鐵猝滅熒光分析法測定環(huán)丙沙星的研究與應(yīng)用

李瑜，張振新

(淮北師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，安徽淮北 235000)

環(huán)丙沙星是廣泛應(yīng)用的第三代喹諾酮類廣譜抗菌藥，屬于氟喹諾酮類，抗菌性類同諾氟沙星，其抗菌活性是目前廣泛應(yīng)用的氟喹諾酮類中最強(qiáng)者［1-2］。其作用機(jī)制是抑制細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶，干擾細(xì)菌細(xì)胞DNA的復(fù)制而殺菌。除對革蘭陰性桿菌有高度抗菌活性外，尚對葡萄球菌屬具有良好抗菌作用［3-4］。該品對部分分枝桿菌、沙眼衣原體、溶脲脲原體、人型支原體等亦具抑制作用。分子的共軛體系和剛性結(jié)構(gòu)賦予其優(yōu)異的熒光性能［5-7］。近年來，人們利用其結(jié)構(gòu)特征及其與金屬離子的配位作用和光譜性質(zhì)，對某些樣品中的環(huán)丙沙星進(jìn)行定性定量研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

環(huán)丙沙星、硫酸高鐵銨、冰乙酸、乙酸鈉均為分析純;十二烷基硫酸鈉，化學(xué)純。

FP-8500熒光光度計(jì);pHS-3C型精密pH計(jì);FA-2004型電子天平。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

在25 mL比色管中依次加入1.0 mL濃度1.0 mmol/L 的 Fe3+溶液，適量的 1.0 mmol/L 環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液，1.0 mL pH=4.5 HAc-NaAc 緩沖溶液，2.0 mL 10 g/L十二烷基硫酸鈉(SDS)，用水稀釋至刻度、搖勻。室溫放置20 min后，于 λex=275 nm，λem=441 nm處測定熒光值F，結(jié)果見圖1。

圖1 熒光光譜圖Fig.1 Fluorescence spectra

2 結(jié)果與討論

2.1 酸度的影響

溶液的酸度對體系的熒光值有一定的影響。當(dāng)溶液酸度過高或過低時，F(xiàn)e3+與環(huán)丙沙星的熒光猝滅效果不明顯，在pH=4.0～6.5范圍內(nèi)時，猝滅作用達(dá)最大，且較穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)以 pH=4.5的 HAc-NaAc的緩沖體系最佳。

2.2 表面活性劑的影響

選取十二烷基硫酸鈉(SDS)、十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)、β-環(huán)糊精(β-CD)、EDTA、阿拉伯樹膠粉5種表面活性劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果以SDS猝滅效果最好，其適宜用量范圍為 1.0～2.5 mL，選擇加入2.0 mL。

2.3 鐵離子用量選擇

實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng) Fe3+濃度在10－7～10－5mol/L 范圍內(nèi)時，對環(huán)丙沙星體系幾乎沒有猝滅作用，當(dāng)Fe3+濃度在10－2～10－4mol/L范圍內(nèi)時，環(huán)丙沙星體系猝滅效果明顯，在1.0 mmol/L時猝滅效果最好。實(shí)驗(yàn)選擇加入1.0 mmol/L Fe3+溶液1.0 mL。

2.4 試劑加入順序的影響

在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，考察了試劑的加入順序?qū)w系的熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，試劑的加入順序?qū)w系的熒光強(qiáng)度有一定的影響，以Fe3++環(huán)丙沙星+HAc-NaAc緩沖液+SDS的加入順序猝滅效果最好。

2.5 溫度的影響

在不同水浴溫度下，測定絡(luò)合物的熒光強(qiáng)度。發(fā)現(xiàn)隨溫度的升高熒光值沒有明顯的變化。為便于操作，選擇在室溫下進(jìn)行。

