雞肉組織中四環(huán)素類藥物殘留檢測方法

張智

摘要：科學(xué)使用獸藥能有效防范動(dòng)物疫情，確保動(dòng)物健康生長，但不合理地使用獸藥和飼料添加劑，會(huì)導(dǎo)致藥物殘留，影響畜產(chǎn)品的質(zhì)量安全。該文論述了雞肉組織中四環(huán)素類抗生素藥物殘留檢測技術(shù)，以進(jìn)一步提高抗生素殘留檢測質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：雞肉;四環(huán)素;藥物殘留;檢測技術(shù)

中圖分類號(hào)：S859.84

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.11.048

引言

抗生素在禽類動(dòng)物養(yǎng)殖中使用十分普遍，但是抗生素不合理使用，也是導(dǎo)致畜禽制品中抗生素殘留超標(biāo)的主要原因，在某些地區(qū)濫用抗生素已成為制約養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的主要問題。四環(huán)素類抗生素在禽類動(dòng)物養(yǎng)殖中已廣泛應(yīng)用，但很多養(yǎng)殖戶，尤其是中小規(guī)模養(yǎng)殖戶，不注重合理使用藥物，普遍存在濫用藥物現(xiàn)象，導(dǎo)致過量的抗生素在肉雞體內(nèi)聚集，損害肝臟組織，使致病原對(duì)多種抗生素的抵抗能力增強(qiáng)，抗生素在肌肉組織中殘留量也不斷增加，對(duì)消費(fèi)者身心健康造成巨大威脅。

微生物檢測法

雞肉組織中四環(huán)素類抗生素藥物殘留檢測方法應(yīng)用最早是微生物檢測法，其工作原理是根據(jù)抗生素對(duì)某些微生物正常生長機(jī)能代謝具有抑制作用判定檢測樣品中微生物藥物殘留。經(jīng)常使用到的微生物檢測方法，包括紙片法、抑制法。紙片法主要是利用某些能對(duì)致病菌繁殖產(chǎn)生抑制作用的物質(zhì)，通過抑制致病菌生長，在紙片上能形成明顯的抑菌罔，以此判定肌肉組織中是否存在四環(huán)素殘留。抑制法主要是利用某種益生菌的副產(chǎn)物能與某些化學(xué)物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)，檢測肌肉組織中是否存在四環(huán)素殘留。該項(xiàng)技術(shù)主要會(huì)應(yīng)用到嗜熱鏈球菌、l，2，3，5一氯化三苯四氮唑，嗜熱鏈球菌體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一種叫琥珀酸脫氫酶的物質(zhì)，這種物質(zhì)和1，2，3，5一氯化三苯四氮唑相互作用能形成一種紅色的代謝產(chǎn)物，以此證明肌肉組織中是否存在四環(huán)素殘留，抑制法最早應(yīng)用于乳汁抗生素殘留檢測[1]。

薄層色譜法

在對(duì)雞肌肉組織中是否存在四環(huán)素進(jìn)行初步篩選中應(yīng)用該種檢測方法。該種檢測方法的一個(gè)顯著特點(diǎn)是操作簡便，出結(jié)果快，可實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)樣本的同一個(gè)批次檢測，能在有限的時(shí)間內(nèi)對(duì)大量樣本進(jìn)行處理。在應(yīng)用中涉及到的化學(xué)試劑相對(duì)較少，更不需要復(fù)雜昂貴的器械投入，能在現(xiàn)場開展抗生素殘留檢測。但是在樣品檢測前仍然需要對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜的處理，并且該種方法的靈敏度不高，不能對(duì)組織進(jìn)行定量檢測，重復(fù)效果較差。另外，在對(duì)樣本進(jìn)行處理過程中，需要使用到的儀器和設(shè)備較多，需要使用紫外檢測器或者串聯(lián)熒光檢測器進(jìn)行檢測。該種方法常用于雞肉組織中四環(huán)素類抗生素藥物殘留初步篩選檢測。

分光度檢測法

分光度檢測法主要是利用四環(huán)素具有一定吸光度的特點(diǎn)，在特定的紫外線區(qū)域內(nèi)會(huì)表現(xiàn)出一定的吸光反應(yīng)，以此檢測組織樣本中是否存在四環(huán)素殘留。利用四環(huán)素類抗生素與某些金屬離子產(chǎn)生一系列復(fù)雜的絡(luò)合反應(yīng)后產(chǎn)生沉淀物，然后再利用四環(huán)素的吸收光譜發(fā)生變化情況，進(jìn)行定量測定。分光光度檢測法主要包括紫外光譜檢測法和熒光一紫外結(jié)合分光度檢測法[2]。

3.1 紫外光譜檢測法

紫外光譜檢測法具有操作簡單、結(jié)果快速、操作簡便、設(shè)備簡單、成本投入較低的特點(diǎn)，在組織快速檢測中具有十分廣泛的應(yīng)用。在組織檢測前，需要采取一定的技術(shù)手段，將肌肉中的蛋白質(zhì)去除，然后測定吸光度大小，根據(jù)得到的曲線范圍，判定組織樣本中是否存在四環(huán)素殘留。該種檢測方法與國際上通用的抑制法相比，檢測限度更低，靈敏性更強(qiáng)。

