康復(fù)新液對(duì)兔膝關(guān)節(jié)炎軟骨缺損模型的修復(fù)作用及機(jī)制研究

王濤 郭英 殷紅 唐曉霞 廖江龍 黃文澤 許燕飛 艾元亮 李金磊 溫輝 楊景帆

中圖分類號(hào) R684.3；R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）02-0197-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.02.11

摘 要 目的：探討康復(fù)新液對(duì)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎（KOA）軟骨缺損模型的修復(fù)作用及其機(jī)制。方法：取雄性新西蘭兔72只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組和康復(fù)新低、中、高劑量組，每組18只。采用麻醉后手術(shù)鉆孔的方式造成兔右膝關(guān)節(jié)股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨缺損模型，然后立即在軟骨缺損處進(jìn)行關(guān)節(jié)腔注射給藥，康復(fù)新低、中、高劑量組分別給予體積分?jǐn)?shù)為20%、40%、80%的康復(fù)新液，模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水，0.2 mL/kg，每3天1次持續(xù)給藥。于給藥后第4、8、12周時(shí)，觀察兔軟骨缺損傷口修復(fù)情況；于給藥完畢即刻和給藥后第4、8、12周時(shí)，結(jié)合Wakitani評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)兔軟骨缺損處修復(fù)組織進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分；于給藥后第12周，采用Masson染色法觀察兔關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的病理學(xué)變化；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兔關(guān)節(jié)液中一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化脂質(zhì)（LPO）和尿液中吡啶酚（PYD）水平。結(jié)果：給藥后第4、8、12周時(shí)，與模型對(duì)照組比較，康復(fù)新低、中、高劑量組兔軟骨缺損區(qū)修復(fù)情況較好；給藥后第4、8、12周時(shí)，與給藥完畢即刻及同時(shí)間點(diǎn)的模型對(duì)照組比較，康復(fù)新低、中、高劑量組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織形態(tài)學(xué)評(píng)分均顯著降低（P<0.05）；給藥后第12周時(shí)，與模型對(duì)照組比較，康復(fù)新低、中、高劑量組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處組織病理學(xué)程度明顯減輕；給藥后第4、8、12周時(shí)，與模型對(duì)照組比較，康復(fù)新低、中、高劑量組兔關(guān)節(jié)液中NO、LPO和尿液中PYD水平均有不同程度地降低，SOD水平均有不同程度地升高，到給藥第12周時(shí)，各指標(biāo)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：康復(fù)新液對(duì)KOA軟骨缺損模型兔的軟骨損傷具有明顯的修復(fù)作用，其作用機(jī)制主要與提高SOD表達(dá)并介導(dǎo)NO抑制軟骨細(xì)胞凋亡有關(guān)。

關(guān)鍵詞 康復(fù)新液；兔；軟骨缺損；修復(fù)作用；機(jī)制；一氧化氮；超氧化物歧化酶；過氧化脂質(zhì)；吡啶酚

ABSTRACT OBJECTIVE： To investigate the effects of Kangfuxin liquid on repairing cartilage defect model of knee osteoarthritis （KOA） in rabbits and its mechanism. METHODS： Totally 72 male New Zealand rabbits were selected and randomly divided into model control group and Kangfuxin low-dose， medium-dose， high-dose groups， with 18 rabbits in each group. A cartilage defect model of the medial femoral condyle of the right knee joint in rabbits was established by drilling after anesthesia surgery. Then the rabbits in each group were given medicine via articular cavity immediately. Kangfuxin low-dose， middle-dose and high-dose groups were given 20%， 40%， 80% Kangfuxin liquid； model control group was given constant volume of normal saline consecutively， 0.2 mL/kg， once every 3 days. At 4th， 8th， 12th week after medication， the wound repair of cartilage defect in rabbits was observed. Immediately after medication and at 4th， 8th， 12th week after medication， repaired tissue of cartilage defect in rabbits was scored histologically with Wakitani scoring standard under light microscope. At 12th week after medication， pathological changes of repaired tissue of cartilage defect in rabbits were observed by Masson staining. The levels of NO， SOD and LPO in joint fluid and PYD in urine of rabbits were detected by ELISA. RESULTS： At 4th， 8th， 12th week after medication， compared with model control group， cartilage defects in rabbits were repaired well in Kangfuxin low-dose， medium-dose and high-dose groups. At 4th， 8th， 12th week after medication， compared with immediately after medication and model control group at same time point， histomorphological score of repairing cartilage defect of knee joint in rabbits decreased significantly in Kangfuxin low-dose， medium-dose and high-dose groups （P<0.05）. At 12th week after medication， compared with model control group， the histopathology degree of cartilage defect of knee joint in rabbits was significantly alleviated in Kangfuxin low-dose， medium-dose and high-dose groups. At 4th， 8th， 12th week after medication， compared with model control group， the levels of NO and LPO in joint fluid and PYD level in urine were decreased to different extent in Kangfuxin low-dose， medium-dose and high-dose groups， while SOD level was increased to different extent； at 12th week after medication， the difference of each index has statistical significance （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： Kangangxin liquid can significantly repair cartilage defect of KOA cartilage defect model rabbits， the mechanism of which may be associated with increasing the expression of SOD and mediating NO-inhibited chondrocyte apoptosis.

