HMGB1與胃癌組織血管形成的關(guān)系及其臨床意義

舒旭 蔣婷 李姿萱

摘要：目的? 確定高遷移率族蛋白B1與胃癌組織血管生成之間的聯(lián)系，篩選胃癌診斷和治療的靶點(diǎn)。方法? 收集2008年6月～2016年6月懷化市第一人民醫(yī)院病理科正常胃、胃癌旁、胃癌癌組織蠟塊共105例，采用常規(guī)HE染色（蘇木素-伊紅）、免疫組織化學(xué)染色（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法-SP法），檢測(cè)正常胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中HMGB1的表達(dá)情況、檢測(cè)人造血祖細(xì)胞抗原（CD34）的表達(dá)情況來反映正常胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中的微血管密度（MVD），統(tǒng)計(jì)學(xué)分析HMGB1的表達(dá)與胃癌組織MVD之間存在的相關(guān)性。結(jié)果? 正常胃組織HMGB1的陽性表達(dá)率低，胃癌癌旁組織HMGB1的陽性表達(dá)率增高、胃癌組織中HMGB1的陽性表達(dá)率最高，在三種組織中HMGB1的表達(dá)存在差異（P<0.05）;HMGB1的表達(dá)水平與MVD表現(xiàn)出正相關(guān)性（r=0.205，P<0.05）。結(jié)論? HMGB1在胃組織、胃癌旁組織、胃癌組織中的表達(dá)呈階梯型增高，胃癌組織中HMGB1的表達(dá)水平與組織MVD成正相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：胃癌;血管生成;HMGB1;CD34

中圖分類號(hào)：R735.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.15.024

文章編號(hào)：1006-1959（2019）15-0077-03

Abstract：Objective? To determine the relationship between high mobility group protein B1 and angiogenesis in gastric carcinoma， and to screen the target of diagnosis and treatment of gastric carcinoma. Methods? A total of 105 cases of normal stomach， gastric carcinoma and gastric carcinoma tissue were collected from June 2008 to June 2016 in the Department of Pathology， First People's Hospital of Huaihua City， using conventional HE staining （hematoxylin-eosin） and immunohistochemical staining. Streptomyces avidin-peroxidase-linked-SP method， detecting the expression of HMGB1 in normal gastric tissue， para-cancerous tissues and gastric carcinoma tissues， and detecting the expression of human hematopoietic progenitor antigen （CD34） to reflect normal Microvessel density （MVD） in gastric tissue， paracancerous tissues and gastric carcinoma tissues， and statistical analysis of the correlation between HMGB1 expression and MVD in gastric carcinoma tissues.Results? The positive expression rate of HMGB1 in normal gastric tissue was low， the positive expression rate of HMGB1 in gastric carcinoma tissues was increased， and the positive expression rate of HMGB1 was the highest in gastric carcinoma tissues. The expression of HMGB1 was different in three tissues （P<0.05）. The expression level of HMGB1 was positively correlated with MVD （r=0.205，P<0.05）.Conclusion? The expression of HMGB1 in gastric tissue， paracancerous tissues and gastric carcinoma tissues is increased stepwise. The expression level of HMGB1 in gastric carcinoma tissues is positively correlated with tissue MVD.

Key words：Gastric carcinoma;Angiogenesis;HMGB1;CD34

胃癌（gastric carcinoma）在消化道疾病中很常見，是由于胃黏膜上皮細(xì)胞惡變產(chǎn)生，對(duì)患者危害程度很高[1]，其臨床癥狀沒有特異性，與胃的其他慢性疾病難鑒別，提高胃癌的早期診斷率成為臨床上迫切需要解決的問題。研究表明[2]，許多腫瘤組織中，高遷移率族蛋白B1（HMGB1）的表達(dá)是增高的，它可能通過血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)腫瘤血管的形成。血管供血是腫瘤組織細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[3]。VEGF能讓血管管壁通透性增高，導(dǎo)致血漿滲出形成腹水或水腫，影響細(xì)胞外基質(zhì)，參與血管的形成的過程[4]。除此之外，HMGB1還可以通過誘導(dǎo)局部組織產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，促進(jìn)反應(yīng)區(qū)域組織修復(fù)和血管新生，是由于血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的過程中有HMGB1的參與[5]。本研究通過檢測(cè)HMGB1在正常胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中的蛋白表達(dá)以及微血管密度（MVD）的測(cè)定，探討胃組織、胃癌旁組織、胃癌組織中HMGB1的表達(dá)情況，以及胃組織、胃癌旁組織、胃癌組織中HMGB1的表達(dá)情況與組織MVD之間的相關(guān)性。

1材料和方法

1.1標(biāo)本? 收集2008年6月～2016年6月懷化市第一人民醫(yī)院病理科正常胃、胃癌旁、胃癌癌組織蠟塊共105例，其中正常胃組織蠟塊10例，胃癌旁組織蠟塊32例，胃癌組織蠟塊63例。

1.2試劑和儀器? HMGB1免疫組化試劑盒，采購自北京博奧森公司，PBS檸檬酸鹽緩沖液，切片機(jī)，烤片機(jī)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1組織切片的制作? 選取的標(biāo)本每個(gè)切取5張白片，4張免疫組化備用，1張HE染色。

