關(guān)于三年桐、千年桐感染枯萎病病原菌后的生理反應(yīng)分析

李啟祥

摘 ? 要：針對三年桐、千年桐感染枯萎病病原菌后的生理反應(yīng)，采取資料調(diào)查法和實(shí)踐經(jīng)驗總結(jié)法，作了簡單論述，提出了相應(yīng)的防治策略。明確了油桐感染枯萎病病原菌后的生理反應(yīng)，能夠為病害防范和治理的開展提供有力的依據(jù)。基于此，深度分析此課題具有現(xiàn)實(shí)意義。

關(guān)鍵詞：三年桐;千年桐;枯萎病;病原菌;生理反應(yīng)

從貴州區(qū)域經(jīng)濟(jì)發(fā)展實(shí)際來說，油桐種植歷史悠久，品種資源豐富而且良種多，被廣泛種植，成為部分地區(qū)的重要產(chǎn)業(yè)。以貴州獨(dú)山縣為例，其已建成三年桐嫁接育苗基地13.3 hm2，全省種植面積超過1.33萬hm2，帶動了區(qū)域經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。當(dāng)前油桐產(chǎn)業(yè)的發(fā)展面臨著病害的威脅，影響種植效益，因此有必要加強(qiáng)相關(guān)研究，提出有效的防治策略，推動油桐產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

1 ? 油桐感染枯萎病病原菌的研究

油桐枯萎病首次于1939年發(fā)生在廣西壯族自治區(qū)與貴州交界位置，當(dāng)時確定枯萎病病原菌是尖孢鐮刀菌，此病在后期長達(dá)20多年里給油桐產(chǎn)業(yè)發(fā)展造成了嚴(yán)重為害。一直以來，油桐枯萎病的機(jī)理問題和防治難題始終沒有得到解決?，F(xiàn)有的研究很少，尤其是1991—2011年間發(fā)表的文獻(xiàn)很少涉及到油桐枯萎病。油桐枯萎病屬于維管束病害，其病原菌主要從根部入侵，沿著木質(zhì)部導(dǎo)管向上不斷蔓延，使得油桐出現(xiàn)半株或者整株枯萎，以三年桐為主，最高危害率達(dá)到了90%。當(dāng)油桐感染枯萎病以后，會出現(xiàn)根部腐爛以及枝干黑褐色等情況。目前，由于致病機(jī)理還沒有明確，多采取嫁接的方式進(jìn)行防治。

2 ? 油桐感染枯萎病病原菌的生理反應(yīng)

2.1 ? 材料和方法

2.1.1 ? 樣品采集

以某縣油桐主產(chǎn)區(qū)選擇試驗材料，采集發(fā)病植株莖干部部位。采集的樣品放置在封口袋內(nèi)部，送到實(shí)驗室開展病原物分離以及鑒定。

2.1.2 ? 病原物分離和純化

使用自來水對感染病原葉片進(jìn)行清理，放置在75%乙醇（V/V）條件中浸泡，大約浸泡40 s;再使用1%中次氯酸鈉溶液進(jìn)行表面消毒，消毒4 min;經(jīng)過75%乙醇進(jìn)行30 s漂洗;使用無菌蒸餾水進(jìn)行清洗，至少清洗3次，同時使用無菌濾紙吸收水分。使用無菌手術(shù)刀片，選擇在莖稈病健交界位置切取組織塊，切大約0.5 cm2，轉(zhuǎn)移到麥芽粉瓊脂培養(yǎng)基平板下，營造26 ℃黑暗條件進(jìn)行培養(yǎng)。需要注意的是，培養(yǎng)基要預(yù)先加入硫酸鏈霉素以及鹽酸四環(huán)素，加入量分別為50 mg/L、20 mg/L，避免細(xì)菌污染。經(jīng)過4 d的培養(yǎng)，對生出的菌絲進(jìn)行轉(zhuǎn)接，轉(zhuǎn)入到新鮮馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，開展純化試驗。

2.1.3 ? 病原物形態(tài)學(xué)以及分子鑒定

將病原物接種在PDA內(nèi)，進(jìn)行培養(yǎng)形狀以及特性的觀察。植株生理指標(biāo)的測量，選擇相應(yīng)的油桐植株根部，進(jìn)行剪碎處理，分別稱取0.5 g，使用錫箔紙進(jìn)行包裹，并且快速放置到液氮條件下冷凍，同時放到-70 ℃冰箱條件下保存。當(dāng)開展生理指標(biāo)測定時再取出來，進(jìn)行相應(yīng)處理。運(yùn)用NBT光化還原法，進(jìn)行SOD活性相應(yīng)的測定;使用愈傷木酚顯色法，開展POD活性的測定;運(yùn)用過氧化氫分解法，開展CAT活性測定;運(yùn)用TBA比色法，開展MDA含量的測定。

2.2 ? 生理指標(biāo)的變化

2.2.1 ? 對SOD活性的影響

從SOD的特性來說，其為超氧化物歧化酶，被作為氧清除劑，發(fā)揮著清除活性氧等物質(zhì)的作用。一般來說，植物體內(nèi)部的活性氧物質(zhì)，其產(chǎn)生與清除多處平衡狀態(tài)下。受到逆境的影響，植物呼吸會快速增加，細(xì)胞滲透勢出現(xiàn)大幅度降低的變化，體內(nèi)產(chǎn)生很多的活性氧，使得平衡被打破。當(dāng)感染了尖孢鐮刀菌后，油桐活性的變化為先升高再減小的特征，同時在侵染前期達(dá)到最高峰[1]。

