細(xì)氈毛忍冬對(duì)四氯化碳致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

何云　俸婷婷　劉暢　高月　周枝　張敏　周英

摘 要：本文旨在研究細(xì)氈毛忍冬水提物和醇提物對(duì)四氯化碳致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及差異。通過CCl4致大鼠急性肝損傷模型，檢測(cè)大鼠肝組織丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-px）活性;檢測(cè)大鼠血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、谷胱甘肽（GSH）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（TBIL）活性以及肝臟指數(shù)和肝組織病理學(xué)檢查（H.E.染色），研究細(xì)氈毛忍冬的保肝作用。結(jié)果顯示，與模型組相比，細(xì)氈毛忍冬各劑量組均可明顯降低血清ALT、AST、ALP、TBIL、LDH和γ-GT的活性和減少肝組織MDA含量（ P < 0.05， P < 0.01），并升高肝組織SOD，GSH-px的活性以及大鼠血清中ALB、GSH的活性（ P < 0.05， P < 0.01），該研究表明細(xì)氈毛忍冬對(duì)CCl4致大鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用，且醇提物優(yōu)于水提物。

關(guān)鍵詞：細(xì)氈毛忍冬;保肝;急性肝損傷;四氯化碳

中圖分類號(hào)：R965.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1008-0457（2019）04-0024-05 國(guó)際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2019.04.005

Protective Effects of? ?Lonicera similis ?Hemsl. on CCl4 -induced Acute Liver Injury in Rats

HE Yun1，F(xiàn)ENG Ting-ting2，4，5，LIU Chang2，GAO Yue3，ZHOU Zhi3，ZHANG Min4，5 ，ZHOU Ying2，4，5*

（1.College of Pharmaceutical Sciences，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China; 2.School of Pharmacy，Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550025，China; 3.College of Brewing and Food Engineering，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China; 4.National & Local Joint Engineering Research Center for the Exploitation and Utilization Technology of Medicine and Food Dual-use Resources in the Southwest of China，Guiyang，Guizhou 550025，China; 5.Guizhou Engineering Research Center for the Exploitation and Utilization Technology of Medicine and Food Dual-use Resources，Guiyang，Guizhou 550025，China）

Abstract：To investigate the protective effects of aqueous extracts and ethanol extracts of ?Lonicera similis ?Hemsl. on carbon tetrachloride induced liver injury in rats. Acute liver injury was induced by CCl4 in rats. The activities of malondialdehyde （MDA），superoxide dismutase （SOD） and glutathione peroxidase （GSH-px） levels in liver tissue，the activities of gamma-glutamyl transpeptidase （γ-GT），alanine transaminase （ALT），lactate dehydrogenase （LDH），glutathione transaminase （AST），albumin （ALB），glutathione（GSH）alkaline phosphoric acid （ALP），total bilirubin （TBIL） in serum，liver index and liver histopathological examination （H.E. staining） were measured in acute liver injury rats by carbon tetrachloride. Compared with the model group，the ?Lonicera similis ?Hemsl. aqueous extracts and ethanol extracts administration groups could significantly reduce activities of ALT，AST，ALP，TBIL，LDH and γ-GT in serum，content of MDA，and increase SOD and GSH-px activity significantly in the liver tissue （ P < 0.05 or ?P < 0.01），increase ALB activity and GSH activity in rat serum（ P < 0.05 or ?P < 0.01）.? These results indicate that the ethanol extract and aqueous extracts of the ?Lonicera similis ?Hemsl. had protective effects on liver，and effects of the ethanol extract were better than aqueous extracts.

Key words： Lonicera similis ?Hemsl.; hepatoprotective; liver acute injury; carbon tetrachloride

細(xì)氈毛忍冬（ Lonicera similis ?Hemsl.）是忍冬科忍冬屬灰氈毛忍冬[1]（ Lonicera macranthoides ?Hand.-Mazz.）的亞屬植物，記載于《中國(guó)植物志》[2]，為忍冬屬植物細(xì)氈毛忍冬干燥初開的花或花蕾，有清熱解毒和疏風(fēng)散熱的功效，在《貴州省中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》、《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》和《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》均有收載[3-5]，灰氈毛忍冬的藥理作用研究較為透徹[6-11]，但細(xì)氈毛忍冬保肝作用研究鮮見報(bào)道。本研究通過CCl4致大鼠急性肝損傷的模型，將細(xì)氈毛忍冬水提物及70%醇提物保肝作用進(jìn)行了比較研究，探究細(xì)氈毛忍冬的保肝作用差異，旨在為合理開發(fā)利用細(xì)氈毛忍冬以及臨床應(yīng)用奠定數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑

