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    固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用富集檢測(cè)1-羥基芘的方法研究

    2019-09-10 07:22:44郭思依楊成
    糧食科技與經(jīng)濟(jì) 2019年9期
    關(guān)鍵詞:尿樣芳烴羥基

    郭思依 楊成

    [摘要]建立一種固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用富集檢測(cè)1-羥基芘的方法。通過(guò)優(yōu)化萃取溫度、萃取時(shí)間、攪拌速率、離子強(qiáng)度和靜態(tài)解吸時(shí)間等參數(shù),得到石墨烯纖維對(duì)1-羥基芘萃取富集的最優(yōu)條件為30℃下以500rpm轉(zhuǎn)速萃取30min,加入氯化鈉濃度10%(W/V),并于200μL甲醇中靜態(tài)解吸2min。1-羥基芘富集的回歸方程為Y=3.074×106X+214 223,線性范圍為1~1 000pg/mL,LOD和LOQ分別為0.3pg/mL和1pg/mL,精密度為3.6%~5.8%。實(shí)際樣品中1-羥基芘檢出濃度為5.61~55.63pg/mL,加標(biāo)回收率為80.8%~105.2%,RSD值均小于10%,該方法具有較好的靈敏度和準(zhǔn)確度。

    [關(guān)鍵詞]固相微萃取;高效液相色譜;1-羥基芘;富集

    中圖分類號(hào):O657.63;TS255.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A DOI:10.16465/j.gste.cn431252ts.201909

    多環(huán)芳烴是一類芳香族環(huán)境致癌物,廣泛存在于大氣、土壤、水源以及食品中。食品受到環(huán)境污染或者不當(dāng)?shù)呐腼兎绞剑鶗?huì)導(dǎo)致多環(huán)芳烴的產(chǎn)生。人們通過(guò)呼吸、飲食等途徑接觸多環(huán)芳烴后令其參與人體代謝過(guò)程[1-2]。1-羥基芘是芘的代謝產(chǎn)物,人體代謝物中的1-羥基芘是多環(huán)芳烴的一個(gè)靈敏有效的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)[3-4]。

    1-羥基芘的檢測(cè)方法,主要采用高效液相色譜-熒光檢測(cè)(HPLC-FLD)、液質(zhì)/氣質(zhì)聯(lián)用法等[5-7]。由于基質(zhì)的復(fù)雜性,因此在色譜檢測(cè)之前合適的前處理過(guò)程是十分必要的。目前報(bào)道的前處理方法有固相萃取、磁固相萃取、雙水相萃取等。丁昌明等[8]采用Envi-18固相萃取小柱對(duì)尿樣酶解液進(jìn)行富集凈化,利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)9種多環(huán)芳烴代謝物;黃維等[9]利用十八烷基膦酸改性的磁性介孔納米粒子為磁固相萃取介質(zhì),對(duì)尿樣酶解液進(jìn)行萃取,經(jīng)液相色譜分析;朱裕穗等[10]建立了乙腈-(NH4)2SO4雙水相提取,液相色譜-熒光檢測(cè)尿樣中羥基多環(huán)芳烴的方法,檢出限在0.06~2.32ng/mL。固相微萃取技術(shù)集采樣富集檢測(cè)于一體,過(guò)程更為簡(jiǎn)單高效、綠色環(huán)保,但未見(jiàn)其對(duì)1-羥基芘的富集報(bào)道。

    文章利用自制石墨烯固相微萃取纖維結(jié)合高效液相色譜富集檢測(cè)1-羥基芘。石墨烯表面的超大π電子體系與1-羥基芘之間存在π-π共軛和疏水相互作用,可高效富集目標(biāo)物。

    1材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)材料

    1-羥基芘標(biāo)準(zhǔn)品和氯化鈉:上海阿拉丁試劑公司;甲醇為色譜純:賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司;實(shí)驗(yàn)用水為純凈水:杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司;HP-2型β-葡萄糖醛酸酶:西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司;鹽酸、冰醋酸、醋酸鈉為分析純:國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。取10mg 1-羥基芘溶于10mL甲醇中配成1 000mg/L標(biāo)品儲(chǔ)備液存于4℃冰箱,標(biāo)準(zhǔn)工作液由儲(chǔ)備液稀釋得到,現(xiàn)配現(xiàn)用。

