蛹蟲(chóng)草蟲(chóng)草素研究進(jìn)展

王長(zhǎng)文 王忠 王錦鋒 吳鴻雪

摘?要：蟲(chóng)草素是蛹蟲(chóng)草中重要的生物活性之一，具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、提高免疫力等生物功效，目前主要從蛹蟲(chóng)草相關(guān)培養(yǎng)物中提取蟲(chóng)草素。從蟲(chóng)草素的藥理作用、提取、分離純化、測(cè)定以及優(yōu)化蟲(chóng)草素的產(chǎn)量方面進(jìn)行綜述，總結(jié)蛹蟲(chóng)草蟲(chóng)草素研究進(jìn)展，并進(jìn)行相關(guān)展望。

關(guān)鍵詞：蛹蟲(chóng)草;蟲(chóng)草素;藥理作用;提取純化;產(chǎn)量

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2019.02.019

Abstract： Cordycepin is one of the important biological activities in cordyceps militaris， with the biological effects of antitumor， antiinflammation， antibacterial， antivirus and improving immunity. At present， cordycepin is mainly extracted from cordyceps militarisrelated cultures. In this paper， the pharmacological effects， extraction， separation， purification， determination and optimization of cordycepin production were reviewed. The research progress of cordycepin was summarized and the related prospects were prospected.

Key words： Cordyceps militaris; Cordycepin; Pharmacological effect; Extraction and purification; Yield

蟲(chóng)草素Cordycepin又稱冬蟲(chóng)夏草素、蟲(chóng)草菌素、蛹蟲(chóng)草菌素，是一種腺苷類物質(zhì)。別稱3′脫氧腺苷（3′deoxyadenosine），分子量為251 D，分子式組成為C10H13N5O3 ，紫外光的最大吸收波長(zhǎng)為259 nm[1-2]。蟲(chóng)草素最早是在蛹蟲(chóng)草的培養(yǎng)濾液中發(fā)現(xiàn)并定名[3]。蟲(chóng)草素既可以溶于水也可以溶于甲醇和熱乙醇，但不溶于苯、乙醚、氯仿[4]。蟲(chóng)草素作為研究對(duì)象一直以來(lái)受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的極高關(guān)注。本文對(duì)蟲(chóng)草素的相關(guān)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1?蟲(chóng)草素的藥理作用

1.1?抗腫瘤作用

蟲(chóng)草素作為蟲(chóng)草的主要生物活性之一，大量的試驗(yàn)研究證實(shí)，蟲(chóng)草素具有抗腫瘤作用，其對(duì)人的白血病細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、人鼻咽癌KB細(xì)胞、宮頸癌HeLa細(xì)胞、肉瘤S180、Lewis肺癌、鼠的B16BL6黑素瘤細(xì)胞等均能產(chǎn)生明顯的抑制作用[5-11]。因此，蟲(chóng)草素可作為抗腫瘤藥物的一種開(kāi)發(fā)方向，且蟲(chóng)草具有較高的天然安全性。

1.2?免疫調(diào)節(jié)作用

近些年有很多試驗(yàn)研究證實(shí)，蟲(chóng)草素具有免疫調(diào)節(jié)功能。有研究指出，蟲(chóng)草素能顯著提高人外周血單核細(xì)胞IL10的分泌，同時(shí)會(huì)抑制IL2的分泌，表明其具有免疫調(diào)節(jié)作用[12]。此外也有報(bào)道蟲(chóng)草素可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化[13]。

1.3?抗菌、抗病毒作用

蟲(chóng)草素作為核苷類物質(zhì)，對(duì)細(xì)菌、真菌、病毒等微生物的代謝有多重作用。有人研究了蟲(chóng)草素對(duì)侵入型念珠菌具有抗真菌活性[14]。此外有大量的報(bào)道表明，蟲(chóng)草素對(duì)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、炭疽桿菌等[15-16]均有抑制作用;對(duì)白血病病毒宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化有抑制作用;對(duì)人類皰疹病毒、腦膜炎病毒、HIV1型病毒等亦有殺傷抑制作用[17-18]。蟲(chóng)草素作為一種廣譜抗生素引起國(guó)內(nèi)外研究者的高度重視。

