可疑斑跡前列腺特異性抗原檢測(cè)1例

（昆明法醫(yī)院司法鑒定中心，云南 昆明 650034）

1 案 例

1.1 簡要案情

某夫妻攜帶一張附著有可疑斑跡且潮濕的衛(wèi)生紙到本鑒定中心，該衛(wèi)生紙為丈夫在家里客廳垃圾桶中所撿。該夫妻要求檢驗(yàn)衛(wèi)生紙上可疑斑跡中是否有男性精液及女性成分，對(duì)其進(jìn)行DNA檢測(cè)，并與夫妻雙方DNA分型結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。

1.2 檢驗(yàn)過程及結(jié)果

通過金標(biāo)試劑條法對(duì)衛(wèi)生紙上的斑跡進(jìn)行人精液前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）檢驗(yàn)，結(jié)果呈陽性（圖1），提示該衛(wèi)生紙上含有人精液或人前列腺液。

圖1 衛(wèi)生紙上可疑斑跡PSA檢測(cè)結(jié)果

剪取2 cm×1 cm的衛(wèi)生紙置于離心管中，加入TES 1 mL、10%十二烷基硫酸鈉（sodium dodecylsulfate，SDS）50μL、20mg/mL蛋白酶K 5μL，混勻，37℃溫浴過夜，以10 625×g離心20 min，取上清液150 μL備用，沉淀用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌3次，以10625×g離心20min，棄上清液后備用。分別于上清液中加入2μL蛋白酶K、50μL 10%Chelex-100，沉淀中加入 5 μL 蛋白酶 K、10 μL 1 mol/L二硫蘇糖醇（dithiothreitol，DTT）、150 μL 10%Chelex-100，提取DNA，采用Chelex-100法提取夫妻雙方血樣的DNA，使用PowerPlex?21試劑盒（美國Promega公司）進(jìn)行PCR復(fù)合擴(kuò)增，擴(kuò)增體系為10μL。使用3130基因分析儀（美國AB公司）對(duì)PCR復(fù)合擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離，采用GeneMapper ID-X v1.5軟件（美國AB公司）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

上清液中未提取到DNA，沉淀中提取的DNA分型結(jié)果顯示，沒有三等位基因或多個(gè)等位基因混合的基因座，表明該衛(wèi)生紙斑跡中的DNA來源于單個(gè)個(gè)體，無混合成分，且Amelogenin性別基因座為XY。綜合分析認(rèn)為，該衛(wèi)生紙上的可疑斑跡為單個(gè)男性個(gè)體所留。

將該衛(wèi)生紙上的DNA與丈夫的DNA進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果并不匹配，表明該衛(wèi)生紙上的斑跡不是丈夫所留。將衛(wèi)生紙上的DNA與夫妻雙方DNA聯(lián)合比對(duì)發(fā)現(xiàn)，衛(wèi)生紙上DNA的所屬者與夫妻雙方存在親子關(guān)系，根據(jù)本鑒定中心統(tǒng)計(jì)的20個(gè)STR基因座遺傳多態(tài)性分布頻率，按照《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》（GB/T 37223—2018）中親權(quán)指數(shù)（parentage index，PI）的計(jì)算方法，該衛(wèi)生紙上DNA所屬者與夫妻雙方的累積親權(quán)指數(shù)（combined parentage index，CPI）為 2.10×109，在不考慮雙胞胎或者近親情況的前提下，從遺傳學(xué)角度支持夫妻雙方是衛(wèi)生紙上DNA所屬者的生物學(xué)父母親。

隨后向夫妻雙方了解情況，自述家中育有一兒一女，兒子年僅5歲，因?yàn)閮鹤佑衅鹨古拍蛑良抑欣爸械牧?xí)慣，妻子懷疑被檢衛(wèi)生紙是浸有兒子尿液的衛(wèi)生紙。隨后本鑒定中心采集該5歲男童的血樣進(jìn)行DNA檢驗(yàn)及比對(duì)，結(jié)果顯示衛(wèi)生紙上DNA所屬者與該男童為同一個(gè)體。按照《個(gè)體識(shí)別技術(shù)規(guī)范》（SF/Z JD0105012—2018）中似然率（likelihood ratio，LR）的計(jì)算方法，得出衛(wèi)生紙上DNA與該男童DNA的LR值為1.58×1027，提示衛(wèi)生紙上的DNA系該男童所留。

針對(duì)被檢衛(wèi)生紙PSA檢測(cè)結(jié)果呈陽性，本中心取被檢衛(wèi)生紙進(jìn)行沉渣涂片染色鏡檢，未發(fā)現(xiàn)精子。此外，本中心還采集了健康4歲男童的尿液、稀釋尿液和末段尿液進(jìn)行人精液PSA檢測(cè)和DNA檢測(cè)，PSA檢驗(yàn)結(jié)果呈陰性（圖2），對(duì)其DNA進(jìn)行檢測(cè)，未檢出擴(kuò)增產(chǎn)物。

圖2 健康4歲男童的尿液PSA檢測(cè)結(jié)果

2 討 論

PSA是一種相對(duì)分子質(zhì)量為33 000～34 000的酸性糖蛋白，在前列腺組織和精液中被發(fā)現(xiàn)，PSA在精液中的平均質(zhì)量濃度為 200～5 500 μg/mL[1-2]，在法醫(yī)物證學(xué)鑒定中可用于確證可疑斑跡是否為人精斑，但在精液以外的多種人體體液中也可檢測(cè)到PSA，例如尿液、血液、乳汁及羊水等[3-4]。男性在排尿時(shí)，前列腺液會(huì)與尿液混合，尿道周圍的腺體也會(huì)分泌少量PSA[5]，故尿液中可以檢測(cè)到PSA。但前列腺作為男性性器官之一，在青春期逐漸發(fā)育成熟并分泌前列腺液，本案中被檢衛(wèi)生紙PSA檢驗(yàn)結(jié)果呈陽性，且在衛(wèi)生紙上檢出單個(gè)男性個(gè)體DNA，而該男性個(gè)體為5歲男童，說明被檢衛(wèi)生紙上的PSA來自尚未到青春期及性發(fā)育成熟期的5歲男童，結(jié)合男童母親描述被檢衛(wèi)生紙被男童尿液浸濕過的情況，推測(cè)PSA檢驗(yàn)陽性可能為男童尿液中混有PSA所致。本例案情的特殊性提示我們，在日常法醫(yī)物證學(xué)鑒定工作中，遇到可疑斑跡DNA檢測(cè)（或男女混合斑跡檢測(cè)）的委托，尤其在PSA檢驗(yàn)呈陽性時(shí)，切忌先入為主地認(rèn)為是性成熟個(gè)體所留，在尊重被鑒定人隱私的前提下，需充分了解案情細(xì)節(jié)，對(duì)可能涉及的男女性個(gè)體，甚至是子女或家庭成員，在條件允許的情況下應(yīng)盡可能采集相關(guān)個(gè)體的樣本進(jìn)行比對(duì)，有助于在出現(xiàn)類似特殊案例時(shí)，能結(jié)合案情給出科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)及明確的鑒定意見。