    1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

    Waters e2695高效液相色譜儀(配2475熒光檢測(cè)器):美國(guó)沃特世公司;250μL內(nèi)插管:安捷倫科技(中國(guó))有限公司;ST3100實(shí)驗(yàn)室pH計(jì):奧豪斯儀器(常州)有限公司;DF-101S集熱式數(shù)顯恒溫磁力攪拌器:山東鄄城華魯電熱儀器有限公司;5810R多功能臺(tái)式離心機(jī):德國(guó)艾本德公司;SY-2230恒溫水浴搖床:上海珂淮儀器有限公司。

    1.3 高效液相色譜條件

    高效液相色譜檢測(cè)采用Waters e2695高效液相色譜儀(配2475熒光檢測(cè)器),進(jìn)樣量20μL,流速1mL/min,色譜柱:XBridge C18(4.6×250mm,5μm),柱溫25℃,流動(dòng)相為水-甲醇(25:75,V/V)。激發(fā)波長(zhǎng)(λex)345nm,發(fā)射波長(zhǎng)(λem)388nm,等度洗脫15min。

    1.4 固相微萃取條件優(yōu)化

    吸取50μL 1-羥基芘標(biāo)準(zhǔn)工作液至萃取小瓶中,用水稀釋至10mL,蓋上隔膜瓶蓋置于恒溫水浴鍋中。考察萃取溫度(20℃,30℃,40℃,50℃,60℃),萃取時(shí)間(10min,20min,30min,40min,50min),攪拌速率(300rpm,400rpm,500rpm,600rpm,700rpm)、鹽離子濃度(0%、5%、10%、15%、20%,W/V)和靜態(tài)解吸時(shí)間(1min,2min,3min,4min,5min)對(duì)1-羥基芘富集效率的影響。萃取完成后,將纖維頭拉回進(jìn)樣器內(nèi),立即導(dǎo)入裝有200μL甲醇的內(nèi)插管中靜態(tài)解吸后,進(jìn)液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)流程見(jiàn)圖1。

    1.5 SPME-HPLC方法學(xué)評(píng)價(jià)

    為建立1-羥基芘富集標(biāo)準(zhǔn)曲線,配制0.001ng/mL,0.01ng/mL,0.05ng/mL,0.1ng/mL,0.5ng/mL,1.0ng/mL,2.0ng/mL,5.0ng/mL,10.0ng/mL 1-羥基芘標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行最優(yōu)條件下的萃取富集實(shí)驗(yàn)。LOD和LOQ分別以3倍、10倍S/N來(lái)計(jì)算;纖維萃取的重復(fù)性(日內(nèi)、日間精密度)是利用單根纖維分別重復(fù)萃取5次和3次得到。

    1.6 實(shí)際樣品的采集與處理

    收集5名大學(xué)生晨尿,于-20℃下保存。室溫下將尿樣自然解凍后搖勻,取10mL于50mL離心管中,加入0.2M鹽酸溶液,pH值調(diào)至5.0,然后加入5mL pH值為5.0的醋酸鈉緩沖液和40μL HP-2型β-葡萄糖醛酸酶,充分混勻后在恒溫水浴搖床中于37℃下酶解4h。將酶解液經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后,取1mL清液至萃取小瓶中用水稀釋至10mL進(jìn)行SPME。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 固相微萃取條件優(yōu)化

    2.1.1 萃取溫度

    本實(shí)驗(yàn)考察了20℃~60℃溫度下纖維對(duì)1-羥基芘的萃取效率變化,見(jiàn)圖2。由圖2可知,隨著溫度的升高,1-羥基芘的萃取效率在30℃下達(dá)到最大值。當(dāng)溫度繼續(xù)升高,纖維對(duì)1-羥基芘的萃取量反而逐漸降低,表明纖維對(duì)1-羥基芘的吸附為放熱反應(yīng),在較低溫度下達(dá)到平衡后,升高溫度導(dǎo)致分配系數(shù)降低從而使得1-羥基芘的萃取量逐漸減小。因此,萃取溫度選擇在30℃下進(jìn)行。

    2.1.2 萃取時(shí)間

    萃取時(shí)間可以顯著地影響萃取量,萃取時(shí)間的選擇是時(shí)間成本與分析方法靈敏度之間的折中。本實(shí)驗(yàn)考察了萃取時(shí)間為10~50min下纖維對(duì)1-羥基芘富集效率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖3,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),纖維對(duì)1-羥基芘的萃取量逐漸增大且在30min時(shí)基本達(dá)到萃取平衡,因此,選擇萃取時(shí)間為30min。