KEYWORDS Kangfuxin liquid； Rabbits； Cartilage defect； Reparing effect； Mechanism； NO； SOD； LOP； PYD

膝骨性關(guān)節(jié)炎（Knee osteoarthritis，KOA）是以關(guān)節(jié)軟骨退變、骨質(zhì)硬化及增生為病理特征的一種骨關(guān)節(jié)疾病，具有高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高耐藥性的特點(diǎn)；而覆蓋在膝關(guān)節(jié)表面的膝關(guān)節(jié)軟骨由于不含血管、神經(jīng)或淋巴組織，一旦出現(xiàn)損傷，則其自愈能力相當(dāng)有限[1]。關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射藥物是治療KOA的主要方法之一，經(jīng)實(shí)踐驗(yàn)證其療效顯著[2-3]?？祻?fù)新液是以蜚蠊（俗稱蟑螂）為主藥的一種生物制劑[4]，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：蜚蠊“味、咸、寒，生川澤，治血癖癥堅(jiān)、寒熱，破積聚，喉咽痹，內(nèi)寒無子”?，F(xiàn)代藥理研究表明，康復(fù)新液在炎癥介質(zhì)誘導(dǎo)下能迅速產(chǎn)生或促使多種體液免疫因子參與抑菌，能促進(jìn)非特異免疫細(xì)胞分泌創(chuàng)傷修復(fù)因子，促進(jìn)傷口愈合，還能加快骨修復(fù)啟動(dòng)進(jìn)程[1]，但其作用機(jī)制尚未完全明確?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，骨關(guān)節(jié)炎是多種因素參與介導(dǎo)的慢性炎癥反應(yīng)，其致病因素主要與軟骨細(xì)胞凋亡有關(guān)[1]?；诖耍狙芯客ㄟ^建立兔KOA軟骨缺損模型，考察在關(guān)節(jié)腔注射康復(fù)新液對(duì)兔關(guān)節(jié)軟骨病理性改變的影響；同時(shí)，通過檢測(cè)兔關(guān)節(jié)液中的一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化脂質(zhì)（LPO）與尿液中吡啶酚（PYD）水平的變化，旨在探討康復(fù)新液防治KOA的作用機(jī)制是否與軟骨細(xì)胞凋亡有關(guān)。

1 材料

1.1 儀器

BM-Ⅶ型生物組織包埋機(jī)（湖北省宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司）；KH-Q350型切片機(jī)（河南海闊醫(yī)療器械有限公司）；64R型低溫高速離心機(jī)（美國Beckman公司）；ELx808型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（美國Bioteck公司）；CKX53型倒置顯微鏡（日本Olympus公司）；立式320L型超低溫冰箱（杭州艾普儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 藥品與試劑

康復(fù)新液（四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z51021834，規(guī)格：10 mL/瓶）；Masson三色染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：G1340）；兔NO、SOD、LPO、PYD酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（上海恪敏生物科技有限公司，批號(hào)均為H8021）；pH 7.4磷酸鹽緩沖液[PBS，賽默飛世爾科技（中國）有限公司]；其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為雙蒸水。

1.3 動(dòng)物

健康成年新西蘭兔72只，雄性，清潔級(jí)，5～6月齡，體質(zhì)量1.5～2.5 kg，購自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所[動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2013-0004，合格證號(hào)：0002777]。動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由飲食，環(huán)境溫度（22±1）℃，每天12 h光照（8：00-20：00）。

