acids Research,2012,40:D302-D305.

    [24]Tusnady G E,Simon I. The HMMTOP transmembrane topology prediction server[J]. Bioinformatics,2001,17(9):849-850.

    [25]Kelley L A,Mezulis S,Yates C M,et al. The phyre2 web portal for protein modeling,prediction and analysis[J]. Nature Protocols,2015,10(6):845-858.

    [26]Thompson J D,Gibson T J,Higgins D G . Multiple sequence alignment using ClustalW and ClustalX.[J]. Curr Protoc Bioinformatics,2002,Chapter 2(Unit 2):Unit 2.3.

    [27]Tamura K,Peterson D,Peterson N,et al. MEGA5:molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood,evolutionary distance,and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology and Evolution,2011,28(10):2731-2739.

    [28]Kelley L A,Sternberg M J. Protein structure prediction on the Web:a case study using the Phyre server[J]. Nature Protocols,2009,4(3):363-371.

    [29]Buchan D W A,Minneci F,Nugent T C O,et al. Scalable web services for the PSIPRED Protein Analysis Workbench[J]. Nucleic Acids Research,2013,41(W1):W349-W357.

    [30]劉郵洲,陳夕軍,尹小樂(lè),等. 23株芽胞桿菌及其脂肽類化合物抑菌活性比較[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2017,33(3):533-542.

    [31]柳志強(qiáng),李喬曼,徐 爽,等. 催吐蘿芙木內(nèi)生菌Bacillus subtilis LYM3的抑菌活性產(chǎn)物[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2017,33(1):67-72. 張玉佩,陸建飛. 江蘇省小麥生產(chǎn)的時(shí)序變化及比較優(yōu)勢(shì)分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2019,47(6):52-57.