    2.1.3 攪拌速率

    萃取體系的攪拌程度對(duì)1-羥基芘的富集效率具有一定影響。實(shí)驗(yàn)考察了300rpm、400rpm、500rpm、600rpm和700rpm的攪拌速率下纖維對(duì)1-羥基芘的萃取效率,結(jié)果見(jiàn)圖4。由圖4可知,增大攪拌速率對(duì)1-羥基芘的富集具有先促進(jìn)后抑制的趨勢(shì)。在300~500rpm轉(zhuǎn)速下,萃取量隨攪拌速率的增大而緩慢增大,當(dāng)轉(zhuǎn)速為至500rpm時(shí),纖維對(duì)1-羥基芘的萃取量達(dá)到最大,增大轉(zhuǎn)速有利于目標(biāo)物向纖維涂層內(nèi)的轉(zhuǎn)移;當(dāng)攪拌速率繼續(xù)增大時(shí)(500~700rpm),1-羥基芘萃取量逐漸降低,這與萃取體系的不穩(wěn)定性相關(guān)。因此,SPME體系的最佳攪拌速率為500rpm。

    2.1.4 離子強(qiáng)度

    在樣品溶液中加入氯化鈉(0~20%,W/V),考察離子強(qiáng)度對(duì)萃取效率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖5。由圖5可知,鹽離子的加入可以在一定程度上促進(jìn)纖維對(duì)1-羥基芘的萃取吸附,當(dāng)鹽離子濃度增大至10%時(shí)達(dá)到最佳,原因在于鹽離子可與水分子發(fā)生水合作用,使得目標(biāo)物在水中的溶解度降低,有利于向涂層內(nèi)轉(zhuǎn)移而達(dá)到較高的萃取量;然而,繼續(xù)增大鹽離子濃度后,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1-羥基芘的萃取量反而有所降低,原因在于較多的Na+和Cl+會(huì)與目標(biāo)分析物發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)吸附,從而導(dǎo)致萃取量降低。因此,選擇10%的鹽離子濃度為最佳實(shí)驗(yàn)條件。

    2.1.5 解吸時(shí)間

    在SPME過(guò)程結(jié)束后,將纖維頭拉回微量進(jìn)樣器內(nèi),迅速插入裝有200μL甲醇的內(nèi)插管中進(jìn)行溶劑解吸??疾旖馕鼤r(shí)間(0.5~2.5min)對(duì)1-羥基芘富集效率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖6。實(shí)驗(yàn)表明,1-羥基芘的檢出量隨解吸時(shí)間的延長(zhǎng)而緩慢增大,當(dāng)解吸時(shí)間達(dá)到2.0min之后,1-羥基芘峰面積不再增大,纖維所富集的1-羥基芘量能夠解吸完全。因此,在甲醇中的解吸時(shí)間選擇2.0min。

    2.2 1-羥基芘標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及方法學(xué)評(píng)價(jià)

    在最優(yōu)SPME實(shí)驗(yàn)條件下,利用纖維對(duì)1~10 000

    pg/mL梯度范圍內(nèi)的1-羥基芘標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行萃取富集,以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),線性范圍為1~1 000pg/mL;回歸方程為Y=3.074×106X+214 223,決定系數(shù)R2為0.998 7;以3倍、10倍S/N分別計(jì)算LOD為0.3 pg/mL、LOQ為1 pg/mL。為考察纖維萃取的重復(fù)性,對(duì)1天內(nèi)獨(dú)立配制的1-羥基芘標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行5次測(cè)定,得到日內(nèi)RSD為3.6%,對(duì)連續(xù)3天獨(dú)立配制的1-羥基芘標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定,得到日間RSD為5.8%,結(jié)果見(jiàn)圖7、表1。結(jié)果表明,本方法具有較好的重復(fù)性。

    2.3 本SPME方法與文獻(xiàn)方法的比較

    本方法是利用自制石墨烯SPME纖維,對(duì)酶解液進(jìn)行SPME富集后經(jīng)LC-FLD檢測(cè)。與文獻(xiàn)報(bào)道的其他1-羥基芘富集檢測(cè)方法相比,本方法具有更低的檢出限和較寬的線性范圍,具體見(jiàn)表2,能夠滿足痕量物質(zhì)的檢測(cè)要求。

