氣相色譜法測(cè)定間硝基苯甲醛中的有關(guān)物質(zhì)

劉云峰，李海島，李 正，徐飛鵬，蔡 芳

(江蘇吉貝爾藥業(yè)股份有限公司，江蘇 鎮(zhèn)江 212009)

尼群地平為二氫吡啶類藥物，化學(xué)名為2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲酯乙酯，為鈣通道阻滯劑，臨床上主治原發(fā)性高血壓、繼發(fā)性高血壓及冠心病。其合成路線為兩步合成反應(yīng)，起始原料以間硝基苯甲醛與乙酰乙酸乙酯進(jìn)行Knoevenagel縮合反應(yīng)得中間體A，中間體A與β-氨基巴豆酸甲酯進(jìn)行分子內(nèi)環(huán)合反應(yīng)得到尼群地平產(chǎn)品[1]。起始物料的質(zhì)量好壞直接關(guān)系到最終產(chǎn)品的純度，由于間硝基苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛屬于同分異構(gòu)體，間硝基苯甲醛合成過(guò)程中可能帶入少量的苯甲醛或多硝基苯甲醛，為控制起始物料間硝基苯甲醛的質(zhì)量，我們參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]，采用GC法控制間硝基苯甲醛的有關(guān)物質(zhì)，獲得了較理想的效果。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent GC 7890A安捷倫氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器，Sartorius BP211D型電子天平。

1.2 試藥

丙酮為稀釋液，批號(hào)：20150917，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。苯甲醛，批號(hào)：QB-642500， qcchemical；鄰硝基苯甲醛，批號(hào)：PCL_#_Ni097， PCL；對(duì)硝基苯甲醛，批號(hào)：PCL_#_Ni098， PCL；3,5二硝基苯甲醛，批號(hào)：QC-B260400， qcchemical。間硝基苯甲醛，批號(hào)：20170305，20170306,20170307，武漢遠(yuǎn)成共創(chuàng)科技有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

2.1 色譜條件

以HP-1毛細(xì)管柱，25 m×0.32 mm×0.52 μm為色譜柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，起始柱溫120℃，維持14 min，以每分鐘60℃的速率升溫至180℃，維持6 min；檢測(cè)器溫度為240℃，進(jìn)樣口溫度為240℃；載氣為高純氮?dú)猓魉偌s20 mL/min，分流比20∶1。

2.2 專屬性試驗(yàn)

2.2.1 間硝基苯甲醛定位溶液的配制

取間硝基苯甲醛約12.5 mg，精密稱定，至50 mL容量瓶?jī)?nèi)，用稀釋液定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 苯甲醛定位溶液的配制

取苯甲醛約12.5 mg，精密稱定，至50 mL容量瓶?jī)?nèi)，用稀釋液定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 鄰硝基苯甲醛定位溶液的配制

取鄰硝基苯甲醛約12.5 mg，精密稱定，至50 mL容量瓶?jī)?nèi)，用稀釋液定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 對(duì)硝基苯甲醛定位溶液的配制

取對(duì)硝基苯甲醛約12.5 mg，精密稱定，至50 mL容量瓶?jī)?nèi)，用稀釋液定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.5 3,5-二硝基苯甲醛定位溶液的配制

取3,5-二硝基苯甲醛約12.5 mg，精密稱定，至50 mL容量瓶?jī)?nèi)，用稀釋液定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.6 混合定位溶液的配制

精密吸取上述五種定位溶液各1 mL，至10 mL容量瓶?jī)?nèi)，用稀釋液定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.7 系統(tǒng)適用性溶液的配制

精密稱取間硝基苯甲醛約0.5 g，精密吸取雜質(zhì)母液儲(chǔ)備液2.5 mL，置同一10 mL量瓶中，丙酮稀釋至刻度，備用。

2.2.8 樣品溶液的配制

精密稱取間硝基苯甲醛約0.5 g，置10 mL量瓶中，丙酮稀釋至刻度，備用。

2.2.9 專屬性實(shí)驗(yàn)

