索斯諾夫獨(dú)活對黃瓜尖孢鐮刀菌的抑制作用及田間防效

柳春燕　馬群飛　叢蘊(yùn)喆　陳靠山

摘 要：目的：研究索斯諾夫獨(dú)活對黃瓜枯萎病病原菌的抑制效果。方法：用乙醇提取獲得獨(dú)活提取物，采用生長速率法測定提取物對尖孢鐮刀菌的抑制作用，用小區(qū)田間試驗(yàn)測定防治效果。結(jié)果：索斯諾夫獨(dú)活的抑菌效果高于中國短毛獨(dú)活的，其抑菌中濃度EC50為0.1175，而中國獨(dú)活的EC50為0.3181。用索斯諾夫獨(dú)活提取物進(jìn)行田間防效試驗(yàn)，防治效果在84.1%～86.1%，優(yōu)于葉枯唑的。結(jié)論：索斯諾夫獨(dú)活具有很強(qiáng)的抑制病原菌的作用，有效濃度是中國短毛獨(dú)活的3倍，可初步確定索斯諾夫獨(dú)活比中國的短毛獨(dú)活具有更高的抗菌殺菌活性成分。

關(guān)鍵詞：索斯諾夫獨(dú)活;尖孢鐮刀菌;抑菌;防效

中圖分類號 S435文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A文章編號 1007-7731（2019）15-0088-03

尖孢鐮刀菌黃瓜?；停‵usarium oxysporum f.sp cucumerinum）是引起黃瓜枯萎病（Cucumber fusarium wilt）、影響黃瓜生產(chǎn)的毀滅性土傳病原菌，可借助雨水、灌溉水等進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播，露地和保護(hù)地栽培連作地區(qū)發(fā)生尤為嚴(yán)重[1]。使用化學(xué)藥劑防治，容易產(chǎn)生抗藥性，也易引起土壤環(huán)境污染問題，因此，尋求無公害低殘留的植物源殺菌劑已成為生物農(nóng)藥研究的熱點(diǎn)之一[2]。

獨(dú)活屬在全世界的分布量約60種，多數(shù)分布于歐洲與亞洲地區(qū)，我國有23種。中藥獨(dú)活是傘形科重齒毛當(dāng)歸的干燥根（Angelica pubescens Maxim. f. biserrata），其性微溫、味辛苦，具有祛風(fēng)除濕、通痹的作用[3]，主產(chǎn)于四川、湖北、安徽等地，主要為栽培種[4]。獨(dú)活在俄羅斯境內(nèi)分布有40多個(gè)品種，主要為野生種，其中索斯諾夫獨(dú)活（Heracleum sosnowskyi）的栽培面積最廣，大約為100萬hm2，在當(dāng)?shù)乇环Q為無用的“毒草”。

獨(dú)活在臨床上是治療風(fēng)濕的首選藥[5]，但臨床應(yīng)用數(shù)量有限。當(dāng)前，獨(dú)活提取物在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上已有了一定的應(yīng)用研究，例如，張知俠研究表明，短毛獨(dú)活精油對小麥紋枯病菌（Rhizoctonia cerealis van der Hoeven）、油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum （Lib）de Bary）、辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici Leonian）均具有抑制作用[6];李敏敏等研究表明，獨(dú)活乙醇提取物中含具有高效抑制柑橘炭疽菌的活性物質(zhì)[7];加拿大獨(dú)活（Heracleum maximum）含有抗細(xì)菌的香豆素[8]，伊朗獨(dú)活（Heracleum persicum）揮發(fā)油中的化學(xué)成分1，8-桉葉和己酯對5種鐮刀菌具有抑制作用、但不明顯[9]。