    2.4 實(shí)際樣品中1-羥基芘的檢測(cè)及回收率

    取5名大學(xué)生晨尿,經(jīng)酶解處理使結(jié)合態(tài)1-羥基芘水解成游離態(tài)后,進(jìn)行SPME-HPLC富集檢測(cè),結(jié)果見(jiàn)表3、圖8。由表3可知,5名大學(xué)生尿樣中均有1-羥基芘檢出;進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),加標(biāo)濃度分別為10pg/mL和100pg/mL,得到回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,回收率為80.8%~105.2%,RSD值均小于10%。實(shí)驗(yàn)表明,本方法具有較好的靈敏度和準(zhǔn)確度。

    3 結(jié) 論

    本章采用自制的石墨烯SPME纖維,通過(guò)石墨烯和1-羥基芘之間π-π作用和疏水相互作用等,建立了對(duì)1-羥基芘萃取富集的新方法。通過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)參數(shù),得到石墨烯纖維對(duì)1-羥基芘萃取富集的最優(yōu)條件為30℃下以500rpm轉(zhuǎn)速萃取30min,加入氯化鈉濃度為10%(W/V),并于200μL甲醇中靜態(tài)解吸2min后,通過(guò)液相色譜儀(熒光檢測(cè)器)進(jìn)行定量測(cè)定。在此最優(yōu)條件下繪制了1-羥基芘富集的標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為Y=3.074×106 X+214 223,決定系數(shù)R2為0.998 7,線性范圍為1~1000 pg/mL,LOD和LOQ分別為0.3 pg/mL和1 pg/mL。日內(nèi)、日間的RSD分別為3.6%和5.8%,表明石墨烯纖維的重復(fù)性較好。將本方法應(yīng)用于實(shí)際樣品檢測(cè)中,1-羥基芘檢出濃度為5.61~55.63 pg/mL,加標(biāo)回收率在80.8%~105.2%,RSD值均小于10%,方法具有較好的靈敏度和準(zhǔn)確度。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 金華麗,谷克仁.油炸食品安全性分析及危害預(yù)防[J].中國(guó)油脂,2010,35(9):74-77.

    [2] 王峰,張志杰,林慧,等.高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-熒光檢測(cè)器法測(cè)定植物油中的18種多環(huán)芳烴[J].食品科學(xué), 2014,35(6):142-145.

    [3] 段小麗,魏復(fù)盛,張軍鋒,等.多環(huán)芳烴暴露評(píng)價(jià)的生物標(biāo)志物研究[J].工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病,2008,34(3):129-133.

    [4] Yamano Y,Hara K,Ichiba M,et al.Urinary 1-hydroxypyrene as a comprehensive carcinogenic biomarker of exposure to polycyclic aromatic hydrocarbons: a cross-sectional study of coke oven workers in China[J].International Archives of Occupational and Environmental Health,2014,87(7):705-713.

    [5] 黃傳峰,閆慧芳,潘祖飛,等.尿中多環(huán)芳烴單羥基代謝產(chǎn)物的液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定方法研究[J].衛(wèi)生研究,2010,39(3): 355-357.

    [6] H.H.Lim,H.S.Shin.Simultaneous determination of 2-naphthol and 1-hydroxypyrene in fish and shellfish contaminated with crude oil by gas chromatography-mass spectrometry[J]. Food chemistry,2013,138(2-3): 791-796.

    [7] G.Zhao,Y.Chen,S.Wang,et al.Simultaneous determination of 11 monohydroxylated PAHs in human urine by stir bar sorptive extraction and liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J].Talanta,2013(116):822-826.

    [8] 丁昌明,金銀龍,林少彬.固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定尿液中9種多環(huán)芳烴代謝物[J].分析化學(xué),2012,40(3): 397-402.

    [9] 黃維,丁俊,馮鈺锜.磁固相萃取-高效液相色譜聯(lián)用測(cè)定尿樣中的 1-羥基芘[J].分析化學(xué),2012,40(6):830-834.

    [10] 朱裕穗,楊紅國(guó),安彩秀,等.雙水相萃取-液相色譜法檢測(cè)人尿中的羥基多環(huán)芳烴[J].分析試驗(yàn)室,2012(10):67-71.

    [11] 張悅,馬睿,范世華.吐溫20增敏同步熒光光譜法測(cè)定尿液中1-羥基芘[J].分析化學(xué),2010,38(7):958-962.

    [12] Cahours X,Blanchet M,Rey M.Fast and simple method for the determination of urinary 1‐hydroxypyrene[J].Journal of Separation Science,2015,32(20):3403-3410.

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