2 方法

2.1 分組、造模、給藥與取樣

取兔72只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組和康復(fù)新低、中、高劑量組，每組18只。依據(jù)改良型關(guān)節(jié)刻痕法[1，5]建立膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型：3%戊巴比妥鈉溶液經(jīng)兔耳緣靜脈麻醉（1 mL/kg），剃毛，常規(guī)消毒右下肢；沿髕骨內(nèi)緣切口，分離皮下組織，切斷內(nèi)側(cè)關(guān)節(jié)囊，暴露關(guān)節(jié)腔；膝關(guān)節(jié)過伸，向外側(cè)脫位髕骨，用2.0 mm克氏針手鉆在膝股骨內(nèi)側(cè)髁中心鉆孔（直徑：3 mm），造成兔股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨缺損；然后立即在各組兔軟骨缺損處進(jìn)行關(guān)節(jié)腔注射給藥，0.2 mL/kg，每3天1次持續(xù)給藥。按人用劑量換算后，對(duì)康復(fù)新低、中、高劑量組兔分別給予體積分?jǐn)?shù)分別為20%、40%、80%的康復(fù)新液（用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋，在超凈臺(tái)上用0.22 μm一次性濾器過濾除菌，-20 ℃保存，備用），模型對(duì)照組兔給予等體積生理鹽水。

各組兔在給藥完畢即刻和給藥后第4、8、12周時(shí)取尿液待測(cè)；同時(shí)，沿兔髕骨內(nèi)緣作縱行切口，逐層分離至關(guān)節(jié)囊，反復(fù)屈伸關(guān)節(jié)以便將關(guān)節(jié)液擠壓至髕上囊內(nèi)側(cè)，在關(guān)節(jié)液最集中處輕輕劃開關(guān)節(jié)囊，注入生理鹽水1.5 mL，反復(fù)抽吸后將關(guān)節(jié)液盡量抽出，在4 ℃下以15 000 r/min離心15 min，取上清液，保存于-80 ℃，待測(cè)。各組兔在上述時(shí)間點(diǎn)分別處死2只，剝離軟骨缺損周圍組織，在距缺損處上、下、左、右端至少1 mm左右，用鋼鋸截取標(biāo)本，進(jìn)行骨修復(fù)組織的形態(tài)學(xué)評(píng)分和病理學(xué)觀察。取材前動(dòng)物均禁食不禁水10 h。

2.2 各組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損區(qū)修復(fù)情況觀察

肉眼觀察各組兔在軟骨缺損模型制備完成后的一般情況，并分別于給藥后第4、8、12周時(shí)觀察兔軟骨缺損傷口修復(fù)情況。

2.3 各組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的形態(tài)學(xué)評(píng)分

分別于給藥完畢即刻及給藥后第4、8、12周時(shí)，在顯微鏡下對(duì)兔軟骨缺損處修復(fù)組織的軟骨厚度、基質(zhì)異染性、表面規(guī)則性以及填充軟骨與周圍軟骨的結(jié)合情況進(jìn)行觀察，并結(jié)合Wakitani 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[1，6]進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分（總分0～10分，得分越高，則表明軟骨缺損修復(fù)越差）：（1）軟骨厚度>2/3計(jì)0分，1/3～2/3計(jì)1分，<1/3計(jì)2分。（2）對(duì)軟骨組織進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色后評(píng)判基質(zhì)異染性：正常計(jì)0分，輕度減少計(jì)1分，明顯減少計(jì)2分，無異染性著色計(jì)3分。（3）表面規(guī)則性：光滑>3/4計(jì)0分，中等1/2～3/4計(jì)1分，不規(guī)則1/4～1/2計(jì)2分，特別不規(guī)則<1/4計(jì)3分。（4）填充軟骨與周圍軟骨兩邊緣結(jié)合計(jì)0分，僅一邊結(jié)合計(jì)1分，兩邊均未結(jié)合計(jì)2分。

2.4 各組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的病理學(xué)觀察

于給藥后第12周，采用經(jīng)典Masson染色法[7]對(duì)軟骨缺損處組織進(jìn)行染色。取兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處組織，石蠟包埋，切片（厚度4 μm）；切片置于載玻片上，常規(guī)脫蠟，梯度乙醇脫水；復(fù)合性染液（1%桔黃G染色液+苦味酸酶染色液）染色30 min，水洗；蘇木精核染15 min，水洗；復(fù)合性染液（麗春紅+酸性復(fù)紅染色液）染色10 min，水洗；1%磷鎢酸分化10 min，水快洗；1%亞甲藍(lán)染液染色15 min；95%乙醇分色，乙醇快速脫水；二甲苯透明，中性樹膠封片后，在顯微鏡下觀察修復(fù)組織的病理學(xué)變化。

2.5 各組兔關(guān)節(jié)液中NO、SOD、LPO和尿液中PYD水平檢測(cè)

采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兔關(guān)節(jié)液中NO、SOD、LPO和尿液中PYD水平，按相應(yīng)檢測(cè)試劑盒的說明書步驟操作。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad prism 5.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組兔一般情況及膝關(guān)節(jié)缺損區(qū)修復(fù)情況

