利用紅外光譜法快速測定血竭中摻假松香的含量

廖嘉寶 張 鵬 譚 沛 王麗麗

華潤三九醫(yī)藥股份有限公司 廣東 深圳 515110

血竭市價(jià)昂貴，多有摻假情況，其中松香摻假是不法商家慣用手法。目前《中國藥典》2015年版中，血竭質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對松香的檢測方法，其判斷標(biāo)準(zhǔn)為石油醚層不得顯綠色，但不法商家加入染料，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成干擾，無法正確判斷真?zhèn)?，所以該方法有不合理之處。運(yùn)用紅外光譜對血竭進(jìn)行分析，紅外輻射通過固體中藥樣品時(shí)，將在不同波長處出現(xiàn)它們各自特有的吸收峰（帶）強(qiáng)度的疊加，以波長或波數(shù)為橫坐標(biāo)，透過率或吸光度為縱坐標(biāo)繪圖，得到樣品的特征吸收曲線為紅外吸收光譜。以光譜的宏觀形貌以及吸收峰的位置、強(qiáng)度和形狀微觀指紋來定性判斷或鑒別樣品之用。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器設(shè)備：Spectrum 100光譜儀（PerkinElmer,Inc.），DTGS檢測器，儀器分辨率優(yōu)于4cm-1,基線噪聲6000：1～2000：1，波數(shù)范圍 4000～400cm-1，基線傾斜0.1%T～0.5%T，透過率準(zhǔn)確度0.1%T，透過率重復(fù)性0.1%T～0.5%T，吸光度重復(fù)性＜0.005。

1.2 樣品來源：血竭粉購于北京同仁堂（亳州）飲片有限責(zé)任公司，按2015年版《中國藥典》鑒定。松香購于亳州藥材市場，光譜純溴化鉀（KBr）購于四川自貢化工研究設(shè)計(jì)院。飲片血竭a、b、c分別購于深圳三家連鎖藥店、顆粒g為某廠家批號(hào)為403481T的血竭粉配方顆粒、顆粒f為某廠家批號(hào)為1210097的血竭粉配方顆粒。

1.3 樣品制備：血竭及松香粉碎后過200目（74μm）篩，備用。精密稱取血竭樣品粉末和松香樣品粉末，制備出 含 有 0.00%，10.00%，20.00%，30.00%，40.00%，50.00%，60.00%（質(zhì)量百分比）松香的血竭（血竭+松香）樣品系列，備用。

取3mg的待測樣品與150mg的KBr碎晶置于瑪瑙研缽中，磨細(xì)，并使其混合均勻。將研細(xì)混勻的粉末傾入13mm壓片模具中，使其鋪布均勻，加壓至0.8～1GPa，保持1min，使用壓片機(jī)將其壓成圓形薄片，然后放入紅外光譜儀樣品支架進(jìn)行測試。在掃描待測樣品前，先用純KBr按前述方法壓制成薄片，按照與掃描待測樣品相同的參數(shù)設(shè)置方式進(jìn)行測試，得到光譜背景。接下來掃描待測樣品的光譜時(shí)，儀器會(huì)自動(dòng)進(jìn)行背景扣除，得到待測樣品的真實(shí)光譜。

2 結(jié)果

2.1 血竭飲片和摻偽松香的鑒別：由血竭的紅外光譜圖［圖1（a）］可以看出，主要的吸收峰有：3329±2cm-1、2932±2cm-1、2850±2cm-1、1710±2cm-1、1605±2cm-1、1499±2cm-1、1451±2cm-1、1355±2cm-1、1268±2cm-1、1199±2cm-1、1176±2cm-1、1112±2cm-1、821±2cm-1、761±2cm-1和699±2cm-1。松香的紅外光譜圖［圖1（b）］可以看出，主要的吸收峰有：2930±2cm-1、2867±2 cm-1、2650±2cm-1、2533±2cm-1、1693±2cm-1、1459±2cm-1、1385±2cm-1、1275±2cm-1、1183±2cm-1、1153±2 cm-1、947±2cm-1、896±2cm-1、830±2cm-1、715±2cm-1、664±2cm-1和543±2cm-1。