2.6 時間的影響及穩(wěn)定性

分別在25 min內(nèi)測定了體系的熒光值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在20 min后測定的熒光值最小，且穩(wěn)定。故實(shí)驗(yàn)選擇20 min后進(jìn)行測定，體系穩(wěn)定性至少可以保持24 h。

2.7 線性范圍、精密度和檢出限

分別加入不同量的環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定其熒光強(qiáng)度，結(jié)果見圖2。

圖2 工作曲線Fig.2 Working curve

由表2可知，環(huán)丙沙星濃度在0.4×10－6～3.6×10－6mol/L的范圍內(nèi)與熒光值ΔF呈線性關(guān)系，其線性方程為:ΔF= －0.291 6+241.122 8C，相關(guān)系數(shù) R=0.995 8，其最低檢出限為0.1 mmol/L。取10份濃度均等的環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%。

2.8 共存離子的影響

在0.8 μmol/L的環(huán)丙沙星溶液中，當(dāng)測定的相對誤差不超過±5%時，共存離子的允許存在量為(以倍數(shù)表示):葡萄糖(500倍)，淀粉(500倍)，L-谷氨酸(500倍)，草酸(400倍)，蔗糖(50倍)，苯甲酸(50倍)，VB1(50倍)，抗壞血酸(50倍)，檸檬酸(50倍)，Mn2+(10 倍)，Hg2+(50 倍)，Ba2+(50倍)，Na+(50倍)，K+(25倍)，Zn2+(10倍)，Sr2+(25倍)，Li+(10倍)，Ca2+(50倍)。

2.9 樣品分析

2.9.1 樣品的制備 分別取藥廠1、藥廠2、藥廠3生產(chǎn)的環(huán)丙沙星各1片(含量0.25 g/片)，研碎。準(zhǔn)確稱取1片量粉末于100 mL小燒杯中，用水溶解，并定容至100 mL容量瓶中。過濾，精密量取1.0 mL濾液于100 mL容量瓶中，并定容搖勻，以此液作為分析液。

2.9.2 樣品測定 分別取藥廠1、藥廠2、藥廠3的上述分析液2.0 mL于25 mL比色管中，濃度約為2×10－6mol/L，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測定，同時做回收率測定，結(jié)果見表1。

表1 樣品測定與回收結(jié)果Table 1 Sample determination and recovery results

3 結(jié)論

應(yīng)用鐵猝滅熒光分析法測定環(huán)丙沙星的含量，F(xiàn)e3+能與環(huán)丙沙星生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，使環(huán)丙沙星的內(nèi)源性熒光猝滅，使其熒光強(qiáng)度顯著減弱。此方法線性范圍較寬、操作簡單、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差較低，具有一定的實(shí)用價值。

［1］門曰利.HPLC對甲苯磺酸妥舒沙星片含量的測定分析［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3(14):161-162.

［2］劉保生，王云科，張彥青，等.鋱-環(huán)丙沙星稀土敏化熒光猝滅法測定葉酸［J］.分析化學(xué)研究簡報，2007，35(7):1067-1070.

［3］王南松，周學(xué)琴，郭長杰.紫外分光光度法測定妥舒沙星片的含量［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25(7):680.

［4］匡湘紅，周黎明，王浴生，等.司帕沙星和妥舒沙星的體內(nèi)外抗菌作用研究［J］.中國抗生素雜志，2005，30(5):289-294.

［5］嚴(yán)群芳.非離子表面活性劑的性質(zhì)及應(yīng)用［J］.貴州化工，2005，30(5):4-7，22.

［6］Samanidou V F，Demetriou C E，Papadoyannis I N.Direct determination of four fluorquinolones，enoxacin，norfloxacin，ofloxacin and ciprofloxacin in pharmaceuticals and blood serum by HPLC［J］.Anal Bioanal Chem，2003，375(5):623-629.

［7］馬紅燕，張社爭，田銳，等.鐵敏化熒光分析法測定乳酸環(huán)丙沙星的研究［J］.分析試驗(yàn)室，2008，27(12):59-61.