r-干擾素釋放試驗(yàn)在基層應(yīng)用的價(jià)值

吳進(jìn)鳳

（北京市昌平區(qū)結(jié)核病防治所 檢驗(yàn)科，北京 102200）

0 引言

結(jié)核病是由結(jié)核桿菌引起的慢性呼吸道傳染病，據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，每年全球因結(jié)核病導(dǎo)致死亡人數(shù)超過(guò)150 萬(wàn)，結(jié)核病是世界10 大死亡病因之一[1]。人體除了指甲和頭發(fā)，其他部位都有可能會(huì)患上結(jié)核病[2]，結(jié)核病的臨床表現(xiàn)多種多樣，各種結(jié)核病中最常見的是肺結(jié)核[3]。面對(duì)結(jié)核病臨床表現(xiàn)的復(fù)雜性，及時(shí)有效的檢測(cè)方法尤為重要，痰涂片抗酸染色、結(jié)核菌培養(yǎng)是目前臨床上最常用的檢測(cè)方法。痰涂片操作簡(jiǎn)便、快捷，但該方法陽(yáng)性率較低而且易被漏檢；結(jié)核桿菌培養(yǎng)是結(jié)核病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但該方法培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，不利于早期診治[4]。r-干擾素釋放試驗(yàn)和結(jié)核抗體檢測(cè)，是近幾年在臨床上應(yīng)用較多的免疫學(xué)檢測(cè)方法。通過(guò)對(duì)這兩種檢測(cè)方法敏感性的比較，分析r-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核病中的診斷價(jià)值和實(shí)用性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2015 年1 月至2018 年12 月在本所初治的肺結(jié)核患者共計(jì)283 人，其中男性174 人，女性109人。年齡16～89 歲，平均（39.80±18.97）歲。所選患者283 人均進(jìn)行痰涂片抗酸染色、r-干擾素釋放試驗(yàn)、結(jié)核抗體檢測(cè)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

肺結(jié)核患者診斷，依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)編寫的《臨床診療指南-結(jié)核病學(xué)分冊(cè)》[5]標(biāo)準(zhǔn)，非結(jié)核均經(jīng)臨床診斷排除。

1.3 方法

（1）痰涂片抗酸染色:采用萋-尼氏染色方法進(jìn)行處理[6]。涂片染色所用試劑均由珠海貝索生物有限公司生產(chǎn)。痰標(biāo)本涂片、染色、干燥、鏡檢。顯微鏡鏡檢結(jié)果報(bào)告如下:連續(xù)觀察300 視野，根據(jù)鏡下所見抗酸桿菌數(shù)量分級(jí)報(bào)告。藍(lán)色背景下抗酸桿菌顯現(xiàn)紅色，鏡下300 視野可見1～8 條以上抗酸桿菌為陽(yáng)性，鏡下未見抗酸桿菌為陰性。

（2）r-干擾素釋放試驗(yàn)（T-SPOT.TB）:使用結(jié)核感染T 細(xì)胞檢測(cè)試劑盒（Oxford immunotec ltd），實(shí)驗(yàn)操作按照免疫斑點(diǎn)干擾素釋放試驗(yàn)[6]和試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。抽取患者靜脈血5 mL，依次進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞提取與計(jì)數(shù)、孵育、抗原抗體結(jié)合、顯色、斑點(diǎn)計(jì)數(shù)。顯微鏡鏡下計(jì)數(shù)報(bào)告結(jié)果如下:抗原A 孔或抗原B 孔斑點(diǎn)數(shù)-空白孔斑點(diǎn)數(shù)≧6 為陽(yáng)性，提示有結(jié)核菌感染。反之為陰性。

（3）結(jié)核抗體檢測(cè):使用上海奧普生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的結(jié)核分枝桿菌IgG 抗體檢測(cè)試劑盒，操作按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。結(jié)果判讀如下:反應(yīng)孔有紅色質(zhì)控點(diǎn)，中間有紅色斑點(diǎn)出現(xiàn)為陽(yáng)性；只有紅色質(zhì)控點(diǎn)，中間無(wú)紅色斑點(diǎn)為陰性。

1.4 觀察指標(biāo)

分析283 人的檢測(cè)結(jié)果。根據(jù)痰涂片的結(jié)果，分成涂片陰性組和涂片陽(yáng)性組。對(duì)這兩組T-SPOT.TB和結(jié)核抗體的結(jié)果進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)T-SPOT.TB 在結(jié)核病診斷中的價(jià)值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

分析數(shù)據(jù)使用SPSS 2.0 軟件進(jìn)行，數(shù)據(jù)資料用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.6 質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)操作人員嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 225 例結(jié)核病患者痰涂片結(jié)果分析

283 例痰涂片結(jié)果:萋-尼氏染色鏡檢，涂陰246 例，占86.93 %（246/283）；涂 陽(yáng)37 例，占13.07 %（37/283）。

2.2 涂片陰性組，T-SPOT.TB 與結(jié)核抗體結(jié)果比較

涂片陰性組共246 例，T-SPOT.TB 陽(yáng)性率為52.85 %（130/246），高于結(jié)核抗體的13.41 %（33/246）.有顯著性差異（χ2=86.323，P＜0.05），見表1。