超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-px）、還原型谷胱甘肽（GSH）試劑盒（南京建成生物工程研究所），聯(lián)苯雙酯（萬邦德制藥集團(tuán)股份有限公司），75%醫(yī)用酒精（貴州鑫源衛(wèi)生制品有限公司），四氯化碳（富宇精細(xì)化工有限公司），其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 藥材

細(xì)氈毛忍冬（ L.similis ?Hemsl.）干燥花蕾采自貴州省遵義市綏陽縣，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為正品。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，清潔級(jí)，雄性，體重180-220 g;購自重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（渝）2017-0007。

1.4 儀器

千分之一電子天平（FA1104，上海梁平儀器儀表有限公司），恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋（DK-98-Ⅱ，天津市泰斯特儀器有限公司），醫(yī)用離心機(jī)（TG16G，鹽城市凱特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），多功能酶標(biāo)儀（3020-601，Therom Fisher Scientific），組織勻漿機(jī)（FSH-2，金壇市迅生儀器），全自動(dòng)生化儀（CS-1200，迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司）。

1.5 保肝試驗(yàn)方法

1.5.1 細(xì)氈毛忍冬提取物的制備

水提物的制備：分別將細(xì)氈毛忍冬按照料液比為1∶20的蒸餾水加熱回流提取3次，每次1.5 h，合并3次濾液，減壓濃縮至浸膏，即得細(xì)氈毛忍冬水提物（XZS）。

醇提物的制備：分別將細(xì)氈毛忍冬按照料液比為1∶20的70%乙醇加熱回流提取3次，每次1.5 h，合并3次濾液，減壓濃縮至浸膏，揮去殘醇，即得細(xì)氈毛忍冬醇提物（XZC）。

1.5.2 分組、給藥及造模

待大鼠適應(yīng)環(huán)境后，將72只雄性SD種大鼠，隨機(jī)分為9組，每組8只。分別建立空白組、模型組、聯(lián)苯雙酯組及細(xì)氈毛忍冬水提物、細(xì)氈毛忍冬醇提物的低（a）、中（b）、高劑量組（c）各給藥組連續(xù)14 d按體積10 mL/kg灌胃給藥;灌胃2 h后，模型組和各藥物劑量組動(dòng)物按2.0 mL/kg一次腹腔注射給予25% CCl4溶液，CCl4染毒，空白組給予花生油，每周染毒一次;14 d后，將各組動(dòng)物隔夜禁食24 h（禁食不禁水），腹腔主動(dòng)脈采血，分離血清，解剖大鼠肝臟，測(cè)定肝臟體重。

1.5.3 保肝指標(biāo)檢測(cè)

測(cè)定血清中ALT、AST、ALP、LDH和γ-GT的活性以及ALB、TBIL的含量;稱取肝臟相同部位的肝組織，進(jìn)行肝組織勻漿，3500 r/min離心10 min，取上清，按試劑盒說明檢測(cè)SOD的活力、GSH-px活性及MDA含量;H.E.染色觀察大鼠肝組織病理學(xué)變化，計(jì)算肝臟指數(shù)：肝臟指數(shù)=肝臟質(zhì)量（g）/大鼠體重（g）×100%。

1.5.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)結(jié)果以 x ±SD表示，使用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間采用ANOVA 檢驗(yàn)，多重比較方差齊采用Tukey方法，方差不齊采用Dunnett方法， P < 0.05 表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)大鼠肝組織的SOD、GSH-px和MDA水平和肝指數(shù)的影響

與正常組相比，模型組肝臟指數(shù)和大鼠肝組織勻漿MDA含量明顯高于正常組，GSH-px活性和SOD活力明顯低于正常組（ P < 0.01）;與模型組比較，細(xì)氈毛忍冬各藥物組和聯(lián)苯雙酯組肝指數(shù)均有所下降（ P < 0.01），在MDA含量指標(biāo)中，與模型組比較，細(xì)氈毛忍冬水提物和醇提物高劑量組和醇提物低劑量組均能顯著性抑制肝損傷（ P < 0.05， P < 0.01）;在SOD和GSH-px活性指標(biāo)中，與模型組比較，細(xì)氈毛忍冬水提物和醇提物均能顯著性降低GSH-px水平（ P < 0.05， P < 0.01），見表1。