目前，索斯諾夫獨(dú)活對植物病原真菌的抑菌活性尚未見報(bào)道。為此，本研究以尖孢鐮刀菌黃瓜?；蜑槟Ｊ讲≡?，研究了索斯諾夫獨(dú)活乙醇提取物（以下簡稱俄羅斯獨(dú)活）和短毛獨(dú)活乙醇提取物（以下簡稱中國獨(dú)活）對病原真菌的抑制作用，并且對俄羅斯獨(dú)活提取物進(jìn)行了田間防效試驗(yàn)，為俄羅斯獨(dú)活作為植物源殺菌劑在解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的土傳病害問題提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試植物 索斯諾夫獨(dú)活，由俄羅斯醫(yī)學(xué)技術(shù)科學(xué)院俄籍華僑司懷珠院士提供并鑒定。中國獨(dú)活購自亳州中藥材市場，由皖南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院年四輝副教授鑒定為短毛獨(dú)活（Heracleum moellendorffii）。

1.1.2 供試菌種 尖孢鐮刀菌黃瓜?；?，由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所齊軍山研究員分離鑒定并提供，在PDA培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 獨(dú)活提取物的制備 參照王樹桐的方法[10]，略有改進(jìn)。取經(jīng)粉碎的獨(dú)活20g，加80%乙醇100mL，30℃、150r/min條件下恒溫振蕩提取24h，4層紗布過濾，5000r/min離心10min，取上清液，再經(jīng)0.45μm膜二次過濾，取上清液，45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，乙醇回收。收集提取物稱量，計(jì)算得率。

1.2.2 獨(dú)活提取物對尖孢鐮刀菌菌絲生長的抑制作用 取提取物2g溶于20mL的50%乙醇中作為母液，4℃下保存。取上述母液1mL與99mLPDA培養(yǎng)基混合均勻制成含1g/L的帶藥培養(yǎng)基，倒入8.5cm平板，冷卻后在平板中央接直徑0.6cm的尖孢鐮刀菌菌片。重復(fù)4次。以純PDA培養(yǎng)基平板作為空白對照，以含有0.5%乙醇的PDA培養(yǎng)基作本底對照。置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，接種后3d、5d、7d、10d分別測量菌落大?。ㄓ檬纸徊娣y量菌落直徑），計(jì)算抑菌率。計(jì)算公式如下：

抑菌率（%）=（對照凈生長量-處理凈生長量）/對照凈生長量×100[11]

在1g/L帶藥培養(yǎng)基基礎(chǔ)上分別以2、1、0.5、0.125g/L濃度梯度的帶藥培養(yǎng)基接種尖孢鐮刀菌后3d（72h），測量菌落大小，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用DPS軟件做毒力回歸方程，計(jì)算EC50值。

1.2.3 田間防效試驗(yàn) 田間試驗(yàn)點(diǎn)分別設(shè)在萊陽市穴坊鎮(zhèn)東富山村和照旺莊鎮(zhèn)西淘章村2個(gè)農(nóng)戶的大棚里，大棚面積均為540m2（9m×60m）。棚內(nèi)連續(xù)2年種植黃瓜，黃瓜品種均為青翠一號。小區(qū)實(shí)驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理：（1）俄羅斯獨(dú)活提取物1000倍噴施;（2）俄羅斯獨(dú)活提取物2000倍噴施;（3）葉枯唑（湖北鑫農(nóng)化工生產(chǎn)）600倍噴施;（4）清水對照。重復(fù)3次，小區(qū)面積24m2。東富山村大棚于2019年3月9號定植，西淘章村于2019年2月28日定植。2棚定植緩苗后每隔15d噴施1次，4月22日棚內(nèi)已發(fā)生枯萎病，對各處理進(jìn)行病情調(diào)查，計(jì)算病情指數(shù)和相對防效。病情分級標(biāo)準(zhǔn)為5級∶0級：全株無病;1級：全株25%以下葉片萎蔫;2級：全株25%～50%葉片萎蔫;3級：全株50%以上葉片萎蔫;4級：因病枯死。

2 結(jié)果與分析