    猜你喜歡
    漆酶生物信息學(xué)黑色素
    啊,頭發(fā)變白了!
    Q7.為什么人老了頭發(fā)會(huì)變白?
    為什么人有不同的膚色?
    以竹粉為基質(zhì)固態(tài)培養(yǎng)蟲擬蠟菌及其產(chǎn)漆酶條件研究
    “PBL+E—learning”教學(xué)模式探索
    移動(dòng)教學(xué)在生物信息學(xué)課程改革中的應(yīng)用
    今傳媒(2016年11期)2016-12-19 11:35:50
    中醫(yī)大數(shù)據(jù)下生物信息學(xué)的發(fā)展及教育模式淺析
    數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)在生物信息學(xué)中的應(yīng)用
    產(chǎn)胞外黑色素菌株的鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化
    漆酶用于環(huán)境修復(fù)的研究及應(yīng)用前景
    十分钟在线观看高清视频www | 亚洲欧美日韩东京热| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 免费大片18禁| 天堂俺去俺来也www色官网| 联通29元200g的流量卡| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲成人一二三区av| 日韩欧美一区视频在线观看 | 久久久成人免费电影| 最近中文字幕高清免费大全6| 少妇熟女欧美另类| 久久毛片免费看一区二区三区| 日本黄大片高清| 美女国产视频在线观看| 高清欧美精品videossex| 直男gayav资源| 国产探花极品一区二区| 日韩中字成人| 国精品久久久久久国模美| 少妇 在线观看| 久久婷婷青草| freevideosex欧美| 天堂8中文在线网| 国产乱来视频区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 男女边摸边吃奶| 国产亚洲91精品色在线| 乱系列少妇在线播放| 美女中出高潮动态图| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 在现免费观看毛片| 国产日韩欧美在线精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品国产色婷婷电影| a 毛片基地| 青春草视频在线免费观看| 精品熟女少妇av免费看| 精品久久久久久久久av| 亚洲精品第二区| 日韩欧美一区视频在线观看 | 有码 亚洲区| 女性被躁到高潮视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 大陆偷拍与自拍| 日韩制服骚丝袜av| 久久国内精品自在自线图片| 国产淫语在线视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久久久网色| 国产成人午夜福利电影在线观看| 中文欧美无线码| 中国国产av一级| 一级黄片播放器| 另类亚洲欧美激情| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 51国产日韩欧美| 99久久精品一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av | 男的添女的下面高潮视频| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美三级亚洲精品| 国产黄频视频在线观看| 国产男人的电影天堂91| 国产成人a∨麻豆精品| 在线免费十八禁| 国产亚洲一区二区精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 午夜日本视频在线| 国产精品国产三级国产av玫瑰| av一本久久久久| 一区二区三区免费毛片| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品99久久久久久久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 99热国产这里只有精品6| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲va在线va天堂va国产| 色视频www国产| 97在线人人人人妻| 伦精品一区二区三区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产 一区精品| 精品久久久久久电影网| 欧美国产精品一级二级三级 | 久久久久久久精品精品| 国产黄色视频一区二区在线观看| 青春草视频在线免费观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 26uuu在线亚洲综合色| 国产精品爽爽va在线观看网站| 最近手机中文字幕大全| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲三级黄色毛片| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产高潮美女av| 夫妻性生交免费视频一级片| 看免费成人av毛片| 在线看a的网站| 亚洲av成人精品一二三区| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲成人手机| 欧美日韩亚洲高清精品| 日韩国内少妇激情av| 中文欧美无线码| 一级毛片久久久久久久久女| 精品久久久久久久末码| 亚洲人与动物交配视频| 免费人成在线观看视频色| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 高清av免费在线| 国产精品久久久久成人av| 最近的中文字幕免费完整| 又爽又黄a免费视频| 五月开心婷婷网| 国内揄拍国产精品人妻在线| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲国产精品成人久久小说| 免费看av在线观看网站| 美女中出高潮动态图| 大话2 男鬼变身卡| 啦啦啦在线观看免费高清www| 日本爱情动作片www.在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产一区二区三区av在线| 99九九线精品视频在线观看视频| av国产久精品久网站免费入址| 久久精品夜色国产| 国产色爽女视频免费观看| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久99热6这里只有精品| 91狼人影院| 精品久久久久久久久亚洲| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 国产精品人妻久久久影院| 久久久久久久精品精品| 免费在线观看成人毛片| 国产成人精品一,二区| 欧美最新免费一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲av免费高清在线观看| 国产久久久一区二区三区| 人妻一区二区av| 久久久午夜欧美精品| 国产精品三级大全| 午夜福利影视在线免费观看| 国产日韩欧美在线精品| 国产亚洲5aaaaa淫片| 久久 成人 亚洲| 丝袜喷水一区| 精品人妻视频免费看| 国产免费一区二区三区四区乱码| h视频一区二区三区| 国产一区二区三区av在线| 午夜老司机福利剧场| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲色图av天堂| 一级毛片电影观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 一级av片app| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产精品女同一区二区软件| 99热这里只有是精品50| 99热国产这里只有精品6| 日韩亚洲欧美综合| 女人久久www免费人成看片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美精品国产亚洲| 国产91av在线免费观看| 男女边摸边吃奶| 久久 成人 亚洲| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品女同一区二区软件| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产一区二区三区av在线| 国产在视频线精品| 少妇高潮的动态图| 亚洲精品国产色婷婷电影| 纯流量卡能插随身wifi吗| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产精品欧美亚洲77777| 成年av动漫网址| 成人毛片a级毛片在线播放| 观看美女的网站| 