2.2 對(duì)CCl4肝損傷大鼠血清ALT、AST、ALP、LDH、γ-GT、ALB、TBIL和GSH活性的影響

與空白對(duì)照組相比，病理模型組大鼠血清ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL和LDH活性較空白對(duì)照組明顯升高，GSH和ALB水平明顯低于正常組（ P < 0.01），說明本次實(shí)驗(yàn)造模成功;與模型組比較，各藥物組均能降低ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL和LDH的活性和升高GSH和ALB水平。

與模型組比較，在ALT指標(biāo)中，細(xì)氈毛忍冬醇提物和水提物均能降低ALT水平（ P < 0.01， P < 0.05）;在AST指標(biāo)中，細(xì)氈毛忍冬醇提物組能極其顯著的降低AST水平（ P < 0.01）;在γ-GT指標(biāo)中，細(xì)氈毛忍冬水提物高劑量組有顯著性差異（ P < 0.05）;在ALP指標(biāo)中，細(xì)氈毛忍冬醇提物中、高劑量組均能顯著性降低ALP水平（ P < 0.01），在GSH指標(biāo)中，細(xì)氈毛忍冬醇提物高劑量組能顯著性提高GSH的水平（ P < 0.05）;在ALB指標(biāo)中，細(xì)氈毛忍冬水提物低劑量和醇提物中、高劑量組有顯著性差異（ P < 0.05）;在TBIL指標(biāo)中，細(xì)氈毛忍冬水提物和醇提物均能顯著性降低TBIL的水平（ P < 0.01， P < 0.05）;在LDH指標(biāo)中，與模型組比較，除細(xì)氈毛忍冬水提物低劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外，其余各組均有顯著性差異（ P < 0.01， P < 0.05），其余藥物組較模型組有降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2、表3。

2.3 細(xì)氈毛忍冬對(duì)CCl4肝損傷大鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響

正常組大鼠的肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，排列整齊，分界清楚，肝細(xì)胞未見腫脹，無壞死現(xiàn)象，見圖1-A;而模型組細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞核消失，肝小葉邊界不清楚，細(xì)胞排列混亂，肝細(xì)胞大量壞死以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)見圖1-B。

與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織病理學(xué)形態(tài)均有不同程度的改變，病理損傷減輕，細(xì)胞排列較為整齊，肝臟壞死和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)均有不同程度的減輕，隨細(xì)氈毛忍冬提取物劑量的升高，大鼠肝細(xì)胞壞死、變性有所減輕，見圖1-D～J。

3 結(jié)論與討論

肝損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立主要有化學(xué)性、免疫性、藥物性、酒精性和生物性等多種方法，CCl4是誘導(dǎo)急性肝損傷有效的化學(xué)藥物，在體內(nèi)對(duì)肝臟親和力很大，是一種化學(xué)復(fù)制的肝損傷[12-15]，MDA含量可以反映脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的程度，SOD通過清除體內(nèi)的超氧陰離子自由基抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)來保護(hù)肝細(xì)胞，GSH-px清除超氧離子自由基，從而能阻止自由基激活的脂質(zhì)過氧化過程，間接的了解機(jī)體抗氧化的狀態(tài)和能力;血清ALT、AST、ALP、ALB、TBIL、LDH、GSH和γ-GT水平是評(píng)價(jià)肝功能的重要指標(biāo)以及診斷中判斷肝損傷的主要依據(jù)[16-20]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各藥物組均能降低ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL和LDH的活性和升高GSH和ALB水平;能夠降低肝組織勻漿中MDA含量，提高SOD活力，增加GSH-px活性，預(yù)防肝腫大，且作用表現(xiàn)出一定的劑量依賴性;肝組織病理切片結(jié)果較模型組有所減輕。因此，細(xì)氈毛忍冬對(duì)CCl4致大鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用，且醇提物優(yōu)于水提物，但細(xì)氈毛忍冬的具體分子調(diào)控機(jī)制有待深入研究。

參 考 文 獻(xiàn)：

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