1.4?其他作用

有部分研究指出，蟲(chóng)草素具有抗炎癥作用。有研究表明，蟲(chóng)草素從某些方面可以干擾炎癥發(fā)生機(jī)制，從而抑制炎癥反應(yīng)[19-20]。另外，蟲(chóng)草素還具有溶血栓[21]的功效，調(diào)節(jié)血管壁[22]、抑制血小板凝集[23];蟲(chóng)草素對(duì)布魯錐蟲(chóng)有治療效果[24]。

2?蟲(chóng)草素提取方法

當(dāng)前蟲(chóng)草素獲取的途徑主要有2種：一種是生物合成途徑，是由蛹蟲(chóng)草相關(guān)培養(yǎng)中提取，包括子實(shí)體、菌絲體及發(fā)酵液;二是人工化學(xué)方法合成。對(duì)于蟲(chóng)草素人工化學(xué)合成技術(shù)，國(guó)內(nèi)外早有相關(guān)研究報(bào)道，但合成過(guò)程復(fù)雜，可重復(fù)操作性困難，原料、設(shè)備投入成本高、產(chǎn)率低[25]，且在合成過(guò)程中用到的大量有機(jī)溶劑會(huì)對(duì)環(huán)境造成不良影響，工業(yè)化生產(chǎn)難以實(shí)現(xiàn)。

蟲(chóng)草素提取方法主要有浸提法、滲漉法、超聲法、索氏提取法、回流法及超臨界萃取等。凌建亞等[26]比較其中4種方法對(duì)蟲(chóng)草素提取的影響。結(jié)果表明：浸提法耗時(shí)長(zhǎng)且提取效果一般，不利于下一步試驗(yàn)進(jìn)行。而分別調(diào)整回流提取、索氏提取及超聲法提取的作用時(shí)間均得到相近結(jié)果。但采取超聲法提取更快捷、簡(jiǎn)便，受外界干擾小，同時(shí)可減少回流前后稱重、補(bǔ)足溶劑定容所帶來(lái)的誤差。

陳偉等[27]分別利用水、乙醇、甲醇作為提取劑提取蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉中的蟲(chóng)草素，對(duì)比發(fā)現(xiàn)蒸餾水是最佳溶劑。常見(jiàn)的把超聲、微波、酶法等作為輔助提取手段。張嘉等[28]利用水熱回流法、醇熱回流法、超聲水提法、超聲波醇提法進(jìn)行試驗(yàn)，研究表明超聲波醇提法提取率最高，確定的最佳提取工藝為75%乙醇超聲波提取3次、每次40 min、料液比1∶20。夏敏等[29]利用微波法提取蟲(chóng)草素并用HPLC法測(cè)定其含量，微波法提取的最佳工藝為提取液10 mL、料液比1∶200、中火處理3 min，樣品中蟲(chóng)草素測(cè)量值達(dá)12.16 mg·g-1，且比超聲波法提取率高。殷東林等[30]以蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉為材料，提取劑為70%乙醇，然后通過(guò)正交試驗(yàn)進(jìn)一步研究，最終確定的最佳工藝為微波功率350 W、處理4 min、提取2次、料液比1∶50，提取率高達(dá)6.87%。張鳳清等[31]選用北冬蟲(chóng)夏草子座為材料進(jìn)行蟲(chóng)草素提取，結(jié)果顯示超高壓萃取效果最佳，其工藝為壓力500 MPa、容積體積分?jǐn)?shù)50%、料液比1∶75、提取時(shí)間2 min，提取率達(dá)到5.5

mg·g-1。

3?蟲(chóng)草素分離純化

自Cunningham[3]在1951年用活性炭和交換樹(shù)脂首次分離出蟲(chóng)草素以來(lái)，各種分離方法不斷涌現(xiàn)，各有利弊，不斷發(fā)展。目前常用的蟲(chóng)草素分離純化方法有多種，其中比較高效的方法有超臨界萃取法、離子交換樹(shù)脂吸附法、大孔吸附樹(shù)脂法。

離子交換樹(shù)脂吸附法關(guān)鍵在于選擇合適的離子交換樹(shù)脂。車振明等[32]用732NH4+型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂提取，但提取的蟲(chóng)草素得率較低，只有81%。毛寧等[33]采用JK006陽(yáng)離子與717陰離子交換樹(shù)脂相配合，得到純度達(dá)96.4%的蟲(chóng)草素。