1.3.2免疫組化? 4張白片進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，步驟和方法（參考北京博奧森公司生產(chǎn)的HMGB1免疫組化試劑盒說明書）。陽性對(duì)照用已知HMGB1及CD34陽性表達(dá)的組織進(jìn)行，陰性對(duì)照為PBS代替一抗來進(jìn)行。細(xì)胞核或細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒作為染色陽性判定標(biāo)準(zhǔn)[6]。MVD計(jì)數(shù)方法：隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野，統(tǒng)一血管數(shù)量，取其平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析? 統(tǒng)計(jì)方法為顯著性檢驗(yàn)的？字2檢驗(yàn)，HMGB1與MVD的相關(guān)性分析應(yīng)用Spearman相關(guān)分析進(jìn)行檢驗(yàn)，所有分析均SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，按α=0.05水準(zhǔn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 HMGB1在胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中的表達(dá)? HMGB1在胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織（圖1）中的陽性表達(dá)率分別為10.00%、46.87%和88.89%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 HMGB1表達(dá)與CD34標(biāo)記的微血管的相關(guān)性? 腫瘤組織細(xì)胞高度異型區(qū)微血管密度高（圖2）。Sperman相關(guān)分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析HMGB1表達(dá)與MVD的相關(guān)性，表明HMGB1的表達(dá)與MVD正相關(guān)（r=0.205，P<0.05），見表2。

3討論

腫瘤組織內(nèi)新生血管有很多生成機(jī)制，而血管量的增多使腫瘤組織繼續(xù)生長(zhǎng)，導(dǎo)致其惡性行為的發(fā)生。胃癌腫瘤組織的生長(zhǎng)與血供直接相關(guān)，血管的數(shù)量是其發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵點(diǎn)[7]。因?yàn)槟[瘤組織細(xì)胞生長(zhǎng)速度很快，細(xì)胞增殖過程中會(huì)出現(xiàn)缺氧，可以通過促進(jìn)血管的生成和增強(qiáng)腫瘤組織細(xì)胞對(duì)缺氧的耐受來適應(yīng)缺氧環(huán)境，在這個(gè)過程中有包括HMGB1在內(nèi)的多種因子的參與[8]。HMGB1作為非組蛋白染色體蛋白，具有較高的非特異性親和力，參與DNA轉(zhuǎn)錄調(diào)控。目前的研究結(jié)果表明[9]，胞外HMGB1可與受體結(jié)合，主要通過晚期糖基化終產(chǎn)物受體的結(jié)合[10]，刺激其他細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的復(fù)合生物效應(yīng)，包括炎癥、刺激反應(yīng)、神經(jīng)生長(zhǎng)。D細(xì)胞增殖、分化、遷移等。

近年來研究表明[11]，HMGB1可通過Janus激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子（JAK/STAT）信號(hào)通路調(diào)節(jié)促進(jìn)炎癥反應(yīng)，而這種對(duì)炎癥反應(yīng)的促進(jìn)作用可能與HMGB1的高表達(dá)能促進(jìn)腫瘤血管生成。STAT在多種惡性腫瘤中高表達(dá)[12]，但在正常組織和細(xì)胞中很少或沒有激活。HMGB1作為STAT信號(hào)通路中可能的調(diào)控因子，與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。HMGB1與晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）的結(jié)合，RAGE是HMGB1的主要受體，與HMGB1具有高親和力?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)[13]，HMGB1和RAGE共表達(dá)可影響腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的程度，并且可以干擾細(xì)胞內(nèi)外的信號(hào)調(diào)節(jié)，影響腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。HMGB1和Toll樣受體除了RAGE、Toll樣受體TLR2和TLR4還可以作為HMGB1受體，并且可以與它們的相互作用相互作用以誘導(dǎo)細(xì)胞活化，這與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)[14]。TLR是一種重要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，參與TLR介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，在HMGB1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。HMGB1聯(lián)合TLR激活NF-κB，參與腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[15]。

HMGB1在腫瘤生長(zhǎng)過程中促進(jìn)血管生成可能與以下機(jī)制有關(guān)：①HMGB1可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等促血管生成因子的表達(dá);②HMGB1通過增加基質(zhì)金屬蛋白酶-9的活性，讓正常組織的組織學(xué)屏障被破壞，促進(jìn)了腫瘤血管的生成;③HMGB1能夠?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡產(chǎn)生抑制，促進(jìn)腫瘤血管的生成。

本研究發(fā)現(xiàn)，在正常胃組織、胃癌旁組織、胃癌組織中HMGB1的表達(dá)呈明顯上調(diào)的趨勢(shì)，說明HMGB1可能在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)、介導(dǎo)腫瘤血管的形成過程中發(fā)揮了作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，正常胃組織中的微血管密度值小，胃癌旁組織中微血管密度值增大;微血管密度在胃癌組織中最高，而且這些組織的微血管密度值與HMGB1的表達(dá)表現(xiàn)出了同步性和相關(guān)性，提示HMGB1與胃癌組織中血管的生成關(guān)系密切，它們的檢測(cè)對(duì)臨床胃癌的病理診斷有一定意義。近年研究表明，多種腫瘤細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)HMGB1蛋白表達(dá)，HMGB1 已成為與腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及與血管生成有密切關(guān)系的染色質(zhì)蛋白。在腫瘤中，HMGB1可通過其受體激活一系列信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，因此HMGB1為腫瘤的抑制和治療提供了新的靶點(diǎn)。目前，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制尚不完全清楚，這些問題有待進(jìn)一步研究并可能腫瘤防治提供新的理論依據(jù)和控制方向。

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收稿日期：2019-5-30;修回日期：2019-6-10

編輯/楊倩