全自動定氮法測定植物蛋白飼料中揮發(fā)性鹽基氮

摘要：制訂植物蛋白飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定方法對飼料業(yè)進(jìn)行監(jiān)督、指導(dǎo)、規(guī)范非常必要。實(shí)驗(yàn)室測定經(jīng)驗(yàn)，制定植物蛋白飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定方法（全自動定氮法），通過研究分析該測定方法的范圍、原理，并從實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備、用試劑的準(zhǔn)備過程，與采樣、試樣設(shè)備、樣品處理、定氮實(shí)施過程及最終的結(jié)果計算與精密度分析過程進(jìn)行詳細(xì)介紹，以期為其他地方植物蛋白飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定提供借鑒。

關(guān)鍵詞：植物蛋白;飼料;揮發(fā)性鹽基氮;全自動定氮法

中圖分類號：S816 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B doi：10.3969fj.issn.2096-3637.2019.19.011

0 引言

目前我國飼料工業(yè)蓬勃發(fā)展，飼料產(chǎn)品不斷創(chuàng)新，特別是發(fā)酵的植物蛋白飼料原料和含有植物性蛋白飼料原料的飼料產(chǎn)品，憑借易消化吸收、報酬高、使用范圍廣等特點(diǎn)，發(fā)展較快。河北省作為養(yǎng)殖和飼料產(chǎn)業(yè)大省，是發(fā)酵飼料發(fā)源地之一，近年更是發(fā)展迅猛。

植物蛋白飼料中揮發(fā)性鹽基氮主要是由于發(fā)酵中生產(chǎn)條件失當(dāng)或雜菌生長過多產(chǎn)生，揮發(fā)性鹽基氮指在蛋白飼料受到有關(guān)酶與細(xì)菌的作用，逐漸發(fā)生變質(zhì)腐敗中，原本的蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類等堿性含氮物質(zhì)。該類物質(zhì)具有加強(qiáng)的揮發(fā)性，含量的高低與氨基酸破壞程度呈正比，因此也是檢查原料腐敗變質(zhì)情況的重要依據(jù)。飼料作為養(yǎng)殖業(yè)必不可少的的食物來源，直接影響畜產(chǎn)品的質(zhì)量安全。河北省曾發(fā)生過因揮發(fā)性鹽基氮含量過高造成飼料企業(yè)巨大經(jīng)濟(jì)損失的案例。植物蛋白飼料原料和含有植物性蛋白飼料原料的飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的檢驗(yàn)方法亟待制定。

1 范圍

方法規(guī)定了飼料中揮發(fā)性鹽基氮測定的原理、儀器和設(shè)備、試劑、采樣及試樣制備、樣品準(zhǔn)備、滴定、結(jié)果計算、準(zhǔn)確度和精密度。

方法適用于植物蛋白飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定。

方法檢出限為0.18mg/100g。

2 原理

試樣中的揮發(fā)性鹽基氮用高氯酸液浸提，將浸提液調(diào)至堿性，蒸餾，用硼酸吸收液吸收，再以鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，計算含量。

3 儀器與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽;分樣篩（孔徑0.45mm）;分析天平（感量0.1mg）;電爐;低速離心機(jī);微量酸式滴定管（最小分度值為0.01mL）;錐形瓶（250mL）;容量瓶（50mL）;全自動定氮儀。

4 試劑

除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的三級水。

（1）高氯酸溶液（0.6mol/L），量取高氯酸50mL，加水定容至1000mL。 （2）氫氧化鈉溶液（40g/L），稱取氫氧化鈉40G，加水溶解并稀釋至1000mL。

（3）鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液[c（HCL）≈0.01mol/L]，吸取濃鹽酸0.85mL，加水定容至1000mL，搖勻，并按照GB/T601的方法進(jìn)行標(biāo)定。

（4）硼酸吸收液（10g/L），稱取硼酸10g，溶于1000mL水中。

（5）硅油消泡劑。

（6）混合指示劑，甲基紅0.1%乙醇溶液與溴甲酚綠0.5%乙醇溶液等體積混合，臨用前配置。

（7）甲基紅指示劑（10g/L），稱取甲基紅指示劑1g，溶解于100mL95%乙醇中。

5 采樣及試樣制備

按照GB/T14699.1采樣，按照GB/T20195進(jìn)行樣品制備，粉碎后過0.45mm孔徑的分析篩，混勻密閉保存，48h內(nèi)檢測。

6 樣品準(zhǔn)備

6.1 樣品處理

稱取試樣約5g（精確至0.1mg）于錐形瓶中，加入高氯酸溶液（5.1）40mL，振搖30min均勻混合，然后將試溶液全部轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，并用高氯酸溶液（5.1）定容，搖勻;再用50mL的離心管從試樣浸提液中提取約30mL的液體，3500r/min離心5min，最后取上清液在2～6℃的環(huán)境中貯存24h后，以備后期實(shí)驗(yàn)測定。

6.2 定氮

采用全自動定氮儀，按方法參數(shù)編寫程序進(jìn)行測定。

7 滴定

用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.3）滴定至溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色為終點(diǎn)。

同時用高氯酸溶液（4.1）10.00mL代替浸提上清液進(jìn)行空白試驗(yàn)。

8 結(jié)果計算

所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)按公式（1）計算。

$x=＼frac{（V1-V0）＼timesc＼times14.01}{m＼timesV{‘}/V}＼times 100$…………………………………………………（1）

式中：

x—試樣中揮發(fā)性鹽基氮的含量，單位mg/100g;

V1—測定用樣液消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位為mL;

V0—空白時消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位為mL;

c—鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為mol/L;

V—試樣提取液定榮體積，單位為mL;

V’一試樣提取液定榮體積，單位為mL;

14.01一與1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.3）相當(dāng)于以克表示的氮的質(zhì)量;

m—試樣質(zhì)量，單位為g。

9 精密度

9.1 重復(fù)性

在重復(fù)條件下，獲得的2次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不超過這兩個測定值的算術(shù)平均值的10%。

9.2 再現(xiàn)性

在再現(xiàn)條件下，獲得的2次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不超過這2個測定值的算術(shù)平均值的15%。

10 參考引用文件

GB/T601（化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備）;GB/T6682（分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法）;GB/T14699.1（飼料采樣）;GB/T20195（動物飼料試樣的制備）;GB/T8170-2008（數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定）。

11 結(jié)束語

做植物蛋白飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定非常重要，揮發(fā)性鹽基氮含量過高時會造成養(yǎng)殖動物中毒現(xiàn)象。近年，非洲豬瘟、口蹄疫、禽流感時有發(fā)生，因此保障飼料的質(zhì)量安全，進(jìn)而保證畜牧業(yè)的質(zhì)量安全尤為重要，制訂此方法對飼料業(yè)進(jìn)行監(jiān)督、指導(dǎo)、規(guī)范非常必要。

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作者簡介：段培姿（1980-），女，河北饒陽人，研究生，衡水市農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督管理站副站長，主要從事農(nóng)業(yè)環(huán)保與農(nóng)畜產(chǎn)品檢驗(yàn)監(jiān)測工作。