大孔樹(shù)脂的選擇要與目的成分極性相似[34]。曾昱等[35]利用大孔吸附樹(shù)脂法，填料XAD16樹(shù)脂，得到的蟲(chóng)草素純度達(dá)到98%以上。劉艷芳等[36]采用NKAII型大孔樹(shù)脂分離蟲(chóng)草素，反復(fù)結(jié)晶得純度達(dá)98%以上。李學(xué)軍等[37]采用ML7大孔樹(shù)脂純化蟲(chóng)草素純度可達(dá)到92%以上。

此外，超臨界萃取技術(shù)發(fā)展迅速，陳順志等[38]利用超臨界萃取技術(shù)以蛹蟲(chóng)草人工培養(yǎng)后的發(fā)酵物為原料，獲得的蟲(chóng)草素晶體純度為50.0%～99.9%，該技術(shù)無(wú)污染，易操作，但成本高，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。

蟲(chóng)草素分離純化方法有多種，每種方法各有利弊，可多種方法聯(lián)用。徐文豪等[39]采用離子交換樹(shù)脂、大孔吸附樹(shù)脂處理和多次硅膠柱層析、薄層分離法得到核苷類物質(zhì)，蟲(chóng)草素是核苷類物質(zhì)的一種，因此也可用于蟲(chóng)草素分離[40]。

4?蟲(chóng)草素測(cè)定

蟲(chóng)草素作為一種生物活性物質(zhì)，測(cè)定含量的方法有多種。目前主要的測(cè)定方法有高效液相色譜法（HPLC）、高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）、薄層色譜法（TLCS）、TLCSHPLC聯(lián)用法。其中最常用的是高效液相色譜法（HPLC），精密度與準(zhǔn)確度高，一般采用反相色譜法，以十八烷基鍵合硅膠為固定相，流動(dòng)相有多種，采用C18填料的色譜柱，填料粒為5 mm，柱子直徑4.6 mm，柱子長(zhǎng)為150 mm和250 mm，流動(dòng)相為甲醇、水或甲醇、磷酸緩沖液，檢測(cè)波長(zhǎng)為254、259和260 nm，檢測(cè)溫度為20～40℃，柱流速為0.5～1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量5～20 L[41]。

5 ?蟲(chóng)草素產(chǎn)量提升優(yōu)化

5.1?高產(chǎn)菌種的選育

提高蟲(chóng)草素含量非常重要的措施之一就是獲得穩(wěn)定遺傳的高產(chǎn)菌株。據(jù)現(xiàn)有的研究報(bào)道，蛹蟲(chóng)草菌種選育的方法主要有化學(xué)試劑誘變、輻射誘變等。

Das等[42]采用高能離子束誘變蛹蟲(chóng)草，獲得比對(duì)照組高72%的突變株。劉金彬等[43]利用離子束、亞硝基胍及離子束亞硝基胍誘變法處理蛹蟲(chóng)草Cordyceps militaris JN168，獲得幾株較高產(chǎn)菌株，每組誘變都能提高蟲(chóng)草素產(chǎn)量，最后獲得的復(fù)合誘變菌2，經(jīng)過(guò)優(yōu)化液體發(fā)酵，產(chǎn)量提高了5倍，高達(dá)1045.65 mg·L-1。曹照平等[44]用蛹蟲(chóng)草FFCC5111 為出發(fā)菌株，通過(guò) 200 W 、22 kHz超聲強(qiáng)度聯(lián)合1% DES 復(fù)合誘變獲得突變株，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)，突變株FFCC5111c 產(chǎn)生的蟲(chóng)草素比親株提高44.5%，高達(dá)4.142 g·L-1。此外，溫魯?shù)萚45]研究航天搭載蛹蟲(chóng)草進(jìn)行誘變，蟲(chóng)草素產(chǎn)量比原始株提高了2.5倍。

5.2?優(yōu)化培養(yǎng)條件

當(dāng)前蟲(chóng)草素的生物合成途徑主要有2種：一種是固體培養(yǎng)的子實(shí)體中提取，但蟲(chóng)草素含量一般只有0.5%左右或者更低[46]，因此難以滿足市場(chǎng)需求。二是菌絲發(fā)酵液中提取，97%～98%的蟲(chóng)草素分泌在發(fā)酵液中，且液體發(fā)酵周期短，產(chǎn)量較子實(shí)體中高。