按照方法建立系統(tǒng)適用性，分別注入空白溶劑、各已知物質(zhì)定位溶液、混合定位溶液、樣品溶液各進(jìn)1針，空白溶劑見圖1，各已知物質(zhì)出峰順序見圖2，樣品溶液見圖3，各物質(zhì)間分離度大于1.5，空白溶劑無(wú)干擾，專屬性實(shí)驗(yàn)符合要求。

圖1 空白溶劑

出峰順序依次為苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛、間硝基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲醛圖2 各已知物質(zhì)出峰順序

圖3 間硝基苯甲醛樣品溶液

2.3 線性

間硝基苯甲醛、苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲醛在10～500 μg/mL范圍內(nèi)的線性方程分別為A=0.5129C-1.9130；A=0.7608C-0.4422；A=0.5308C-2.5812；A=0.5230C-2.4269；A=0.4881C-2.3307；相關(guān)系數(shù)(R2)分別為0.9997、0.9999、0.9998、0.9996、0.9990。苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲醛相對(duì)于間硝基苯甲醛的校正因子分別為0.67、0.97、0.98、1.05。

2.4 檢測(cè)限和定量限

將線性中10 μg/mL的溶液繼續(xù)用丙酮稀釋，依法進(jìn)樣，按信噪比S/N=3計(jì)算，間硝基苯甲醛、苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲醛的檢測(cè)限分別為5、3、5、5、5 ng；按信噪比S/N=10計(jì)算，間硝基苯甲醛、苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲醛的定量限分別為20、12、20、20、20 ng。

2.5 精密度試驗(yàn)

按方法配制間硝基苯甲醛樣品溶液和0.1%自身對(duì)照品溶液，平行配置6份。同一批次平行配制6份樣品溶液的色譜圖中相關(guān)雜質(zhì)的保留時(shí)間一致，檢出雜質(zhì)的個(gè)數(shù)、大小一致，總雜平均含量為0.17%，低于0.5%，6份樣品總雜含量的RSD為2.6%，小于5.0%，精密度試驗(yàn)良好。

2.6 準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度在雜質(zhì)限度溶液濃度的80%、100%、120%三個(gè)水平考察，每個(gè)濃度平行配制3份供試品溶液。苯甲醛回收率在101.44%～104.04%之間；鄰硝基苯甲醛回收率在100.88%～107.07%之間；對(duì)硝基苯甲醛回收率在102.93%～109.92%之間；3，5-二硝基苯甲醛回收率在103.51%～108.86%之間。苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛、3，5-二硝基苯甲醛的9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的RSD分別為1.06%、1.73%、1.82%、2.72%。

2.7 溶液的穩(wěn)定性

用系統(tǒng)適用性溶液作為供試品溶液，在室溫下分別于0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、18 h進(jìn)樣測(cè)定，考察各時(shí)間點(diǎn)雜質(zhì)的增長(zhǎng)情況。在18 h內(nèi)，0.1% 已知雜質(zhì)(苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲醛)的7份溶液RSD分別為0.64%、0.67%、1.78%、2.03%，因此0.1% 已知雜質(zhì)溶液在18 h內(nèi)是穩(wěn)定的。供試品溶液中，間硝基苯甲醛在18 h內(nèi)未產(chǎn)生新雜質(zhì)且主峰峰面積RSD為0.65%，表明供試品溶液在18 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.8 樣品測(cè)定

按上述試驗(yàn)條件，對(duì)三批間硝基苯甲醛進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見表1。

表1 間硝基苯甲醛有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果(%)

結(jié)論：間硝基苯甲醛樣品中，檢測(cè)出少量的苯甲醛、鄰硝基苯甲醛、對(duì)硝基苯甲醛，未檢出3,5-二硝基苯甲醛，總雜小于規(guī)定限度0.5%，符合要求。

3 結(jié)論

采用氣相色譜法測(cè)定間硝基苯甲醛的有關(guān)物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)方法準(zhǔn)確，可靠，專屬性強(qiáng)，可用于間硝基苯甲醛的質(zhì)量控制。