表1 涂片陰性組T-SPOT.TB 與結(jié)核抗體結(jié)果比較

2.3 涂片陽(yáng)性組，T-SPOT.TB 與結(jié)核抗體結(jié)果比較

涂片陽(yáng)性組共37 例，T-SPOT.TB 陽(yáng)性率為91.89 %（34/37），高于結(jié)核抗體的29.73 %（11/37），有顯著性差異（χ2=29.997，P＜0.05），見表2。

表2 涂片陽(yáng)性組T-SPOT.TB 與結(jié)核抗體結(jié)果比較

2.4 T-SPOT.TB 結(jié)果與結(jié)核抗體結(jié)果在結(jié)核病診斷中的比較

T-SPOT.TB 診斷結(jié)核病的敏感度為57.95 %（164/283），高于結(jié)核抗體的敏感度15.55 %（44/283），有顯著性差異（χ2=109.454,P＜0.05），見表3。

表3 T-SPOT.TB 與結(jié)核抗體在結(jié)核病中診斷結(jié)果比較

3 討論

我國(guó)是全球結(jié)核病疫情較為嚴(yán)重的國(guó)家之一，患者人數(shù)多。我國(guó)結(jié)核病防治工作的重點(diǎn)，是對(duì)結(jié)核病患者進(jìn)行早診斷、早治療，提高患者病愈后的生活質(zhì)量[7]，然而前來(lái)就診的患者，大多臨床表現(xiàn)都不典型，給臨床的快速診斷增加了很大難度[8]。目前，痰涂片和結(jié)核菌培養(yǎng)是結(jié)核病診斷常用的檢測(cè)方法，但是由于痰涂片受標(biāo)本質(zhì)量、閱片者經(jīng)驗(yàn)等因素影響，陽(yáng)性率較低；而痰培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)拖延診斷。因此急需快速精準(zhǔn)的檢測(cè)方法輔助臨床診斷[9]。近幾年，結(jié)核抗體和T-SPOT.TB 這兩種免疫學(xué)檢測(cè)方法在臨床上廣泛應(yīng)用。尤其對(duì)于留痰困難（例如:精神科的結(jié)核病患者，留痰非常困難）、干咳無(wú)痰患者，免疫學(xué)檢測(cè)方法更加適用。T-SPOT.TB 原理:結(jié)核病患者外周血中的效應(yīng)T 淋巴細(xì)胞對(duì)結(jié)核有特異性，在受到結(jié)核分枝桿菌刺激后，會(huì)釋放γ-干擾素，是目前檢測(cè)結(jié)核抗原特異性T 淋巴細(xì)胞敏感度最高的方法[10,11]。

本文通過(guò)對(duì)283 例結(jié)核病患者的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，涂陰人數(shù)占86.93 %（246/283），涂陽(yáng)人數(shù)占13.07 %（37/283）。涂片陰性組T-SPOT.TB陽(yáng)性率為52.85 %（130/246），高于結(jié)核抗體的13.41 %（33/246）.有顯著性差異。涂片陽(yáng)性組，T-SPOT.TB 陽(yáng)性率為91.89 %（34/37），高于結(jié)核抗體的29.73 %（11/37），有顯著性差異。T-SPOT.TB 檢測(cè)結(jié)果顯示其敏感度為57.95 %（164/283），高于結(jié)核抗體的敏感度15.55 %（44/283）。以上結(jié)果數(shù)據(jù)與徐靜[12]和李才信[13]等相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果有一定差異。

本研究中三種檢測(cè)方法，T-SPOT.TB 敏感性最高，其次是結(jié)核抗體檢測(cè)，痰涂片最低。通過(guò)涂片分組后對(duì)兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較、分析得出:兩種免疫學(xué)檢測(cè)方法中，結(jié)核抗體檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，快捷，而該方法的敏感性各文獻(xiàn)報(bào)道有很大差異。而T-SPOT.TB 的敏感度明顯高于結(jié)核抗體的敏感度。作為一種新的結(jié)核病診斷方法，T-SPOT.TB 操作簡(jiǎn)便，所需時(shí)間短，敏感性高，是診斷結(jié)核病的“金標(biāo)準(zhǔn)”之外的非常有效的診斷方法，既可以廣泛的應(yīng)用于結(jié)核感染篩查[14,15]，又可以作為涂片以外的輔助診斷指標(biāo)[9,16]，有利于結(jié)核病早期診斷與治療。

T-SPOT.TB 更適用于基層結(jié)防機(jī)構(gòu)，首先，不需要特殊儀器設(shè)備，人工顯微鏡下即可判讀，操作簡(jiǎn)便；其次，對(duì)于不能自主留痰的患者，抽血檢測(cè)更加簡(jiǎn)單易行；再其次，本單位承擔(dān)轄區(qū)內(nèi)多所高校以及200 多萬(wàn)人口（其中流動(dòng)人口多于原住人口）的結(jié)核病防控工作，在處理結(jié)核病疫情和突發(fā)事件中，此項(xiàng)檢查也可用于密切接觸者篩查。綜上所述，T-SPOT.TB 適合在基層結(jié)防機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用。