秦鵬等[47]利用響應(yīng)面法優(yōu)化蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵條件，得出蟲(chóng)草素積累量達(dá)到852.621 μg·mL-1，其優(yōu)化培養(yǎng)條件：KNO3 0.04 g、酵母浸膏1.50 g、FeSO4·7H2O 0.03 g、KH2PO4 0.2 g·mL-1、葡萄糖3.82 g、ZnSO4·7H2O 0.06 g、MgSO4·7H2O 0.13 g、維生素B1 0.08 g，（含量均是按100 mL計(jì)）;同等條件下，發(fā)酵8 d、靜置10 d后，蟲(chóng)草素積累量高達(dá)936.225 μg·mL-1。湯佳鵬等[48]研究蛹蟲(chóng)草表面液體發(fā)酵結(jié)果表明組合使用0.55 mg·L-1三十烷醇、22.64 mg·L-1 赤霉素與 1.69 mg·L-1 ?6芐基腺嘌呤的組合是最有利于蟲(chóng)草素積累的組合，蟲(chóng)草素最大產(chǎn)量達(dá)到 7.31 g·L-1。閆瑞等[49]研究在蛹蟲(chóng)草FFCC5111液體發(fā)酵添加前體物，結(jié)果表明，添加腺苷、苯丙氨酸、腺嘌呤、甘氨酸和L谷氨酰胺均可提高蟲(chóng)草素產(chǎn)量，其中添加腺苷1.5 g·L-1的發(fā)酵液中蟲(chóng)草素產(chǎn)量最高，為772.5 mg·L-1，是對(duì)照組的9.39倍。據(jù)秦鵬、王龍等[50]的專利，利用腺嘌呤補(bǔ)料公式配比補(bǔ)料發(fā)酵液，其優(yōu)化配方：葡萄糖35 g、蛋白胨17 g、腺嘌呤2 g、甘氨酸14 g、KH2PO4 1 g、MgSO4·7H2O 1 g、pH值自然，制得發(fā)酵濾液蟲(chóng)草素產(chǎn)量達(dá)到 956.020 μg·mL-1，對(duì)照提高了535.66%。Masuda等[51]在基本培養(yǎng)基中加入1 g·L-1腺嘌呤和16 g·L-1氨基乙酸，使得蟲(chóng)草素產(chǎn)量提高了4.1倍。陳長(zhǎng)蘭等[52]分析了蛹蟲(chóng)草液體搖瓶過(guò)程中分別添加20種含量0.2 g·100-1 mL的氨基酸，結(jié)果表明精氨酸、組氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸及丙氨酸的添加對(duì)蟲(chóng)草素產(chǎn)量增加。周思靜等[53]研究在蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基中加入金屬離子，結(jié)果表明添加Mn2+、Ca2+、Mg2+能夠顯著（P<0.05）提高蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)胞外蟲(chóng)草素產(chǎn)量，最適濃度分別是0.05、0.6、1.0 g·L-1。阮元等[54]研究了添加不同濃度的維生素B1、B6和2，4D到常規(guī)培養(yǎng)基中，結(jié)果顯示中維生素B1和B6 的最佳添加濃度均為 0.83 g·L-1，2，4D 的最佳添加濃度為 0.015 mg·mL-1，此外還對(duì)比了滅菌前、后各添加維生素 B1，發(fā)現(xiàn)滅菌前的比滅菌后的蟲(chóng)草素產(chǎn)量提高了19.9%。表明維生素B1的分解產(chǎn)物對(duì)蟲(chóng)草素合成有促進(jìn)作用。蔡水淋等[55]通過(guò)設(shè)計(jì)優(yōu)化蛹蟲(chóng)草液體深層發(fā)酵工藝，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無(wú)機(jī)鹽FeSO4對(duì)蟲(chóng)草素產(chǎn)量影響最顯著。