免费黄频网站在线观看国产| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产精品国产av在线观看| 草草在线视频免费看| 国产精品一区www在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 久久 成人 亚洲| 国产伦精品一区二区三区四那| 精品国产三级普通话版| 天堂俺去俺来也www色官网| 九九在线视频观看精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 联通29元200g的流量卡| av免费在线看不卡| 久久精品久久久久久久性| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 少妇 在线观看| 老司机影院毛片| 搡老乐熟女国产| 涩涩av久久男人的天堂| 97在线视频观看| 亚洲成人一二三区av| 成人亚洲精品一区在线观看 | 涩涩av久久男人的天堂| 少妇被粗大猛烈的视频| 三级国产精品片| 国产精品久久久久久久电影| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 午夜视频国产福利| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费黄色在线免费观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 成人二区视频| 2022亚洲国产成人精品| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 黄色配什么色好看| 97在线视频观看| av黄色大香蕉| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产成人aa在线观看| 久久国产精品大桥未久av | 婷婷色av中文字幕| 我的老师免费观看完整版| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久热这里只有精品99| 亚洲国产精品专区欧美| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av在线观看视频网站免费| 日本欧美国产在线视频| 波野结衣二区三区在线| 国精品久久久久久国模美| av视频免费观看在线观看| 精品一区二区免费观看| 中文字幕亚洲精品专区| 中文欧美无线码| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲成色77777| 成人漫画全彩无遮挡| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲av男天堂| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲真实伦在线观看| 在线 av 中文字幕| 免费观看av网站的网址| 久久午夜福利片| 欧美激情国产日韩精品一区| 丰满迷人的少妇在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲不卡免费看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 超碰av人人做人人爽久久| 99热这里只有精品一区| 日本午夜av视频| 国产成人a∨麻豆精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 我的女老师完整版在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 男人舔奶头视频| 高清欧美精品videossex| 国产在线免费精品| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 成人综合一区亚洲| 国产精品人妻久久久影院| 久久精品国产a三级三级三级| 黄片无遮挡物在线观看| 青春草国产在线视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲最大成人中文| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产淫语在线视频| 国产亚洲欧美精品永久| 国产成人精品一,二区| 久久99热这里只有精品18| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲精品自拍成人| 欧美精品亚洲一区二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 最近手机中文字幕大全| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 一区二区三区乱码不卡18| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产又色又爽无遮挡免| 大片电影免费在线观看免费| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产成人91sexporn| 国产91av在线免费观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产爽快片一区二区三区| 国产精品无大码| 亚洲精品成人av观看孕妇| 永久网站在线| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲成色77777| 亚洲,一卡二卡三卡| 色5月婷婷丁香| 黑人猛操日本美女一级片| 联通29元200g的流量卡| 午夜激情久久久久久久| 国产淫语在线视频| 国产精品三级大全| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 男女国产视频网站| 久久这里有精品视频免费| xxx大片免费视频| 新久久久久国产一级毛片| 又大又黄又爽视频免费| 内地一区二区视频在线| 一区二区av电影网| av黄色大香蕉| 亚洲精品乱久久久久久| 国产免费又黄又爽又色| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 极品少妇高潮喷水抽搐| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 黑人高潮一二区| 精品亚洲成a人片在线观看 | 亚洲精品一二三| 男女国产视频网站| 国产精品不卡视频一区二区| 青春草亚洲视频在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久ye,这里只有精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 伦理电影免费视频| 日韩成人伦理影院| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产伦理片在线播放av一区| 一级毛片久久久久久久久女| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产熟女欧美一区二区| 亚洲va在线va天堂va国产| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产熟女欧美一区二区| 日韩亚洲欧美综合| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 午夜日本视频在线| 妹子高潮喷水视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲av综合色区一区| 国产黄频视频在线观看| 久热久热在线精品观看| 亚洲欧洲国产日韩| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日本vs欧美在线观看视频 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产在视频线精品| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产美女午夜福利| 日本与韩国留学比较| 韩国高清视频一区二区三区| 日本色播在线视频| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲av成人精品一二三区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲怡红院男人天堂| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲怡红院男人天堂| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲国产欧美在线一区| 久久这里有精品视频免费| 成人特级av手机在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 免费大片18禁| 亚洲中文av在线| 精品久久久久久久末码| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品一区www在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 少妇精品久久久久久久| 国产精品人妻久久久影院| 联通29元200g的流量卡| 舔av片在线| 99国产精品免费福利视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 黄色日韩在线| 大香蕉97超碰在线| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 秋霞在线观看毛片| 深夜a级毛片| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久久成人免费电影| 又黄又爽又刺激的免费视频.