2.2.2 ? 對POD活性的影響

POD即過氧化物酶，其以鐵卟啉作為輔基，能夠催化過氧化氫氧化酚類以及胺類化合物，不僅能夠消除過氧化氫，還能夠消除酚類以及胺類毒性。經(jīng)過試驗研究能夠發(fā)現(xiàn)，千年桐POD的活性很高，活性變化特點(diǎn)為先增加再降低，在侵染中期活性達(dá)到最高;三年桐接種之后POD活性變化特點(diǎn)為先降低后增加，在侵染中期活性達(dá)到最低。根據(jù)POD活性的測定結(jié)果，整個侵染期間，千年桐POD活性相對于三年桐來說要高。

2.2.3 ? 對CAT活性的影響

過氧化氫酶作為催化過氧化氫分解成為氧氣和水的酶。經(jīng)過試驗，千年桐樹的CAT保持了很高活性，接種之后，酶活性快速上升，同時在侵染全過程都保持較高活性[2]。三年桐接種之前的活性和千年桐樹的活性相差不大，但在接種后其活性發(fā)生了變化，出現(xiàn)了先降低、再升高、又降低的特點(diǎn)，侵染前期活性值最小，在侵染的中期活性值最高。從CAT活性的測定結(jié)果來說，經(jīng)過接種處理后，千年桐樹CAT活性全部高于三年桐。

2.2.4 ? 對MDA含量的影響

從植物器官衰老或者處于逆境情況下受到傷害來說，通常會產(chǎn)生膜脂過氧化作用，最終分解產(chǎn)物為MDA。一般來說，MDA的含量能夠反映植物遭受逆境傷害的水平。經(jīng)過試驗分析，千年桐樹接種后的MDA含量變化特點(diǎn)為緩慢上升，變化不夠明顯，同時小于三年桐MDA含量多少[3]。

3 ? 油桐感染枯萎病病原菌的防治策略

3.1 ? 采取嫁接繁殖手段

目前，防治油桐感染枯萎病一般采取嫁接繁殖手段。在具體實(shí)施環(huán)節(jié)，選擇千年桐樹為砧木，選擇三年桐作為接穗開展嫁接，實(shí)現(xiàn)對此病的防治。選擇春季或者秋季，若在春季選擇3—4月嫁接，若在秋季選擇9—10月嫁接。需要注意的是，為了保證嫁接的成效，要合理選擇樹木。開展嫁接作業(yè)時，必須要熟練操作，能夠快速嫁接，切口光滑且平整。運(yùn)用方塊芽接，實(shí)際操作的過程中嚴(yán)格按照嫁接流程進(jìn)行，做好嚴(yán)格把控，保證接芽能夠正常生長，同時注意整形[4]。

3.2 ? 因地制宜，合理栽植

種植油桐時，要結(jié)合區(qū)域地質(zhì)情況，合理選擇品種。對于枯萎病較為嚴(yán)重的種植區(qū)，建議發(fā)展以千年桐樹嫁接的三年桐，或者采取種植混交林的方式，減少病根接觸健碩樹根。除此之外，要做好林地的撫育管理，施加磷鉀肥，增強(qiáng)植株的抗病能力。選擇3—5月，也就是病菌侵染期，開展免耕作業(yè)，避免傷根，以此減少侵染。

3.3 ? 采取其他措施

當(dāng)油桐感染枯萎病時，應(yīng)及時挖除同時燒毀病樹木，做好病原的清除。對病土使用石灰進(jìn)行相應(yīng)處理，減少病害擴(kuò)展以及蔓延。結(jié)合油桐感染枯萎病的實(shí)際情況，使用相應(yīng)的藥物，比如抗菌劑401，對病株進(jìn)行處理[5]。

綜上所述，通過分析油桐感染枯萎病后的生理反應(yīng)，明確了千年桐和三年桐染病的特點(diǎn)，為種植工作的開展提供了依據(jù)。在油桐的種植和養(yǎng)護(hù)管理實(shí)踐中，采取以下措施：選用嫁接繁殖手段，因地制宜，合理栽植。通過采取一系列措施，做好相應(yīng)的防治工作，減少病害損失。

參考文獻(xiàn)：

[ 1 ] 李清娟.油桐枯萎病的發(fā)生與防治[J].現(xiàn)代農(nóng)村科技，2018（2）：37.

[ 2 ] 楊再華，吳躍開，許杰，等.貴州不同油桐品系對枯萎病的抗性評價[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（2）：53-55.

[ 3 ] 楊再華，劉童童，李曉龍，等.油桐枯萎病的研究進(jìn)展[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（1）：51-53.

[ 4 ] 岳繼貞，胥文鋒.油桐枯萎病的發(fā)生與防治[J].現(xiàn)代農(nóng)村科技，2017（5）：31.

[ 5 ] 徐紅梅，曾祥福，鄧先珍，等.油桐枯萎病病原鑒定及其生物學(xué)特性研究[J].湖北林業(yè)科技，2016，45（5）：42-45.

（收稿日期：2019-06-10）