6?總結(jié)與展望

現(xiàn)代研究已表明，蟲(chóng)草素具有多重藥理作用，包括抗菌、消炎、抗腫瘤、抗病毒、提升人體免疫力等功效，因此，在食品、醫(yī)藥、保健品等方面都有著巨大的開(kāi)發(fā)價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)前景。蟲(chóng)草素自被發(fā)現(xiàn)有特殊的功效以來(lái)，引起國(guó)際上的專家學(xué)者的極大關(guān)注，對(duì)其研究也是多方面的，包括有提取制備、生物活性、藥用價(jià)值、作用機(jī)理以及開(kāi)發(fā)應(yīng)用等[25]。蟲(chóng)草素提取制備主要研究高效的提取方法，以期更多的產(chǎn)量和更高的純度。蟲(chóng)草素療效顯著，但大量分離獲得純品比較困難，導(dǎo)致市場(chǎng)蟲(chóng)草素價(jià)格非常昂貴。蟲(chóng)草素的合成途徑復(fù)雜，目前的研究報(bào)道絕大多數(shù)是利用生物合成途徑，主要以發(fā)酵菌絲的方式來(lái)獲取。但是以傳統(tǒng)的方法發(fā)酵菌絲蟲(chóng)草素產(chǎn)量低下，不能滿足市場(chǎng)需求。因此，優(yōu)化培養(yǎng)發(fā)酵條件，縮短周期，獲得更高產(chǎn)的產(chǎn)蟲(chóng)草素的培養(yǎng)方式是將來(lái)發(fā)展的方向。市場(chǎng)上有著很多蟲(chóng)草素開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品，只要是對(duì)人類健康有益的都會(huì)被接受，有重要的社會(huì)意義?？傊?，蟲(chóng)草素的研究與開(kāi)發(fā)已取得喜人的成就，隨著技術(shù)發(fā)展會(huì)有更廣闊的市場(chǎng)前景。

參考文獻(xiàn)：

[1]焦彥朝，梁宗琦，劉愛(ài)英.蟲(chóng)草生物活性物質(zhì)研究概況[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，1990（3）：53-54.

[2]彭俊峰，凌建亞，張晗星，等.蟲(chóng)草素與DNA作用的光譜研究[J].光譜學(xué)與光譜分析，2004（7）：858-861.

[3]CUNNINGHAM K G， HUTCHINSON S A， WILLIAM MANSON ，et al.Cordycepin， a metabolic product from cultures of Cordyceps militaris（Linn.） link. Part I.Isolation and characterisation[J].Journal Of The Chemical Society （Resumed），1951，10：2299-2300.

[4]李婧，姜漢英.蟲(chóng)草素的體內(nèi)代謝特點(diǎn)及藥理作用[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)（中醫(yī)中藥分冊(cè)），2005（5）：283-284.

[5]NAKAMURA K， YOSHIKAWA N， YAMAGUCHI Y， et al.Antitumor effect of Cordycepin （3′deoxyadenosine） on mouse melanoma and lung carcinoma cells involves adenosine A3 receptor stimulation[J].Anticancer research， 2006，6（1A）：43-47.

[6]李婧，何肇晴，龔皓，等.國(guó)產(chǎn)蟲(chóng)草素對(duì)Hela細(xì)胞MMP9、TIMP1及TIMP1 mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2009，17（9）：1615-1618.

[7]LIAO Y， LING J， ZHANG G， et al.Cordycepin induces cell cycle arrest and apoptosis by inducing DNA damage and upregulation of p53 in Leukemia cells[J].Cell Cycle， 2015， 14（5）：11.

[8]SEONG DA B，HONG S，MUTHUSAMI S，et al.Cordycepin increases radiosensitivity in cervical cancer cells by overriding or prolonging radiationinduced G2/M arrest[J].European Journal of Pharmacology， 2016， 771：77-83.

[9]張超，鐘沁，張錫峰，等.蟲(chóng)草素對(duì)A549細(xì)胞增殖、凋亡及核轉(zhuǎn)錄因子NFκB活性的影響[J].中藥材，2015，38（4）：786-789.

[10]SHAO L， HUANG L， YAN S， et al.Cordycepin induces apoptosis in human liver cancer HepG2 cells through extrinsic and intrinsic signaling pathways[J].Oncology Letters， 2016，12（2）：995-1000.

[11]吳洪臻， 江偉， 馬德恩.蟲(chóng)草素對(duì)小鼠S180瘤抑制作用研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2000，11（10）：873-874.

[12]ZHOU X， MEYER C U， SCHMIDTKE P， et al.Effect of cordycepin on interleukin10 production of human peripheral blood mononuclear cells[J].European Journal of Pharmacology， 2002， 453（2-3）：309-317.

[13]DE JONG E C， SMITS H H， VAN CAPEL T M M.Cordycepin or cholera toxin B prime for mature dendritic cells that drive the development of regulatory T cells[C]. In 8th International Symposium on Dentritic Cells，2004：17-21.

[14]SUGAR A M， MCCAFFREY R P.Antifungal Activity of 3′Deoxyadenosine （Cordycepin）[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy， 1998， 42（6）：1424-1427.