| av又黄又爽大尺度在线免费看| 男人添女人高潮全过程视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 中国美白少妇内射xxxbb| 日韩成人av中文字幕在线观看| 黄色一级大片看看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产片特级美女逼逼视频| 22中文网久久字幕| 婷婷色av中文字幕| 少妇人妻久久综合中文| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产探花极品一区二区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 三级国产精品欧美在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲不卡免费看| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美一级a爱片免费观看看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 91久久精品电影网| 欧美3d第一页| 亚洲国产av新网站| 联通29元200g的流量卡| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品一区二区在线观看99| 国产精品无大码| av女优亚洲男人天堂| 黄色配什么色好看| 国产视频首页在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 少妇人妻 视频| 久久久久网色| 亚洲最大成人中文| 一级a做视频免费观看| 久久精品国产亚洲av天美| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久人妻精品一区果冻| 中文字幕免费在线视频6| h日本视频在线播放| 我的女老师完整版在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久久久久久大av| 国产久久久一区二区三区| 最新中文字幕久久久久| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产精品成人在线| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精品自拍成人| 少妇 在线观看| 国产精品.久久久| av在线播放精品| 免费少妇av软件| 国产黄频视频在线观看| 插阴视频在线观看视频| 久久久精品免费免费高清| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲,一卡二卡三卡| h视频一区二区三区| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲四区av| 成人午夜精彩视频在线观看| 日本午夜av视频| 精品久久久久久久末码| 欧美97在线视频| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 色综合色国产| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 成年女人在线观看亚洲视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲不卡免费看| 五月伊人婷婷丁香| 久久久久性生活片| 成人毛片60女人毛片免费| 一区二区三区免费毛片| 欧美高清成人免费视频www| 国产成人免费观看mmmm| 欧美 日韩 精品 国产| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品人妻熟女av久视频| 久久久久久久久久久免费av| 一级片'在线观看视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 99久久中文字幕三级久久日本| 免费黄频网站在线观看国产| 各种免费的搞黄视频| 男人添女人高潮全过程视频| 色哟哟·www| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产爱豆传媒在线观看| 美女内射精品一级片tv| 赤兔流量卡办理| 国产成人免费观看mmmm| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美日韩视频精品一区| av女优亚洲男人天堂| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日日啪夜夜爽| 少妇人妻一区二区三区视频| 三级国产精品片| 寂寞人妻少妇视频99o| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 成人美女网站在线观看视频| 观看av在线不卡| 在线 av 中文字幕| 亚洲成色77777| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩av免费高清视频| 欧美成人午夜免费资源| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美精品一区二区免费开放| 久久精品夜色国产| 欧美xxⅹ黑人| 一级毛片我不卡| 成人免费观看视频高清| 亚洲色图综合在线观看| 在线精品无人区一区二区三 | av在线老鸭窝| 草草在线视频免费看| 嘟嘟电影网在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美精品亚洲一区二区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产精品久久久久久久久免| 日韩精品有码人妻一区| 丝袜喷水一区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久欧美国产精品| 精品少妇久久久久久888优播| 一个人看的www免费观看视频| 99久久精品国产国产毛片| 久久热精品热| 亚洲av综合色区一区| 亚洲欧美精品专区久久| 99热6这里只有精品| 午夜福利高清视频| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久久久网色| 1000部很黄的大片| 国产美女午夜福利| 日韩一本色道免费dvd| 欧美zozozo另类| 久久国产精品大桥未久av | 国产黄色视频一区二区在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 在线 av 中文字幕| 国产高潮美女av| a 毛片基地| 国产永久视频网站| 亚洲国产色片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费黄色在线免费观看| 永久免费av网站大全| 青春草国产在线视频| av播播在线观看一区| 午夜精品国产一区二区电影| 少妇丰满av| 观看免费一级毛片| 亚洲精品色激情综合| 亚洲av成人精品一区久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲美女视频黄频| videos熟女内射| 亚洲av福利一区| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产亚洲欧美精品永久| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 熟女av电影| 亚洲色图综合在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 一本久久精品| 亚洲av欧美aⅴ国产| 免费在线观看成人毛片| av免费观看日本| 老熟女久久久| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 在线精品无人区一区二区三 | 永久网站在线| 久久精品久久久久久久性| 国产精品一及|