2.2 含量分析：這里特指中藥血竭中摻松香的分析。分析時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎選取血竭中某一個(gè)特征峰的強(qiáng)度以及松香中的某一個(gè)特征峰的強(qiáng)度為依據(jù)，利用這兩個(gè)特征峰的相對強(qiáng)度可從預(yù)先做好的工作曲線得到含量的結(jié)果。譜峰強(qiáng)度和兩特征峰的相對強(qiáng)度按基線法確定峰強(qiáng)度，相對峰強(qiáng)度法計(jì)算相對強(qiáng)度。

2.2.1 基線法確定峰強(qiáng)度：從待測樣品的紅外吸收光譜，所選擇的特征譜帶（見圖2）波長d的譜強(qiáng)度。在譜帶的兩端畫一切線(被稱為基線)ac。計(jì)算分析波長d處的總吸光度為A，扣除基線以下噪聲背景得譜峰的吸光度為A1。常以A1定義為譜峰的吸收強(qiáng)度。

圖2 基線法畫法舉例

2.2.2 相對峰強(qiáng)度法：中藥樣品的相對峰強(qiáng)度計(jì)算法是指在同一張紅外光譜圖上選擇兩個(gè)特征峰，b1和b2，如圖3所示分別讀取兩個(gè)峰的峰強(qiáng)度A11,A21。按下式計(jì)算這兩個(gè)峰的強(qiáng)度比r。rb1/b2=A11/A21或rb2/b1=A21/A11。

圖3 相對峰強(qiáng)度法畫法舉例

2.3 血竭藥材中摻松香含量分析：分述如下。

2.3.1 工作曲線的繪制：確定血竭的主峰為1112cm-1［見圖4（a）］，而松香的主峰為1693cm-1［見圖4（h）］。由圖可見，隨著松香含量的增多，血竭主峰的相對強(qiáng)度逐漸下降而松香的主峰逐漸升高。按照基線法分別測得1112cm-1和1693cm-1處譜帶的峰高吸光度值A(chǔ)1和A2，再求出這兩個(gè)譜帶的相對峰強(qiáng)比的值y（A1112/A1693）（見表1），經(jīng)最小二乘法擬合得到相對峰強(qiáng)比與松香百分含量x的線性方程：y=0.0076x+0.2202，R2=0.9270。在相同實(shí)驗(yàn)條件下測量未知試樣的紅外光譜，確定相應(yīng)兩峰的強(qiáng)度及計(jì)算相對峰強(qiáng)度比，利用該工作曲線可確定未知的血竭藥材中摻松香的含量。

圖4 血竭中摻不同比例松香的紅外光譜圖

2.3.2 樣品檢測：對數(shù)批血竭配方顆粒及飲片進(jìn)行紅外光譜掃描，根據(jù)血竭及松香的特征峰判斷是否有松香摻假現(xiàn)象，結(jié)果見圖5。由圖譜結(jié)果看，b、c、f、g均檢出松香特征峰，其中藥店購得血竭b和c與松香圖譜相似度極高，松香特征峰明顯，可見b、c兩批藥材是以大量松香充作血竭，血竭配方顆粒f、g摻有不同比例的松香，經(jīng)峰強(qiáng)度計(jì)算可計(jì)算摻假比例分別為＜10%和23%。a藥材未檢出有松香。

3 討論

采用紅外光譜對血竭進(jìn)行分析，不但可以鑒別是否摻雜松香，并且能通過某些特征譜帶或特征峰的相對強(qiáng)度來確定樣品中松香酸作半定量分析。經(jīng)檢測的血竭藥材及配方顆粒紅外圖譜顯示，目前血竭藥材資源混亂，5批藥材和配方顆粒中有4批有松香摻假情況，其中b、c兩批藥材摻假比例頗高，但依然在連鎖藥店中銷售，可見質(zhì)控水平急需提高，否則危害消費(fèi)者的健康。目前所建立檢測松香較為準(zhǔn)確的方法多為HPLC、HPLC-DAD法等方法，但這些方法從時(shí)效、環(huán)保角度看并無優(yōu)勢，而紅外光譜分析操作快速、簡便，重現(xiàn)性好，所用試劑環(huán)保，可對樣品作半定量分析，能滿足快速檢測血竭中摻假松香的需求。