[15]潘傳江，丁杰，盛玉萍，等.提取劑對(duì)蛹蟲(chóng)草中蟲(chóng)草素提取產(chǎn)率的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（8）：185-188.

[16]蔣寧，劉紅錦，劉芳，等.蟲(chóng)草菌素研究與開(kāi)發(fā)的現(xiàn)狀與前景[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，23（1）：121-123.

[17]李虎臣，孫平，馮成強(qiáng).蛹蟲(chóng)草中活性成分蟲(chóng)草素的研究進(jìn)展[J].井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，31（2）：93-96.

[18]胡賢達(dá)，岳穎，武鵬，等.蟲(chóng)草素藥理作用研究及展望[J].中國(guó)生化藥物雜志，2015（12）：180-182.

[19]KIM H G， SHRESTHA B， LIM S Y， et al.Cordycepin inhibits lipopolysaccharideinduced inflammation by the suppression of NFκB through Akt and p38 inhibition in RAW 264.7 macrophage cells[J].European journal of pharmacology， 2006， 545（2-3）：192-199.

[20]KIM H， NAURA A S， ERRAMI Y， et al.Cordycepin blocks lung injuryassociated inflammation and promotes BRCA1deficient breast cancer cell killing by effectively inhibiting PARP[J].Molecular medicine， 2011， 17（9-10）： 893.

[21]吳勇，陳衛(wèi)東.蛹蟲(chóng)草藥理作用研究概述[J].中國(guó)藥師，2011，14（5）：732-734.

[22]CHANG W， LIM S， SONG H， et al.Cordycepin inhibits vascular smooth muscle cell proliferation[J].European journal of pharmacology， 2008， 597（1-3）：64-69.

[23]CHO H J， CHO J Y， RHEE M H， et al.Inhibitory effects of cordycepin （3′deoxyadenosine）， a component of Cordyceps militaris， on human platelet aggregation induced by thapsigargin[J].Journal of microbiology and biotechnology， 2007， 17（7）： 1134-1138.

[24]MASER P， VOGEL D， SCHMID C， et al.Identification and characterization of trypanocides by functional expression of an adenosine transporter fromTrypanosoma bruceiin yeast[J].Journal of Molecular Medicine， 2001， 79（2-3）：121-127.

[25]買爾哈巴·艾合買提，古麗·艾合買提，楊新平.產(chǎn)蟲(chóng)草素真菌資源的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用前景[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2015，27（7）：1317-1323.

[26]凌建亞，孫迎節(jié)，呂鵬，等.蟲(chóng)草屬真菌中蟲(chóng)草素的超聲波提取及其毛細(xì)管電泳測(cè)定[J].菌物系統(tǒng)，2002（3）：394-399.

[27]陳偉，吳畏，高新華，等.采用柱層析分離與富集蟲(chóng)草素研究[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006（4）：69-71.

[28]張嘉，李多偉，任靜，等.正交試驗(yàn)提取蟲(chóng)草素的工藝研究.中國(guó)新醫(yī)藥，2004，3（2）：34-35.

[29]夏敏，溫魯.微波法提取蟲(chóng)草素研究[J].食品科學(xué)，2006（10）：248-251.

[30]殷東林，陳瓊，孫偉.蛹蟲(chóng)草蟲(chóng)草素提取工藝的研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，54（18）：4560-4562.

[31]張鳳清，趙麗，劉美善，等.北冬蟲(chóng)夏草蟲(chóng)草素提取工藝研究[J].食用菌，2017，39（5）：79-81.

[32]車振明.人工蛹蟲(chóng)草子實(shí)體及大米培養(yǎng)基殘基中蟲(chóng)草素的提取純化方法[J].食用菌，2004，26（4）：40-41.

[33]毛寧，張麗艷，張鳳梅，等.離子交換樹(shù)脂分離純化蟲(chóng)草素的工藝條件研究[J].物生物技術(shù)，2010（5）：400-403.

[34]張慧芳，李嬛.大孔吸附樹(shù)脂在生物堿純化方面的應(yīng)用[J].中國(guó)藥業(yè)，2011，20（16）：15-17.

[35]曾昱，陳作紅.大孔樹(shù)脂柱層析法提取蛹蟲(chóng)草廢棄培養(yǎng)基中的蟲(chóng)草素[J].湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（3）：66-69.