3.2 熒光一紫外結(jié)合分光度檢測法

熒光一紫外結(jié)合分光度檢測法是將紫外光譜法和熒光分光度檢測法有效結(jié)合，這2種方法有效結(jié)合，使操作更加方便，分析精確度更高，但是整個(gè)檢測結(jié)果的靈敏度不是很高。熒光法具有很高的靈敏度，但四環(huán)素類抗生素屬于弱熒光物質(zhì)，通常不能在熒光分度計(jì)上直接得到檢測結(jié)果。而通過將熒光檢測法和紫外線光譜檢測法有效結(jié)合，能實(shí)現(xiàn)在熒光劑上直接檢測四環(huán)素類抗生素的殘留情況，測得四環(huán)素類抗生素的現(xiàn)象范圍為0.10-9.00μg/mL。此外，測定四環(huán)素類抗生素還有溴化十六烷基三甲基胺熒光法，其檢測下限史低，靈敏性更強(qiáng)，檢測的現(xiàn)象范圍通常為0.01-12.0μg/mL。該種檢測技術(shù)除在雞肉組織中應(yīng)用外，在測定牛奶中四環(huán)素類抗生素殘留，也具有很好的應(yīng)用效果。

高效液相色譜法

高效液相色譜法是在高壓環(huán)境下流動(dòng)相的驅(qū)動(dòng)，使樣品通過高性能層析柱，然后將樣品中的抗生素進(jìn)行高效分離。該種檢測方法通常需要有高性能的檢測設(shè)備和先進(jìn)的操作系統(tǒng)，成本投入較高，但靈敏性較好，自動(dòng)化程度較高，結(jié)果重復(fù)性好。高效液相色譜法已成為目前雞肉組織中四環(huán)素類抗生素藥物殘留應(yīng)用最為廣泛的一種檢測技術(shù)，其應(yīng)用范圍更廣，除應(yīng)用在雞肉組織中外，還會(huì)用到牛奶，其他動(dòng)物組織類四環(huán)素檢測。其中應(yīng)用較為廣泛的檢測方法主要包括高效液相結(jié)合化學(xué)方法、高效液相一質(zhì)譜聯(lián)用法。

4.1 高效液相結(jié)合化學(xué)發(fā)光法

化學(xué)發(fā)光分析法具有靈敏度高，線性范圍廣，儀器沒備簡單，成本投入低的特點(diǎn)，通過將該種方法和高效液相色譜法有效結(jié)合，能有效發(fā)揮高效液相色譜具有高效分離的特性，使化學(xué)發(fā)光分析法成為一種有效的痕量和超痕量分析技術(shù)。該種方法常用于四環(huán)素類抗生素中的四環(huán)素、土霉素、金霉素、多西環(huán)素的檢測，這種抗生素的檢出限度為0.002-0.008μg/mL。

4.2 高效液相一質(zhì)譜聯(lián)用法

高效液相色譜法的顯著優(yōu)勢能分離檢測樣本中的抗生素，它能為某些混合物的抗生素分離提供有效的選擇，但是難以得到物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，在檢測中主要依靠與標(biāo)準(zhǔn)誤對(duì)比判斷殘留物。而質(zhì)譜檢測法能提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，具有樣品使用量少、檢測精確度高的特點(diǎn)，但是在進(jìn)行樣品分析中，需要進(jìn)行純化處理，具有一定純度后，才能進(jìn)行直接分析。通過將高效液相色譜法和質(zhì)譜法有效聯(lián)合，發(fā)揮2種方法各自特點(diǎn)，目前該種方法已廣泛應(yīng)用于禽類、豬肉、牛奶等畜禽組織樣本的四環(huán)素類抗生素藥物殘留檢測[3]。

結(jié)束語

為有效保障人類生命財(cái)產(chǎn)健康，促進(jìn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，應(yīng)引導(dǎo)養(yǎng)殖戶科學(xué)使用抗生素，正確認(rèn)識(shí)抗生素的用途和危害，同時(shí)相關(guān)檢疫人員和衛(wèi)生監(jiān)督人員還應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)抗生素類藥物殘留檢測，規(guī)范養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖行為，確保合理使用抗生素。

參考文獻(xiàn)

[l]沈虎琴，檀華蓉，祁克宗，等齋禽糞便中的氟喹諾酮類與四環(huán)素類獸藥殘留同時(shí)提取的方法研究[J].分析測試學(xué)報(bào)，2012（3）：45-48.

[2]劉軍，劉清，劉鈺，等.牛乳中四環(huán)素類獸藥殘留量的監(jiān)測調(diào)查[J].甘肅科技縱橫，2002（5）：56.

[3]范志影，劉慶生，石冬冬，等.液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定生鮮乳中四環(huán)素類和p一內(nèi)酰胺類藥物殘留[J]。中國畜牧雜志，2013（9）：45-47.