各組兔在軟骨缺損模型建立完成后，一般情況均相對(duì)良好：傷口無紅腫，傷口周圍皮溫正常。

給藥后各組兔軟骨缺損傷口愈合情況如下：第4周時(shí)，模型對(duì)照組兔軟骨缺損傷口凹陷明顯，可見肉芽組織；康復(fù)新低、中、高劑量組兔軟骨缺損傷口均凹陷明顯，可見白色骨樣組織。給藥后第8周時(shí)，模型對(duì)照組兔軟骨缺損傷口處可見少量填充軟骨；康復(fù)新低、中劑量組兔軟骨缺損傷口處可見適量填充軟骨；康復(fù)新高劑量組兔軟骨缺損傷口處可見少量骨贅形成。給藥后第12周時(shí)，模型對(duì)照組兔軟骨缺損傷口處凹凸不平；康復(fù)新液低劑量組兔軟骨缺損區(qū)填平，表面粗糙；康復(fù)新中劑量組兔軟骨缺損區(qū)填平，但表面欠光滑；康復(fù)新高劑量組兔關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)良好，缺損區(qū)填平，且表面較光滑。

3.2 各組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的形態(tài)學(xué)評(píng)分結(jié)果

與給藥完畢即刻比較，給藥后第4、8、12周時(shí)模型對(duì)照組以及康復(fù)新低、中、高劑量組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的形態(tài)學(xué)評(píng)分均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與同時(shí)間點(diǎn)的模型對(duì)照組比較，康復(fù)新低、中、高劑量組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的形態(tài)學(xué)評(píng)分均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的形態(tài)學(xué)評(píng)分結(jié)果見表1。

3.3 各組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處組織病理學(xué)變化情況

給藥后第12周時(shí)，模型對(duì)照組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處組織的軟骨細(xì)胞少且分泌的膠原纖維很少，有大量的纖維素生成且排列紊亂；康復(fù)新低劑量組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的軟骨細(xì)胞排列紊亂，軟骨細(xì)胞分泌的膠原纖維較少；康復(fù)新中劑量組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的細(xì)胞排列相對(duì)規(guī)律，軟骨細(xì)胞較多但分泌的膠原纖維較少，纖維素較多但排列相對(duì)規(guī)律；康復(fù)新高劑量組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織的細(xì)胞排列規(guī)律，軟骨細(xì)胞多且排列規(guī)律，膠原纖維較多但纖維素明顯減少。各組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處組織病理學(xué)變化顯微圖見圖1。

3.4 各組兔關(guān)節(jié)液中NO、SOD、LPO和尿液中PYD水平檢測(cè)結(jié)果

給藥完畢即刻，各組兔關(guān)節(jié)液中NO、SOD、LPO和尿液中PYD水平組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。給藥后第4周時(shí)，與模型對(duì)照組比較，康復(fù)新各劑量組兔關(guān)節(jié)液中NO、LPO和尿液中PYD水平均有不同程度地降低，SOD水平均有不同程度地升高；其中，康復(fù)新中、高劑量組兔關(guān)節(jié)液中NO、SOD、LPO水平，以及康復(fù)新高劑量組兔尿液中PYD水平與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。給藥后第8周時(shí)，與模型對(duì)照組比較，康復(fù)新各劑量組兔關(guān)節(jié)液中NO、LPO和尿液中PYD水平均有不同程度地降低，SOD水平均有不同程度地升高；其中，康復(fù)新低、中、高劑量組兔關(guān)節(jié)液中SOD水平，以及康復(fù)新中、高劑量組兔關(guān)節(jié)液中NO、LPO和尿液中PYD水平與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。給藥后第12周時(shí)，與模型對(duì)照組比較，康復(fù)新各劑量組兔關(guān)節(jié)液中NO、LPO和尿液中PYD水平均顯著降低，SOD水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。給藥完畢即刻和給藥后第4、8、12周時(shí)各組兔關(guān)節(jié)液中NO、SOD、LPO和尿液中PYD水平檢測(cè)結(jié)果見表2～表5。