[36]劉艷芳，唐慶九，楊焱，等.大孔樹(shù)脂分離純化發(fā)酵液中蟲(chóng)草素的研究[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)， 2011，30（4）：627-631.

[37]李學(xué)軍，都興范，王林美，等.蛹蟲(chóng)草中蟲(chóng)草素的提取及純化工藝研究[J].生物技術(shù)，2012，22（5）：75-78.

[38]陳順志.一種超臨界萃取蟲(chóng)草脫氧核苷的生產(chǎn)方法，CN1339440[P].2002.

[39]徐文豪，薛智，馬建民.冬蟲(chóng)夏草的水溶性成分——核苷類化合物的研究[J].中國(guó)中藥雜志，1988，13（4）：34.

[40]馬健生，孫軍德.蛹蟲(chóng)草中蟲(chóng)草素的提取與純化工藝研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（5）：1929-1931.

[41]楊濤，董彩虹.蟲(chóng)草素的研究開(kāi)發(fā)現(xiàn)狀與思考[J].菌物學(xué)報(bào)，2011，30（2）：180-190.

[42]DAS S K， MASUDA M， HATASHITA M， et al.A new approach for improving cordycepin productivity in surface liquid culture of Cordyceps militaris using highenergy ion beam irradiation[J].Letters in applied microbiology， 2008， 47（6）： 534-538.

[43]劉金彬，沈建增，蔡宇杰，等.蛹蟲(chóng)草Cordyceps militaris JN168菌株的誘變育種及液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)蟲(chóng)草素[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2015，34（8）：806-813.

[44]曹照平，周廣麒，楊吉祥，等.高產(chǎn)蟲(chóng)草素Cordyceps militaris菌的誘變育種[J].大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，34（6）：412-416.

[45]溫魯，張誠(chéng)，夏敏，等.蛹蟲(chóng)草航天搭載對(duì)活性成分含量的影響[J].食品科學(xué)，2008（5）：382-384.

[46]孫詩(shī)清，李多偉，任靜，等.RPHPLC測(cè)定不同產(chǎn)地人工蛹蟲(chóng)草中蟲(chóng)草素的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2005，20（6）：244-245.

[47]秦鵬，王龍，趙玉卉，等.響應(yīng)面法優(yōu)化蛹蟲(chóng)草菌絲液體發(fā)酵產(chǎn)蟲(chóng)草素培養(yǎng)基[J].食品工業(yè)科技，2016，37（8）：185-190.

[48]湯佳鵬，汪建雄.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑促進(jìn)蛹蟲(chóng)草液體表面培養(yǎng)生產(chǎn)蟲(chóng)草素[J].食品工業(yè)科技，2018，39（10）：122-127.

[49]閆瑞，周廣麒.添加前體物對(duì)蟲(chóng)草素產(chǎn)量的影響及動(dòng)力學(xué)特征[J].大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，35（5）：321-324.

[50]秦鵬，王龍.一種提高蛹蟲(chóng)草菌液體發(fā)酵蟲(chóng)草素產(chǎn)量的方法：， CN107604026A[P].?2018.

[51]MASUDA M， URABE E， SAKURAI A， et al.Production of cordycepin by surface culture using the medicinal mushroom Cordyceps militaris[J].Enzyme & Microbial Technology， 2007， 40（5）：1199-1205.

[52]陳長(zhǎng)蘭，孟程程，佟麗，等.不同種類氨基酸對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲體生長(zhǎng)和蟲(chóng)草素含量的影響[J].食品科學(xué)，2012，33（23）：236-239.

[53]周思靜，劉桂君，王平，等.金屬離子對(duì)蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)產(chǎn)胞外蟲(chóng)草素產(chǎn)量的影響[J].食品工業(yè)科技，2015，36（16）：213-216.

[54]阮元，馬進(jìn)川，薛元，等.維生素B1、B6和生長(zhǎng)激素2，4D對(duì)蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵蟲(chóng)草素產(chǎn)量的影響[J].菌物學(xué)報(bào)，2014，33（2）：477-482.

[55]蔡水淋，鄭永標(biāo)，王明茲， 等.響應(yīng)面法優(yōu)化蛹蟲(chóng)草深層培養(yǎng)產(chǎn)菌絲及蟲(chóng)草素的發(fā)酵工藝[J].農(nóng)產(chǎn)品加工·學(xué)刊，2013，（3）：13-18，21.

（責(zé)任編輯：劉新永）