4 討論

康復(fù)新液能改善血液循環(huán)，促進(jìn)肉芽樣組織生長活躍，使成纖維母細(xì)胞相對(duì)密集，刺激骨生長因子分泌與合成，加快骨修復(fù)啟動(dòng)進(jìn)程，在骨修復(fù)啟動(dòng)階段能發(fā)揮一定作用[1]。KOA治療指南指出：化學(xué)藥可緩解KOA患者疼痛、改善關(guān)節(jié)活動(dòng)度，但不能抑制KOA的進(jìn)展，更不能修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨損傷[8-9]。而既往臨床實(shí)踐已證實(shí)，中醫(yī)藥可延緩關(guān)節(jié)軟骨退變，保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨，延緩KOA的發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，康復(fù)新液給藥后第12周時(shí)，模型對(duì)照組兔軟骨缺損傷口處凹凸不平，而康復(fù)新各劑量組兔軟骨缺損區(qū)填平或結(jié)構(gòu)恢復(fù)良好，表面粗糙或較光滑。給藥后第4、8、12周時(shí)模型對(duì)照組和康復(fù)新各劑量組兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織形態(tài)學(xué)評(píng)分均顯著降低，而康復(fù)新各劑量組的組織形態(tài)學(xué)評(píng)分較之模型對(duì)照組也顯著降低。組織病理學(xué)觀察結(jié)果顯示，給藥后第12周時(shí)，不同劑量的康復(fù)新液對(duì)軟骨缺損處軟骨細(xì)胞排列、軟骨細(xì)胞分泌膠原纖維均有影響。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，康復(fù)新液能有效促進(jìn)軟骨生長，加快KOA模型兔軟骨損傷的修復(fù)。

軟骨細(xì)胞凋亡是骨關(guān)節(jié)炎最關(guān)鍵的發(fā)病機(jī)制之一[10]。在骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展過程中，自由基的增加與細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)[11]。NO兼具信息傳導(dǎo)和細(xì)胞毒性因子功能，具有廣泛的生理作用：過量的NO會(huì)增強(qiáng)膠原酶和金屬蛋白酶活性，抑制基質(zhì)蛋白多糖合成，增加蛋白聚糖和膠原的裂解；NO水平的升高又可協(xié)同各種細(xì)胞因子發(fā)揮作用，從而抑制軟骨細(xì)胞增殖，促進(jìn)軟骨細(xì)胞糖酵解及凋亡，引起骨質(zhì)破壞，加劇骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展[12]。LPO則是自由基脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，能損傷細(xì)胞及細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，可間接反映出自由基對(duì)組織細(xì)胞的損傷程度；加之自由基的增加與細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)，因此LPO水平的升高又能從側(cè)面反映出骨關(guān)節(jié)炎炎癥程度及軟骨細(xì)胞凋亡情況[13]。SOD是體內(nèi)清除氧自由基的重要酶，能通過歧化作用清除氧自由基，保護(hù)滑膜和軟骨細(xì)胞免受損傷；SOD還能通過阻斷細(xì)胞色素C依賴的線粒體凋亡途徑來保護(hù)細(xì)胞[14]。已有研究證實(shí)，減少NO、LPO的產(chǎn)生能抑制軟骨細(xì)胞凋亡[13]，提高SOD的活性能改善軟骨細(xì)胞代謝[15]。本研究結(jié)果顯示，與給藥完畢即刻比較，給藥后各時(shí)間點(diǎn)模型對(duì)照組兔關(guān)節(jié)液中NO、LPO水平均呈升高趨勢(shì)；給予康復(fù)新液干預(yù)后，兔關(guān)節(jié)液中NO、LPO水平顯著降低，而SOD水平顯著升高。因此，筆者推測(cè)康復(fù)新液對(duì)KOA模型兔軟骨損傷的修復(fù)作用可能是通過抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)而減少自由基的產(chǎn)生，增加SOD表達(dá)從而促進(jìn)自由基的清除，最終減少自由基、抑制軟骨細(xì)胞凋亡，從而起到保護(hù)和修復(fù)軟骨組織的作用。

PYD是一種存在于軟骨中的膠原纖維連接物，也是臨床常用的骨吸收標(biāo)志物；在發(fā)生關(guān)節(jié)損傷后，膠原中的PYD會(huì)被釋放至循環(huán)系統(tǒng)中，繼而隨尿液排出，其尿液水平的升高可用于評(píng)估骨降解程度進(jìn)而判斷KOA病情進(jìn)展情況[16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與給藥完畢即刻比較，給藥后各時(shí)間點(diǎn)模型對(duì)照組兔尿液中PYD水平均呈升高趨勢(shì)；給予康復(fù)新液干預(yù)后，兔尿液中PYD水平顯著降低，表明康復(fù)新液能有效修復(fù)兔軟骨損傷。

綜上，康復(fù)新液對(duì)膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型兔的軟骨損傷具有明顯的修復(fù)作用，其作用機(jī)制主要與通過提高SOD表達(dá)并介導(dǎo)NO抑制軟骨細(xì)胞凋亡有關(guān)。

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（收稿日期：2018-06-16 修回日期：2018-12-04）

（編輯：段思怡）